第九章经典液相色谱法

第九章经典液相色谱法
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液相色谱的固定相和流动相
第九章经典液相色谱法
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液相色谱的固定相和流动相
1）硅 胶（SiO2•xH2O) 吸附能力：取决于骨架表面硅羟基-极性吸附剂 吸附机理：氢键作用-硅羟基为质子给予体
物质的极性越大，硅胶吸附能力越强 溶剂的极性越弱，硅胶吸附能力越强
适用范围：适用于分离酸性和中性化合物 活化温度：105～110℃
6
25
10
38
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活度级别 吸附能力
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
含水量越低，活度级别越小，吸附能力越强。 含水量越高，活度级别越大，吸附能力越弱。
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液相色谱的固定相和流动相
3）聚酰胺 常用种类：聚己内酰胺 作用机理：氢键作用
（1）酰胺基中的羰基 与酚类、黄酮类、酚类中的羟基或羧基形成氢键
（2）酰胺基中的氨基 与醌类、硝基类中的醌基、硝基形成氢键
3. 对载体的要求
化学惰性 对固定液有较强吸附性，但对组分无吸附性 颗粒大小均匀，纯净
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常用溶剂的极性顺序为：
石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜三氯乙烯＜苯＜ 甲苯＜二氯甲烷＜乙醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜ 丙酮＜正丁醇＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸
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液相色谱的固定相和流动相
选择色谱分离条件时，必须从吸附剂、被分 离物质、流动相三方面综合考虑。
吸附色谱三要素之关系
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LC 以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法
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液相色谱法类型 分类
-按分离机制
-按操作形式
经典液相
-按分离效能
现代液相
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液相色谱法类型
经典液相色谱法
常压下靠重力或毛细作用输送流动相的色谱方法
经典柱色谱法 平面色谱法
现代液相色谱法
高压输液泵输送流动相
高效液相色谱法（HPLC）
吸附色谱的固定相
1.对吸附剂的要求
1）有较大表面积和足够的吸附能力，对不同物 质吸附能力不同
2）与洗脱剂、溶剂、样品不起化学反应，且不 溶于洗脱剂和溶剂
3）粒度细而均匀
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液相色谱的固定相和流动相
2. 常用吸附剂 -有机类：
活性炭、淀粉、蔗糖等、聚酰胺、大孔树脂 -无机类：
氧化铝、硅胶、硫酸钙、滑石粉、硅藻土等
不稳定的苷类、醌、内酯
碱性-分离碱性和中性化合物，如生物碱类
活化温度：200～400℃
活化：一定温度下加热除去水分以增强活性的过程 失活：一定温度下加入一定量水分使吸附剂活性降低的过程
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液相色谱的固定相和流动相
吸附剂的吸附能力常称为活度或活性
含水量（%）
硅胶
氧化铝
0
0
5
3
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关系
值减小
留值增大
适于分离的物质
极性物质
弱极性物质
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液相色谱的固定相和流动相
分配色谱的固定相
固定相：载体+固定液
某种溶剂涂布在吸附剂颗粒表面或纸纤维上，形成液膜
1. 固定液 正相分配色谱法：
水、各种缓冲剂、稀硫酸、甲醇、甲酰胺、丙二醇等强极性 溶剂及它们的混合液等
反相分配色谱法：
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液相色谱的固定相和流动相
4）大孔吸附树脂 定义：不含交换基团，有大孔网状结构的高分子
吸附剂 种类：非极性和中等极性两类 范围：水溶性化合物的分离纯化
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液相色谱的固定相和流动相
吸附色谱的条件选择
组分在色谱柱中的移动速度和分离效果取决于： 1. 吸附剂对样品各组分的吸附能力-吸附活性 2. 洗脱剂对各组分的解吸能力-极性大小 3. 待分离各组分本身极性差异-结构性质
液相色谱的固定相和流动相 分配色谱
正相分配色谱：固定相的极性大于流动相 反相分配色谱：固定相的极性小于流动相
比较项目
固定相
正相色谱法（NP） 反相色谱法（RP）
强极性
非极性
流动相
弱-中等极性
中等-强极性
出峰顺序
极性弱的组分先出峰 极性强的组分先出峰
保留值与流动相极性的 随流动相极性增大保留 随流动相极性增大保
化学反应将有机分子以共价键连接在硅羟基上，则成为化学键 合固定相，按键合官能团极性分为极性键合相及非极性键合相
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液相色谱的固定相和流动相
2） 氧化铝
优点：分离能力强、活性可控
分类：酸性、中性、碱性，以中性氧化铝使用较多
用途：
酸性-分离酸性化合物，如有机酸
中性-分离生物碱、挥发油、萜类、甾体、蒽醌以及在酸碱中
硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂
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液相色谱的固定相和流动相
2. 常用的载体（只起负载固定相的作用 ） （1）硅胶：吸收本身重量50%以上水分后丧失吸附作用 （2）硅藻土：应用最多的载体-硅藻土中氧化硅性质较为
致密，几乎不发生吸附作用
（3）纤维素：纸色谱的载体，也是分配柱色谱常用载体
共轭双键越多，吸附能力也越强 （3）基团的空间排列—能形成分子内氢键吸附能力较弱
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液相色谱的固定相和流动相
2. 吸附剂的选择
分离极性小的物质，选用吸附能力强的吸附剂 分离极性大的物质，选用吸附能力弱的吸附剂
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液相色谱的固定相和流动相
3. 流动相的选择
分离极性大的物质应选用极性大的溶剂 分离极性小的物质应选用极性弱的溶剂
第九章 经典液相色谱法
1 液相色谱法类型 2 液相色谱的固定相和流动相 3 经典液相柱色谱法
平面色谱法 薄层扫描法简介
第九章经典液相色谱法
本章要求 掌握 液相色谱技术的基本原理 熟悉 吸附等温线 了解 液相色谱技术的基本操作
第九章经典液相色谱法
液相色谱法类型 定义
Liquid Chromatography
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液相色谱的固定相和流动相
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 空间排阻色谱
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液相色谱的固定相和流动相 吸附色谱
溶质基于吸附现象而获得分离的液-固色谱分析方法 分离分析极性至弱极性的化合物
固定相——吸附剂 流动相——有机溶剂
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液相色谱的固定相和流动相
第九章经典液相色谱法
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液相色谱的固定相和流动相
1. 化合物的极性及其判断规律
常见化合物按其极性由小到大顺序为：
烷烃＜烯烃＜醚硝基化合物＜二甲胺＜酯类＜酮类＜醛 类＜硫醇＜胺类＜酰胺类＜醇类＜酚类＜羧酸类
依据规律：
（1）基本母核相同—基团极性越强，整个分子极性越强 （2）分子中双键越多，吸附能力越强