多肽知识讲诉

将固相合成与其他技术分开来的最主要的特征是固相载体， 能用于多肽合成的固相载体必须满足如下要求：必须包含反应 位点（或反应基团），以使肽链连在这些位点上，并在以后除 去；必须对合成过程中的物理和化学条件稳定；载体必须允许 在不断增长的肽链和试剂之间快速的、不受阻碍的接触；另外， 载体必须允许提供足够的连接点，以使每单位体积的载体给出 有用产量的肽，并且必须尽量减少被载体束缚的肽链之间的相 互作用。 用于固相法合成多肽的高分子载体主要有三类：聚苯乙烯 -苯二乙烯交联树脂、聚丙烯酰胺、聚乙烯-乙二醇类树脂及衍 生物，这些树脂只有导入反应基团，才能直接连上（第一个） 氨基酸。根据所导入反应基团的不同，又把这些树脂及树脂衍 生物分为氯甲基树脂、羧基树脂、氨基树脂或酰肼型树脂。
对于合成含有半胱氨酸、组氨酸、精氨酸等带侧链功能基的 氨基酸的肽来说，为了避免由于侧链功能团所带来的副反应，一 般也需要用适当的保护基将侧链基团暂时保护起来。保护基的选 择既要保证侧链基团不参与形成酰胺的反应，又要保证在肽合成 过程中不受破坏，同时又要保证在最后肽链裂解时能被除去。如 用三苯甲基保护半胱氨酸的S-，用酸或银盐、汞盐除去；组氨酸 的咪唑环用2,2,2-三氟-1-苄氧羰基和2,2,2-三氟-1-叔丁氧羰基乙 基保护，可通过催化氢化或冷的三氟乙酸脱去。精氨酸用金刚烷 氧羰基（Adoc）保护，用冷的三氟乙酸脱去。 固相中的接肽反应原理与液相中的基本一致，将两个相应的 氨基被保护的及羧基被保护的氨基酸放在溶液内并不形成肽键， 要形成酰胺键，经常用的手段是将羧基活化，变成混合酸酐、活 泼酯、酰氯或用强的失去剂（如碳二亚氨）形成对称酸酐等方法 来形成酰胺键。其中选用DCC、HOBT或HOBT/DCC的对称酸酐 法、活化酯法接肽应用最广。
多肽的基本知识
多肽定义： 多肽是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是 蛋白质水解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合 物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由三个或 三个以上氨基酸分子脱水缩合而成的化合物都可以成为叫多肽。
多肽合成： 固相合成法，液相合成法
树脂的选择及氨基酸的固定
百度文库
氨基、羧基、侧链的保护及脱除
要成功合成具有特定的氨基酸顺序的多肽，需要对暂不参与 形成酰胺键的氨基和羧基加以保护，同时对氨基酸侧链上的活性 基因也要保护，反应完成后再将保护基因除去。同液相合成一样， 固相合成中多采用烷氧羰基类型作为α氨基的保护基，因为这样 不易发生消旋。最早是用苄氧羰基，由于它需要较强的酸解条件 才能脱除，所以后来改为叔丁氧羰基（BOC）保护，用TFA（三 氟乙酸）脱保护，但不适用含有色氨酸等对酸不稳定的肽类的合 成。changMeienlofer和Atherton等人采用Carpino报道的 Fmoc(9-芴甲氧羰基)作为α氨基保护基，Fmoc基对酸很稳定，但 能用哌啶-CH2CL2或哌啶-DMF脱去，近年来，Fmoc合成法得到 了广泛的应用。羧基通常用形成酯基的方法进行保护。甲酯和乙 酯是逐步合成中保护羧基的常用方法，可通过皂化除去或转变为 肼以便用于片断组合；叔丁酯在酸性条件下除去；苄酯常用催化 氢化除去。
裂解及合成肽链的纯化 BOC法用TFA+HF裂解和脱 侧链保护基，FMOC法直接用TFA，有时根据条件不同， 其它碱、光解、氟离子和氢解等脱保护方法也被采用。合 成肽链进一步的精制、分离与纯化通常采用高效液相色谱、 亲和层析、毛细管电泳等。
侧链的保护
Asp和Glu Asp和Glu侧链羧基常用t-Bu保护.可用TFA、TMSBr等脱除. 但是用t-Bu保护仍有侧链环化形成酰亚胺的副反应发生.近年来， 发展了一些新的保护基如环烷醇酯、金刚烷醇酯等可减轻这一 副反应，这些保护基可用TMSOTf(三氟甲磺酸三甲硅烷酯)除去。 Asn和Gln Asn和Gln侧链的酰胺键在肽合成中一般不加以保护.但合成 大肽时，Asn和Gln的α-羧基活化时可能会发生分子内脱氢反应 生成氰基化合物.碱性时Gln的侧链可以环化生成酰胺.而且不保 护的Fmoc-Gln和Fmoc-Asn在DCM中溶解度很差.为了避免这些 问题，可以用9-咕吨基，2，4，6-三甲氧苄基，4，4′―二甲氧 二苯甲基或三苯甲基等保护，这四种基因均可用TFA脱除。
BOC合成法通常选择氯甲基树脂，如Merrifield树脂； FMOC合成法通常选择羧基树脂如王氏树脂。氨基酸的固定主 要是通过保护氨基酸的羧基同树脂的反应基团之间形成的共价 键来实现的，形成共价键的方法有多种：氯甲基树脂，通常先 制得保护氨基酸的四甲铵盐或钠盐、钾盐、铯盐，然后在适当 温度下，直接同树脂反应或在合适的有机溶剂如二氧六环、 DMF或DMSO中反应；羧基树脂，则通常加入适当的缩合剂 如DCC或羧基二咪唑，使被保护氨基酸与树脂形成共酯以完 成氨基酸的固定；氨基树脂或酰肼型树脂，却是加入适当的缩 合剂如DCC后，通过保护氨基酸与树脂之间形成的酰胺键来 完成氨基酸的固定。
Ser、Thr和Tyr ser、Thr的羟基及Tyr的酚羟基通常用t-Bu保护.叔丁基的引 入比较麻烦，首先ser制成苄氧羰基酯，再在酸催化下与异丁烯 反应.Ser和Thr还可用苄基保护，Ser用苄醇引入苄基、Thr用溴 苄引入苄基。 His His是最容易发生消旋化的氨基酸，必须加以保护.对咪唑环 的非π-N开始用苄基(Bzl)和甲基磺酰基(TOS)保护.但这两种保护 基均不太理想.TOS对亲核试剂不稳定，Bzl需要用氢解或 Na/NHs除去，并且产生很大程度消旋.Boc基团是一个较理想的 保护基，降低了咪唑环的碱性，抑制了消旋，成功地进行了一 些合成.但是当反复地用碱处理时，也表现出一定的不稳定性.哌 啶羰基在碱中稳定，但是没能很好地抑制消旋，而且脱保护时 要用很强的亲核试刘如对咪唑环π-N保护，可以完全抑制消旋， π-N可以用苄氧甲基(Bom)和叔丁氧甲基(Bum)保护，(Bum)可 以用TFA脱除，Bom更稳定些，需用催化氢解或强酸脱保护， Bum是目前很有发展前途的His侧链保护基，其不足之处在于 Fmoc(His)Bum在DCM和DMF中的溶解度较差。