痰涂片的标准操作规程
痰检实验室操作规程
痰检实验室操作规程一、检查程序（一）痰标本收集：在三个痰标本盒上注明病人的姓名、编号、检查日期和容器序号。
病人首次留痰前应指导病人，留取“即时痰”、“夜间痰”、“晨痰”合格的痰标本，对所送不合格痰标本除常规检查外，应要求患者重新送检，合格的痰标本包括干酪痰、血痰、粘液痰。
唾液或口水用于病人确诊时为不合格痰标本，标本量一般在3～5 ml。
（二）痰涂片制作：1、检查前对新的玻片用95%的乙醇擦拭脱脂，经干燥、清洁、检查无油污、无划痕后作为合格的玻片备用。
在已经准备的痰玻片背面左端的1/3处注明编号，挑取痰标本中可疑部分约0.05～0.1 ml，于玻片正面右侧2/3处，均匀涂抹成10×20 mm的卵圆形痰膜。
2、痰膜朝上静置自然干燥后(一般约需要30分钟)进行染色镜检。
当气温低，痰膜不易干燥时，严禁将玻片直接在火焰上烘拷，以防产生气溶胶或痰膜脱落。
一张载玻片上只能涂抹一份痰标本，一张载玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于痰涂片染色检查。
3、涂抹完毕后的痰标本，在检查结果报告前，应暂时保留。
以备涂片、染色不合格影响镜检结果时，重新涂片和染色之用。
4、萋－尼氏染色油镜检查.（三）实验室登记：按照年度病人序号和痰标本序号在实验室登记本上进行登记，并以同样的号码在痰涂片检查单上进行标记。
检验单的病人姓名应与实验室登记本一致。
（四）痰涂片检查结果登记与报告：及时在登记本上登记痰涂片检查结果。
当病人的三次痰涂片检查完成后，发现有阳性痰涂片，应在规定时间内报医院防保科，县级结核病防治机构再对痰涂片进行确认。
（六）痰涂片的保存：每个查痰点镜检后的全部痰涂片应按实验室登记本序号连续排列，分别存放在各点固定的玻片盒中，供上级实验室复核确认。
（七）痰检质量控制：每个痰涂片检查点均按照中国结核病防治规划《痰涂片镜检质量保证手册》的要求，作为一个独立的被质控单位接受室间质量评估和检查工作。
二、萋－尼氏染色1、涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持在10 mm以上的距离；火焰固定(在5秒钟内将玻片置于火焰上来回烘烤4次)。
痰涂片标准化操作
普仁医疗集团 无锡市第五人民医院检验科 刘君
主要内容
标本收集与运送
抗酸菌涂片 Ziehl-Neelsen 染色 显微镜读片检查 结果登记与玻片保存 抗酸菌涂片检查假阳性及假阴性的可能因素
标本收集与运送
提纲
标本容器 标本编号 收集方法与运送注意事项 标本的质量评价
假阴性的原因
1）观察涂片的视野数量不足 2）镜检技术能力差 3）染色操作不规范（抗酸杆菌颜色 暗淡、背景太淡或过深） 4）显微镜存在问题 5）染液质量差
假阴性导致的结果
结核病人没有得到正确诊断和治疗， 向其他人传播疾病，或者死亡 随访病人缩短了应有的治疗时间
AFB假阴性结果的预防措施
确认标本是痰、而非唾液。 确认每份标本至少有1 ml。 选择脓样、干酪样、粘液痰涂抹制备玻片。 制备玻片时标本涂抹均匀，不要太厚或太薄。 使用高质量染料、按照配方配制染液。
次日清晨留取的痰
*如果规划指南有所调整，请依据指南调整
用于疗效监测的随访标本
随访标本 (在治疗期间和结束的时候收 集)
晨痰 另外一份标本依据 NTP 指南进行收
集
标本收集
安全意识: 患者比标本有危险!
如果有实验员指导监督病人留痰，那么 他面临的危险要远高于其他实验员
痰标本收集的生物安全
2. 痰标本来源：根据患者做痰检查时的情况，选 择1栏填写。初诊患者填写门诊序号，随访患者填 写患者登记号。
3. 性状：标本性状按照国家实验室质量控制新标 准，分为干酪痰（A）、血痰(B)、粘液痰(C)和唾 液(D)，分别按A、B、C、D分类登记。
填写说明：
4. 结果：涂片阳性者使用红笔记录为“数字+”， 如“1+、2+、3+”，300个视野内仅见1～8条抗酸 杆菌者填写“条数”；阴性结果填为“阴性”， 不能记录为“-”或“（-）”。
痰培养操作流程sop
痰培养操作流程sop
痰培养是一种常见的临床检验方法，用于检测痰样本中的细菌、真菌和病毒等微生物。
正确的痰培养操作流程（SOP）对于确保检测结果的准确性至关重要。
以下是一份关于痰培养操作流程的详细指南：
1. 准备工作：在进行痰培养之前，首先要准备好所需的实验室
用品和设备，包括培养皿、试管、吸管、培养基、显微镜等。
2. 收集痰样本：患者在清晨醒来后深呼吸数次，然后用消毒液
清洁口腔，用力咳嗽将痰样本吐入干净的容器中。
3. 样本处理：将收集到的痰样本转移到试管中，并加入适量的
生理盐水或其他稀释液，使样本更易于处理。
4. 稀释和涂片制备：将痰样本进行适当的稀释，然后取少量样
本涂抹在玻片上，用炉灰染色或其他染色方法染色。
5. 培养：将涂片放入培养皿中，加入适量的培养基，然后放入
培养箱中进行培养。
根据需要，可以选择不同种类的培养基，如血
琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基等。
6. 培养条件：将培养皿放入恒温培养箱中，设置适当的温度和
湿度条件，通常在37摄氏度下培养24-48小时。
7. 结果观察：观察培养皿中的细菌、真菌或病毒的生长情况，根据形态、颜色、大小等特征进行初步鉴定。
8. 进一步鉴定：对于生长的微生物，可以进行进一步的生化试验或分子生物学检测，以确定其种属和抗生素敏感性。
9. 结果报告：根据实验结果，编制详细的检测报告，并及时通知临床医生，以指导患者的治疗方案。
总之，痰培养操作流程需要严格按照规范操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
只有这样，才能为临床诊断和治疗提供有效的支持。
病理痰标本制片流程
病理痰标本制片流程1. 标本采集。
- 由临床医师按要求采集痰液，一般要求患者晨起后用清水漱口，然后用力咳出深部痰液于无菌容器中。
2. 标本固定。
- 将采集到的痰液立即放入10%中性福尔马林固定液中，固定液的量应为痰液体积的5 - 10倍，固定时间一般为6 - 24小时。
3. 脱水处理。
- 从固定液中取出痰液，依次放入不同浓度的乙醇溶液中进行脱水。
- 70%乙醇，浸泡1 - 2小时。
- 80%乙醇，浸泡1 - 2小时。
- 90%乙醇，浸泡1 - 2小时。
- 95%乙醇，浸泡1 - 2小时。
- 100%乙醇（Ⅰ），浸泡1 - 2小时。
- 100%乙醇（Ⅱ），浸泡1 - 2小时。
4. 透明处理。
- 将脱水后的痰液放入二甲苯（Ⅰ）中透明15 - 30分钟。
- 再放入二甲苯（Ⅱ）中透明15 - 30分钟。
5. 浸蜡处理。
- 将透明后的痰液放入已融化的石蜡（Ⅰ）中，浸蜡1 - 2小时。
- 再放入石蜡（Ⅱ）中，浸蜡1 - 2小时。
6. 包埋。
- 用镊子将痰液从浸蜡容器中取出，放入包埋框中，倒入融化的石蜡，迅速将包埋框置于冷水中冷却，使石蜡凝固成块。
7. 切片。
- 将包埋好的蜡块固定在切片机上，调整切片厚度为4 - 6μm，进行切片，将切下的切片漂浮在40 - 45℃的温水上展平。
8. 贴片与烤片。
- 用载玻片将展平的切片捞起，使切片贴附在载玻片上，然后将载玻片放入60 - 65℃的烤箱中烤片1 - 2小时。
9. 脱蜡至水。
- 将烤片后的载玻片放入二甲苯（Ⅰ）中脱蜡5 - 10分钟。
- 再放入二甲苯（Ⅱ）中脱蜡5 - 10分钟。
- 然后依次放入100%乙醇（Ⅰ）、100%乙醇（Ⅱ）、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中各浸泡1 - 2分钟，最后放入蒸馏水中浸泡2 - 3分钟。
10. 染色。
- 常用的染色方法为苏木精 - 伊红（HE）染色。
- 将脱蜡至水后的切片放入苏木精染液中染色5 - 10分钟，然后用流水冲洗10 - 15分钟。
痰涂片镜检操作规范
玻片的保存
使用显微镜附带的镜油，或者是购 买的镜油（immersion oil）,而不 是香柏油（cedar oil）,则不需使 用二甲苯，直接使用镜头纸擦拭即 可 干燥后的玻片，按实验室序号及涂 片编号放置在玻片盒中，存放在阴 凉干燥环境中。处于潮湿炎热的环 境中抗酸菌易于褪色。
痰细菌学检查工作经常被忽视
标本性状的控制加强于医生沟通3份痰标本1即时痰2夜间痰3晨间痰痰标本保存不能当日检查的保存于冰箱防液化染液控制用之前过滤一下一周一次如何进行痰涂片质量控制室内质控抽查复检当日10的涂片自查或互查选取结果可疑的涂片复查尤其是只看到一条的或只在一处视野看到细菌选择痰阳病人有阴性结果的涂片记录结果18条涂片玻片的保存使用显微镜附带的镜油或者是购买的镜油immersionoil而不是香柏油cedaroil则不需使用二甲苯直接使用镜头纸擦拭即干燥后的玻片按实验室序号及涂片编号放置在玻片盒中存放在阴阴凉干燥凉干燥环境中
痰涂片镜检操作规范
宁波市疾病预防控制中心 平国华
一、标本的来源与收集
初诊时留取标本数量 以三份标本的阳性检出例数作为 100％，留取一份标本的阳性检出 例数占全部阳性例数的80％，留取 两份标本的阳性检出例数占全部阳 性检出例数的95％。
不同痰液涂片阳性率表 （仅供示例）
性质 干酪样痰 血性痰 粘液性痰 水样痰 例数 55 46 529 92 阳性数 36 16 56 7 阳性率 65.5% 34.8% 10.6% 7.6%
附件（仅 供参考）
六、评价痰涂片 位置 大小（10mm×20mm） 厚薄（刚好透过报纸的5号字体，镜下每个视 野20个左右细胞） 染色（肉眼看天蓝色,无红/紫色斑块） 脱落（＜10%痰膜面积）
单一的抗酸菌
“V”- 字形
痰涂片标本合格的判定标准
痰涂片的标准操作规程跟取痰的方法途径有很大关系，如果取痰不当可以受到口腔的污染，而导致标本结果判断会不正确。
因此一般取痰主要是以什么样的方式取痰要做一个标明，如果是自然咳痰或者是诱导痰，或者是经鼻腔和口腔吸痰，经人工气道吸痰，经支气管镜采样，支气管肺泡首先要换洗。
然而痰涂片的痰标本取材后2小时以内进行处理，如果时间不足可将标本放置在二到八摄氏度里温度保存。
痰涂片要给与详细的一些记录，所有的痰标本必须进行涂片，必要时在生物安全内进行操作，必须戴乳胶手套，必须打开风吹。
痰涂片选择标本脓性和血性部分涂片，均匀薄片，进行咳痰标本量判断显微镜下细菌型观察痰涂片。
痰涂片标本的质量判断在低倍镜下观察记录，平均每低倍镜视野白细胞和鳞状上皮细胞数，合格的上皮细胞是小于十个，不合格的上皮细胞是大于或等于十个。
如果发现有许多加抹的也可以进行一些排练，可能是肺炎链球菌感染。
痰标本直接涂片镜检标准规程
2.2.2.3滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水从玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去玻片上剩余的水，待玻片干燥后镜检。
2.2.3待检涂片检查2.2.3.1染色合格的涂片，由于被亚甲蓝染色而呈均匀亮蓝色，且无红色斑块；染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂布面积的10%2.3镜检2.3.1油镜下观察300个视野以上或者连续观察5分钟2.3.2观察方法2.3.2.1使用10×目镜双目显微镜读片；2.3.2.2取染色完毕且已经干燥的玻片，痰膜向上放置在玻片台上并以卡尺固定；2.3.2.3首先使用40×物镜，转动卡尺移动玻片至痰膜左端，将光线调节至适当亮度，调节焦距至可见细胞形态；2.3.2.4移开40×物镜，在玻片上滴1-2滴镜油，使用100×油镜进行仔细观察。
但应注意避免油镜镜头直接接触玻片上的痰膜。
2.3.2.5读片时，首先应从左至右观察相邻的视野；当玻片移动至痰膜一端时，纵向向下转换一个视野，然后从右至左观察，以此类推；2.3.2.6在淡蓝色背景下，抗酸菌呈红色；其他细菌和细胞呈蓝色。
2.3.2.7仔细观察完300各视野，一般需要5分钟；每个工作日，一位镜检人员阅读玻片量不超过25张，且连续阅读10-12张玻片后应休息20分钟左右。
2.4结果判断2.4.1阴性：镜检300个视野以上或连续观察5分钟未发现抗酸杆菌2.4.2阳性：阳性（300个视野内有1~8条抗酸杆菌）阳性1+（100个视野内有3~9条抗酸杆菌）阳性2+（10个视野内有1~9条抗酸杆菌）阳性3+（每个视野内有1~9条抗酸杆菌）阳性4+（每个视野内有9条以上抗酸杆菌）2.5结果报告与记录2.5.1将检测结果填写入申请单报告栏，报告格式如下:涂片1：阴性（-）镜检结果：涂片2：阴性（-）涂片3：阴性（-）2.5.2将检测结果记录于结合门诊检测登记册中：涂片号标本性状检测结果例： 1： D 阴性（-）2： D 阴性（-）3： D 阴性（-）2.6痰涂片的保存2.6.1阅读完毕后的涂片，应及时用擦镜纸轻轻在涂片上揭取数次，彻底去除玻片上的镜油。
痰涂片合格标准
痰涂片合格标准痰涂片是临床上常用的一种检查方法，通过痰涂片可以观察痰液中的细胞、细菌等情况，对于呼吸道疾病的诊断和治疗具有重要意义。
然而，由于痰涂片的制备和染色过程较为复杂，不同的操作技术和条件可能会导致结果的差异，因此有必要对痰涂片的合格标准进行明确规定，以确保检查结果的准确性和可靠性。
痰涂片的合格标准主要包括以下几个方面：1. 样本采集，痰涂片的样本采集是影响检查结果的重要因素之一。
合格的痰涂片样本应该来自于患者的下呼吸道，采集时应避免口腔分泌物的干扰。
在采集过程中，应当避免污染和稀释，确保样本的纯净度和完整性。
2. 制片技术，痰涂片的制片技术包括制片、染色和封片等步骤。
合格的痰涂片应该具有清晰、均匀的染色，细胞应该分布均匀，不应有明显的破损和空白区。
制片过程中应当避免气泡的产生，封片应当牢固密封，以防止样本的脱落和污染。
3. 检查标准，对于痰涂片的检查应当有明确的标准和规范，包括细胞形态的评价、细菌数量的统计、病原微生物的鉴定等内容。
检查人员应当具有专业的知识和技能，能够准确地进行观察和判断，避免主观因素对结果的影响。
4. 质控标准，痰涂片的制备和检查过程应当有严格的质控标准，包括设备的维护保养、试剂的储存和使用、操作流程的规范等方面。
定期进行质量控制和评估，及时发现和纠正问题，确保检查结果的准确可靠。
总之，痰涂片作为临床检查的重要手段，其合格标准对于确保检查结果的准确性和可靠性具有重要意义。
医疗机构和检验科室应当严格按照相关标准和规范进行操作，确保痰涂片的制备和检查质量达到要求，为临床诊断和治疗提供可靠的依据。
同时，检查人员应当不断提高专业水平，加强对痰涂片制备和检查技术的学习和掌握，提高操作技能，提高检查结果的准确性和可靠性。
痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册
痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册一、操作流程1. 准备工作在进行痰涂片镜检之前，首先要做好准备工作。
包括整理工作台、准备所需试剂和材料、带好个人防护用具等。
确保环境整洁，避免外界污染。
2. 采集标本需要采集患者的痰液标本。
在采集时，要注意不要污染标本，并且采集的标本应该足够用于镜检。
3. 制作涂片将采集的痰液标本滴于载玻片上，用另一块载玻片将其涂开，制作成薄膜。
这一步需要技术娴熟，避免产生气泡或过厚的制片。
4. 干燥固定将制作好的涂片进行干燥固定，以保证镜检时的清晰度和稳定性。
通常可以用自然风干或特殊设备进行干燥。
5. 着色染色将干燥固定的涂片进行染色处理，使细胞和微生物更易于观察和分辨。
6. 镜检操作进行镜检操作。
在显微镜下观察涂片，分析痰液中的细胞、细菌和真菌等微生物结构和形态，及时记录观察结果。
二、质量保证手册1. 质量控制制定痰涂片镜检的质量控制标准，包括操作流程、质量评价标准、设备维护等方面，确保每一项操作都符合标准要求。
2. 培训与考核对进行痰涂片镜检的人员进行专业培训，包括操作技巧、细胞和微生物识别能力提升培训等，并定期进行考核，确保技能和认识的稳定性。
3. 质量评价建立定期的内部质量评价机制，对镜检结果进行复核、比对等，在发现问题时及时采取纠正措施。
4. 设备维护对显微镜等设备进行定期的维护保养，确保设备的正常使用和观察质量。
三、个人观点痰涂片镜检在临床诊断和疾病监测中扮演着重要的角色，标准化操作和质量保证手册则是保证检测结果准确性和稳定性的基础。
通过规范的操作流程和严格的质量控制，可以减少操作误差和结果偏差，提高痰涂片镜检的准确度和可靠性。
培训检验人员和定期的质量评价不仅可以提升检验人员的技术水平，还可以及时发现和解决问题，保证实验室检测的质量和可靠性。
总结回顾通过本文对痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册的介绍，我们了解到了其重要性和必要性。
良好的操作流程和质量保证手册是保证痰涂片镜检准确性和可靠性的关键步骤，对于临床诊断和疾病监测具有重要的意义。
痰液及下呼吸道分泌物培养简易操作规程
.痰液及下呼吸道分泌物培养标准操作流程1 观察标本合格后操作。
一般为晨痰，再留取痰之前刷牙、反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐进无菌容器内送检。
涂片白细胞小于10，上皮细胞大于25为不合格痰，相反白细胞大于25，上皮细胞小于10-25为合格痰标本。
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后—取痰液—接种到血平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。
4观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
便培养标准操作流程1.收取有粘液或脓血、稀水粪便标本。
2.点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3.接种环灭菌—待冷却后—取粪便—接种到血平板、SS平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养。
4培养18-24小时后观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
尿培养标准操作流程1 收取晨尿第一泡清洁中段尿。
（把外阴用肥皂清洗一遍，再用清水清洗两遍，待干或用干净布擦干）用导尿管的病号需新换导尿管后取标本2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后将标本混匀，用定量接种环取尿液1ul(大约一接种环）—接种到血平板，接种环灭菌---待冷后取标本接种到中国兰平板（或麦康凯平板上）。
结核病防治实验室痰检工作——第一讲 痰涂片镜检
结核杆菌用革兰氏染色，着色较差但呈兰色， 列为G＋菌
2
结核杆菌用普通的染色方法不易着色，在染液 中加入石炭酸后才可着色
结核菌的形态和结构
染色特性
3
抗酸染色时，因结核杆菌菌体含有大量脂质，其脂 质的含量占分枝杆菌之首，占菌体干重的40%，因脂质的 含量大，所以不易着色，但经过加热或者提高石炭酸的 浓度、延长染色时间等处理以后才能着色
标本的性状
【粘液痰】 标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支 气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹 此类标本的AFB检出率较唾液高
痰涂片操作程序
【粘液痰】
涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞 标本的性状 (细胞较长且形态不规则、细胞核和细胞质着色均较深，细 胞 一端可见着色较浅的纤毛)，伴有少量肺上皮脱落细胞(多 数 为圆形、细胞核较小且着色较细胞质深，核质比大于 1:3)、 脓性炎症细胞(卵圆形、细胞核占细胞比例较大且着色较 深，核质比低于 1:1)、口腔脱落细胞及口腔寄生菌
痰检工作的目的和意义 痰检工作的
在结核病控制工作中痰结核菌涂片镜检对 于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核 疗效、评价防治效果具有重要意义
2
1
是国家结核病控制规划(NTP) 的重要
组成部分，在现代结核病控制工作中起着不 可缺少的重要作用
国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络
1
结核病细菌学实验室通过日常、有效的细
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【脑脊液的采取】 无菌手术取得脑脊液以后，3000转离心30分钟，取沉淀 物涂片染色检查 结核性的脑脊液放在冰箱中4℃过夜以后，会在液面形成 一个倒漏斗状的薄膜，取此薄膜涂片染色镜检
痰标本留取标准操作规程
痰标本留取标准操作规程
1、咳痰标本留取
1.1 嘱病人用清水漱口三次，指导病人用力深咳嗽，从呼吸道深部咳出新鲜痰液于无菌容器中。
1.2 痰量极少者可用生理盐水雾化吸入导痰。
1.3 检查分支杆菌和卡氏肺包囊虫可用3%～10%高渗氯化钠溶液雾化吸入导痰。
2、痰标本送检
2.1 痰标本收集后应及时（30分钟内）送检。
2.2 不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。
3、痰标本质量评价：
符合以下情况之一者为合格：
3.1 痰液直接涂片光镜检查每低倍视野鳞状上皮细胞＜10个、多核白细胞＞25个。
3.2 痰液直接涂片光镜检查每低倍视中，野鳞状上皮细胞：白细胞<1:2.5。
结核杆菌涂片镜检操作规程
结核杆菌痰涂片镜检操作规程一、涂片：取经95%乙醇擦拭脱脂过的干燥、清洁、无油污、无划痕的新玻片，于玻片的磨砂处编号，用接种环或折断的竹签，挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部分，于玻片正面的右侧处均匀涂抹成10 x20mm的卵圆形痰膜，自然干燥后待检。
二、染色步骤：1.固定：涂片自然干燥后，放置在染色架上，加热固定（在5秒钟内将玻片经过火焰加热4次）；2.初染：滴加石碳酸复红染液盖满痰膜，加热至出现蒸汽后，停止加热，保持染色5分钟。
染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖，必要时可续加染色液，切勿使染色液沸腾；3.水洗：流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水；4.脱色：自痰膜上端外缘滴加脱色液盖满玻片，脱色1分钟；如有必要，流水洗去脱色液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止；5.水洗：流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去标本上剩余的水；6.复染：滴加亚甲兰复染液，染色30秒；7.水洗：流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去标本上剩余的水；8.待玻片干燥后镜检。
三、镜检与报告：光学显微镜镜检（目镜1OX，油镜IOOX）染色痰片，在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其它细菌和细胞呈蓝色。
按照下列标准报告所得结果：1）抗酸杆菌阴性：连续观察3个不同视野，未发现抗酸杆菌。
2）抗酸杆菌可疑（土）： 1 2条抗酸杆菌/ 3个视野。
3）抗酸杆菌阳性（1+）： 3 9条抗酸杆菌/1个视野。
4）抗酸杆菌阳性（2+）： 1 9条抗酸杆菌/10个视野。
5）抗酸杆菌阳性（3+）： 1 9条抗酸杆菌/每个视野。
6）抗酸杆菌阳性（4+）： >10条抗酸杆菌/每个视野。
阴性结果应填记阴性”不得以“（一）”表达。
3个视野内仅见1〜2条抗酸杆菌者，应在报告单上注明条数，医生可结合胸片进行判断。
必要时再取标本复查证实。
肺结核痰涂片检查工作规范
肺结核痰涂片检查工作规范肺结核痰涂片检查工作规范引言：肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，其临床症状多种多样，包括咳嗽、咳痰、胸痛、发热、乏力等。
为了确诊肺结核病，痰涂片检查成为一种常用的方法。
本文将重点介绍肺结核痰涂片检查工作规范。
一、痰涂片收集规范1. 痰涂片收集应在医疗机构内进行，确保操作环境清洁，减少交叉感染的风险。
2. 患者应充分说明涂片收集方法，包括清晨醒后第一次咳痰，以及在白天咳痰的次数等。
3. 患者应用痰杯进行咳痰，将新鲜痰液收集在无菌的容器中，避免采用浑浊的痰液。
4. 痰液的收集量应在5-10ml之间，以保证涂片检查的准确性。
二、痰涂片制备规范1. 涂片准备人员应进行手部消毒，并戴好无菌手套。
2. 采用温水洗涤痰杯，并在无菌工作台上进行操作，以保持操作的无菌性。
3. 取少量痰液用无菌针吸取，均匀涂布在清洁的玻片上，形成薄而均匀的涂片。
4. 涂片制备过程中应注意避免气泡的产生，以免影响检查结果。
三、涂片染色规范1. 使用Ziehl-Neelsen（ZN）染色方法进行涂片染色。
该方法对结核分枝杆菌具有很高的特异性。
2. 涂片制备后应立即进行染色处理，以保持染色效果的稳定性。
3. 染色液的配制过程应严格按照标准操作规程进行，并确保染色液的质量符合要求。
4. 薄片浸泡在染色液中的时间应控制在5-10分钟，过长时间的浸泡可能导致染色不均匀。
四、涂片检查规范1. 涂片检查应由经过专业培训的实验医师进行，以确保结果的准确性。
2. 在显微镜下观察涂片时，应先使用低倍镜进行初步筛查，再使用高倍镜进行细致检查。
3. 观察时应注意结核分枝杆菌的特征形态，包括红染的杆菌形状、长度和排列方式等。
4. 对于初筛出阳性结果的涂片，应进行多次观察，以确保结果的可靠性。
五、报告和结果管理规范1. 检查结果应及时记录，并按照规定的格式进行报告。
2. 报告中应包括患者的基本信息、症状、涂片检查结果等。
3. 对于阳性结果的涂片，应及时通知医生，以便制定合理的诊疗方案。
微生物痰标本处理标准操作程序
痰标本处理标准操作程序1呼吸道标本细菌培养检测结果的准确、可靠。
2深部痰标本或下呼吸道分泌物。
3无菌痰杯或咽拭子。
4BD Phoenix 100 全自动细菌分析仪。
55.1 标本采集5.1.1 采样时机：在抗生素药物使用之前采集清晨第一次痰液送检。
a) 痰标本：最好在应用抗菌药物之前采集标本。
以晨痰为最好。
对支气管扩张症或与支气管相通的空洞患者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰液。
b)下呼吸道分泌物、支气管纤维镜刷片：也宜早晨空腹采集为佳。
5.1.2 采集方法a) 痰液标本采集患者清晨起床后，用清水反复漱口后用力自气管咳出第一口痰于灭菌容器内，立即送检。
对于痰量少或无痰的患者可采用雾化吸入加温至 45℃的10%NaCl 水溶液，使痰液易于排出。
对咳痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，使其咳嗽，将痰收集于灭菌容器内送检。
b) 环甲膜穿刺吸痰对于一些疑难、病情危重或免疫受损患者继发肺部感染可用一些侵入性诊断技术采集下呼吸道标本。
若采用环甲膜穿刺吸痰法取痰液标本，藉套管针自环甲膜插入消毒塑料管吸取分泌物，作病原体培养，不受口腔、咽部病原体的污染，可较准确地反映下呼吸道及肺部感染的病原菌。
本方法简便实用，阳性率高，结合定量培养可能区别假阳性。
但本检查有轻微创伤性，并发症包括皮下气肿、气管内出血等。
有出血倾向、严重心血管疾病者禁用。
c)纤维支气管镜采集法经(纤支镜)直接吸引下呼吸道分泌物，由于纤支镜通过口咽部时同样受到污染，因此认为也不比咳出的痰更好。
经纤支镜以附刷的双层套导管方式直接采集肺部分泌物，进行细菌、真菌、厌氧菌培养和免疫荧光等检查，往往能可靠地找到感染病原体。
由于其效果尚无法达到完全不受污染的情形，所以应进行定量培养，其细菌浓度＞103cfu/ml 则有意义。
经过临床评估，此种采样方式临床应用价值颇高。
采样时防污染标本刷取样应深入，且应多方向旋转及上下移动，这样取痰可提高痰培养的敏感性。
肺结核痰涂片检查工作规范
肺结核痰涂片检查工作规范--------------------------------------------------------------------------------痰涂片检查是肺结核病人诊断与鉴别诊断、制定化疗方案、疗效考核的主要方法或手段。
为贯彻落实市卫生局《关于在全市一级以上医疗单位中开展传染性肺结核筛查工作的通知》的精神，加强传染性肺结核病人发现力度，特制定本规范。
一、痰检的对象和要求（一）对象1．咳嗽、咳痰≥3周或有咯血或血痰症状以及胸片异常者。
2．进行疗效考核的病人：凡已确诊、登记、治疗的肺结核病人，在化疗期间应按规定定期作痰菌复查。
1）初治涂阳病人（含重症涂阴病人）在疗程满2、5、6个月时，复治涂阳病人在疗程满2、5、8个月时，各查痰一次。
2）初、复治涂阳病人在疗程满2个月时，痰菌仍为阳性者，应在治疗满 3个月时增加查痰一次。
3）确诊、登记的涂阴肺结核病人，即使病人因故未接受治疗，也应在登记后满2和6个月时进行痰菌检查。
（二）要求1．初诊病人应送3份痰标本（夜间痰、清晨痰和即时痰）。
如无夜间痰，在留清晨痰后2～3小时再留取一份痰标本；或在送痰时，留取两份即时痰。
治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰（清晨痰和夜间痰）。
2．痰标本采集：即时痰为病人就诊时咳出的痰液。
清晨痰为清晨深咳出的痰液。
夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液。
痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样性质的痰液为合格标本，痰量应为3～5毫升。
应由检验人员或专人验收痰标本，痰液不合格者，要求重新送检。
难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但应注明标本性状以供分析结果时参考。
痰标本的容器，应采用国家参比实验室推荐的国际通用痰瓶或采用直径4厘米、高2厘米的塑料或涂蜡纸密闭盒。
留痰容器上应注明病人姓名、编号（门诊序号或病人登记号）及日期。
3．痰标本的保存和输送：痰标本容器密封，勿倒置，严防痰液外溢。
不能立即作涂片检查的痰标本，须置4℃冰箱保存，防止痰液干涸或污染。
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痰涂片
• 选择标本脓性或血性部分涂成均匀薄片 • 进行咳痰标本质量判断 • 显微镜下细菌学观察
痰涂片
• 咳痰标本的质量判断：在低倍镜下观察， 记录平均每低倍镜视野白细胞和鳞状上皮 细胞数（5个视野） 合格：EC<10/LPF 不合格：EC≥10/LPF
• •
痰涂片
• 合格痰标本镜下观察细菌情况 • 记录平均每油镜视野中革兰阳性或阴性、 球菌或杆菌的大致数量。 • 如发现许多具有荚膜、矛头状排列的双球 菌(有时呈单个、短链状), 可能是肺炎链球 菌 • 发现许多革兰阳性球菌成簇状排列, 可能是 金黄色葡萄球菌
痰涂片的标准操作规程痰来自片• 痰标本：受口咽部污染 • 污染严重－－不合格痰标本－－错误的指 示肺炎的致病菌－－错误的评估和治疗－ －差的愈后 • 污染不严重－－合格痰标本－－正确结果 －－正确指向肺炎的致病菌－－正确的评 估和治疗－－愈后较佳
下呼吸道标本种类
• • • • • • 自然咳痰 诱导痰 经鼻腔或口腔吸痰 经人工气道吸痰 经支气管镜采样 支气管肺泡灌洗液（BALF）。
痰涂片
• 不合格标本 • 拒收 • 遵医嘱
生物安全
• • • 拒收不符合安全标准的标本留取瓶。 在生物安全柜内打开标本。 在生物安全柜内操作肉眼观察有无微生物 存在迹象。
生物安全
• 操作产生的气溶胶，可能含有高浓度的致 病菌或真菌，利用实验室的方法和技术采 取正确的自我保护措施。 • 塞子和胶带可能含有高浓度的致病菌，应 防止接触。 • 正确处理被该标本污染的物品。
痰涂片
• • 痰标本取材后2 h内进行处理 如时间不足可将标本放置在2℃- 8℃保存。
痰涂片
• • • 记录痰的体积与重量、颜色、性状 颜色：黄、白、红、绿 性状：水样、唾液样、脓样、粘液样、脓 性、粘液性、泡沫性、血性等
痰涂片
• • • • 所有痰标本必须进行涂片！ 必须在生物安全柜内进行操作！ 必须戴乳胶手套！ 必须打开风机！