蛋白质的沉淀及变性

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实验原理
a可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著 变化，除去引起沉淀的因素后，沉淀的蛋白质仍然溶 解于原来的溶剂中。并保持其天然性质而不变性。如 大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙醇) 短时间作用蛋白质等。一般在纯化蛋白质时，常利用 此类反应。 b不可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大 改变，蛋白质因变性而沉淀，除去引起沉淀的因素后， 蛋白质不再溶于原来溶剂中。如加热引起的蛋白质沉 淀与凝固、蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应 等都属于此类。但蛋白质变性后，有时由于维持溶液 稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变 性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也 未必都已变性。
实验步骤
• • • • • （1）盐析作用； （2）乙醇沉淀蛋白质； （3）有机酸沉淀蛋白质； （4）重金属沉淀蛋白质； （5）生物碱试剂沉淀蛋白质。
实验现象记录及原因
实验仪器和试剂
（1）仪器：试管、试管架、吸管、量筒。 （2）试剂： A、蛋白质—氯化纳溶液：取20mL蛋清，加蒸馏水200mL和饱和氯化 钠溶液100mL，充分搅匀后用纱布滤去不溶物（加氯化钠的目的是溶 解球蛋白）。 B、蛋白质溶液：取5mL蛋清，用蒸馏水稀释至100mL，搅拌均匀后， 用纱布过滤。 C、饱和硫酸铵溶液：称硫酸铵850g加于1000mL蒸馏水中，在 70~80温度下搅拌促溶，室温中放置过夜，瓶底析出白色结晶，上清 液即为饱和硫酸铵溶液。 D、饱和苦味酸溶液：取2g苦味酸放入三角烧瓶，加蒸馏水100mL， 放入80度水浴约10min使之完全溶解，于室温下冷却后瓶底析出黄色 结晶，上清液即为饱和苦味酸，此液可存放数年。 E、1%乙酸溶液、1%乙酸铅溶液、1%硫酸铜、1%三氯乙酸溶液。 F、0.5%磺基水杨酸溶液。 G、5%鞣酸溶液。 L、硫酸铵粉末。
实验原理
• 在蛋白质溶液中加入适量的无机盐（硫酸铵、柳 酸钠、氯化纳等）浓溶液就会使蛋白质析出，称 这种作用为蛋白质的盐析作用。当盐浓度不同， 析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸 铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中 才能析出。由盐析作用获得的蛋白质沉淀，当降 低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析 作用是可逆过程。
实验一
蛋白质的沉淀及变性
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一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器和试剂 四、实验步骤 五、实验现象记录及原因
实验目的
• 1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因 素的认识。 • 2、了解沉淀蛋白质的几种方法及 其实用意义。 • 3、了解蛋白质变性与沉淀的关系。
实验原理
• 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生 成水化层和双电层而成为稳定的亲水 胶体颗粒，在一定的理化因素影响下， 蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉 淀。