菌种的保藏PPT教学课件

菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持 其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死 亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、 交换和使用等诸方面的需要。
二、菌种保藏的原理
▪ 首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行 保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢 子、芽孢等。
▪ 其次应人为地创造环境条件（如：干 燥、低温和缺氧），使微生物长期处 于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休 眠状态。
▪ 此法适用于产孢子的霉菌和某些放线菌，保藏 期在1年以上。因操作简单、经济实惠，工厂较 多采用。
（五）甘油悬液保藏法
▪ 此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下 保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温 度若采用－20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用 －70℃，保藏期可达10年。
▪ 将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经 121℃蒸汽灭菌20min的甘油混合，并使 甘油的终浓度在10％～15％，再分装于 小离心管中，置低温冰箱中保藏。
▪ 基因工程菌常采用本法保藏。
（六）冷冻真空干燥保藏法
▪ 又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。它通常是用保护剂制 备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低 温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品 脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立 即熔封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物 处于休眠状态，而得以长期保藏。
本 能 ？ 爱 心 ？
/
本能？/学习？
训练蚯蚓走“T”字形迷宫的试验 大山雀偷饮牛奶
成年黑猩猩设法取到挂在高处的香蕉
学 习 还 是 本 能 ？
研究动物行为的目的和方法
研究动物行为的目的 研究动物行为的方法
研究动物行为的根本目的，在于 认识和利用对人有益的动 物，控制和 防除对人有害的动物。例如，人们掌 握了家畜的发情、交配、生殖和发育 等行为的科学知识，就可以使家畜及 时配种、增加胎数和幼畜的头数。人 们掌握了鼠类的繁殖、分布和迁移行 为的规 律，以及影响鼠类生殖的各种 因素，就可以制定防治鼠害的有效措 施。
此法适用于各大类微生物。
此法的主要保藏措施是低温、干燥、缺氧、有 保护剂，保藏期一般长达5～15年，存活率高， 变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的 保藏方法。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻 干机等设备。
（七）液氮超低温保藏法
▪ 简称液氮保藏法或液氮法。它是以甘油、二甲基亚砜等作 为保护剂，在液氮超低温（－196℃）下保藏的方法。其 主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之 前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因 自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。
第八章 菌种的保藏
第一节 菌种的衰退和复壮
一、菌种的衰退 二、菌种的复壮
第二节 菌种的保藏
一、菌种保藏的目的 二、菌种保藏的原理 三、菌种保藏的方法
性状稳定的菌种是微生物工作最 重要的基本要求，否则生产或科研 都无法正常进行。
影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异；b）污染；c）死亡
第一节 菌种的衰退和复壮
Hale Waihona Puke Baidu
（一）斜面低温保藏法－－常用保藏法
▪ 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全 后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏 期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏， 如此连续不断。
▪ 此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏
▪ 此法的主要保藏措施是低温。一般可保存1～6 个月左右。
杜鹃 －不孵卵和不育雏的鸟
▪ 一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的 微生物及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的 细菌及酵母则不适用。
砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等 诸条件，故保藏期较长、效果较好，且微生物 移接方便，经济简便。它的保藏期约1～10年。
（四）麸皮保藏法
▪ 又称曲法保藏。即以麸皮作载体，吸附接入的孢子，然 后在低温干燥条件下保存。其制作方法是，将麸皮与水 以一定的比例拌匀，装量为试管体积2/5，湿热灭菌后经 冷却，接入新鲜培养的菌种，适温培养至孢子长成。将 试管置于盛有氯化钙等干燥剂的干燥器中，于室温下干 燥数日后移入低温下保藏；干燥后也可将试管用火焰熔 封，再保藏，则效果更好。
研究动物行为的方法 研 究动物行为的方法，随着 社会的发展而不断地发展 变化。现代研究动 物行为
的方法，主要采取观察法 和实验法，以及这两种方 法的有机结合。
动物学家在观察动物行为
1.形态像三刺鱼的模型，不 。 能引起雄鱼的战斗。
三
刺
鱼
模
拟
实
2～5.腹面是红色的模型，都能引起雄
验
鱼的战斗。
鸟类的迁徙
动物的节律行为
有 何 意 义 ？
夜间活动的动物
上：蝙蝠飞翔 中：猫头鹰捕鼠 下：猫捕鼠
有何意义？
鸟类的迁徙
生物生命活动的内存节律性，也叫做生物钟。
有 何 意 义 ？
将蟑螂放在暗室做生物钟实验
左：白天变成黑夜
右：黑夜变成白天
动物行为的生理基础
育雏的母鸡和小猫
本能？/“爱心”？
小鸟在池边喂金鱼
▪ 在微生物的基础研究和应用研究中，选育 一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲 使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性， 便于长期使用，还需要做很多日常的工作。 实际上，由于各种各样的原因，要使菌种 永远不变是不可能的，菌种衰退是一种潜 在的威胁。只有掌握了菌种衰退的某些规 律，才能采取相应的措施，尽量减少菌种 的衰退或使已衰退的菌种得以复壮。
▪ 此法适用于专性活细胞寄生微生物（如病毒、 立克次氏体等）。
▪ 植物病毒可用植物幼叶的汁液与病毒混合， 冷冻或干燥保存。
▪ 噬菌体可以经过细菌培养扩大后，与培养基 混合直接保存。
▪ 动物病毒可直接用病毒感染适宜的脏器或体 液，然后分装于试管中密封，低温保存。
▪ 在上述的菌种保藏方法中，以斜面低温保 藏法、石蜡油封藏法、宿主保藏法最为简 便；砂土管保藏法、麸皮保藏法和甘油悬 液保藏法次之；以冷冻真空干燥保藏法和 液氮超低温保藏法最为复杂，但其保藏效 果最好。应用时，可根据实际需要选用。
菌种复壮的主要方法
▪ 纯种分离法
通过纯种分离,可将衰退菌种细胞群体中 一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出 来,经扩大培养,就可恢复原菌株的典型性状。
菌落纯（“菌种纯”）
细胞纯（“菌株纯”）
▪ 宿主体内复壮法
对于寄生性微生物的衰退菌株，可通过接 种到相应昆虫或动植物宿主体内来提高菌株的 毒性。
（二）菌种衰退的原因
基因突变－－主要原因
1、有关基因发生负突变导致菌种衰退 2、表型延迟造成菌种衰退 3、质粒脱落导致菌种衰退
连续传代－－加速衰退 不适宜的培养和保藏条件－－加速衰退
（三）菌种衰退的防止
控制传代次数 创造良好的培养条件 利用不易衰退的细胞移种传代 采用有效的菌种保藏方法 讲究菌种选育技术 定期进行分离纯化
▪ 此法广泛适用于各大类微生物菌种的中期保藏 不适用于保藏某些能分解烃类的菌种。
▪ 此法的主要保藏措施是低温、阻氧。一般可保 存1～2年左右。
（三）砂土管保藏法
该法是将砂与土分别洗净、烘干、过筛，按一定比例分 装于小试管中，砂土的高度约1cm，121℃蒸汽灭菌1～ 1.5h，间歇灭菌3次。50℃烘干后经检查无误后备用。将 待保藏的菌株制成菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线 菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置于干燥器 中抽真空约2～4h，用火焰熔封管口(或用石蜡封口)，置 于干燥器中，在室温或4℃冰箱内保藏。
▪ 美国ATCC采用冷冻干燥保藏法和 液氮保藏法来保藏所有菌种。
▪ 我国CCCCM采用斜面低温保藏法、 冷冻干燥保藏法和液氮保藏法进 行菌种保藏。
ATCC采用的两种保藏方法的优点示意图
第17章 动物的行为
目录
动物行为的主要类型
1.动物的攻击行为和防御行为 2.动物的贮食行为和繁殖行为 3.动物的社群行为 4.动物的节律行为 5.动物行为的特点和生理基础 6.研究动物行为的目的和方法
▪ 此法适用于各种微生物菌种的保藏。
▪ 此法的主要保藏措施是超低温、有保护剂，保 藏期一般可达到15年以上，是目前公认的最有 效的菌种长期保藏技术之一。
▪ 此法的优点是操作简便、高效，且可使用各种 培养形式的微生物进行保藏。其缺点是需购置 超低温液氮设备，且液氮消耗较多，操作费用 较高。
（八）宿主保藏法
▪ 淘汰法
将衰退菌种进行一定的处理（如药 物、低温、高温等），往往可以起到淘汰 已衰退个体而达到复壮的目的。
▪ 遗传育种法
把退化的菌种重新进行遗传育 种，从中再选出高产而不易退化的 稳定性较好的生产菌种。
第二节 菌种的保藏
菌种是重要的生物资源，研究和选择良 好的菌种保藏方法具有重要的意义。
一、菌种保藏的目的
一、菌种的衰退
▪ 菌种衰退（degeneration）是指由于 自发突变的结果，而使某物种原有的一系 列生物学性状发生量变或质变的现象。
纯菌种 自发突变 不纯菌种 传代增殖 衰退菌种
突变个体
原始个体
（一）菌种衰退的现象
菌落和细胞形态改变 生长速度缓慢，产孢子越来越少 代谢产物生产能力下降，即出现负突变 致病菌对宿主侵染能力下降 对外界不良条件的抵抗能力下降等
二、菌种的复壮
狭义的复壮－－消极的措施
是指在菌种已经发生衰退的情况下，通过纯 种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已 衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达 到恢复原菌株固有性状的相应措施。
广义的复壮－－积极的措施
是指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰 退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性 状测定工作，以期从中选择到自发的正突变个 体。
动物的攻击行为和防御行为
看一看，想一想
。
尺蠖的拟态
有 乌贼释放墨汁
何
意
义
乌鸦群鸣叫
？
有何意义？
动物的贮食行为和繁殖行为
蚂蚁在贮藏麦粒
金钱豹在树上挂着捕食的羚羊
鸟类的筑巢和求偶
亲鸟在给雏鸟喂食
动物的社群行为
有 何 意 义 ？
白蚁的群体生活
？ 动物的社群生活有何意义
狒狒的群体生活
1.“首领”雄狒狒 2.“下级”雄狒狒 3.雌狒狒 4.幼狒狒
▪ 优点是简便易行，容易推广，存活率高；缺点 是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期 短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污 染。
（二）石蜡油封藏法
▪ 此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体 石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物） 上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培养物与空气隔绝， 加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内 保藏。
▪ 尽可能多的采用不同的手段保藏 一些比较重要的微生物菌株
三、菌种保藏方法
▪ 各种微生物由于遗传特性不同， 因此适合采用的保藏方法也不一 样。一种良好的有效保藏方法， 首先应能保持原菌种的优良性状 长期不变，同时还须考虑方法的 通用性、操作的简便性和设备的 普及性。
▪ 斜面低温保藏法 ▪ 石蜡油封藏法 ▪ 砂土管保藏法 ▪ 麸皮保藏法 ▪ 甘油悬液保藏法 ▪ 冷冻真空干燥保藏法 ▪ 液氮超低温保藏法 ▪ 宿主保藏法