甾体激素类药物的鉴别.
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甾体激素类药 物的鉴别
演讲者：史颖超 048012126
鉴别的意义 甾体激素类鉴别
拓展
鉴别， what&why?
鉴别试验： 是根据药物的分子结构、理化性质, 采用物理、化学或生物学方法来判断药物 的真伪。是药检工作中的首项任务，只有 在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物 的杂质检查、含量测定。
基本结构
醇制KOH
H SO
C HOH
CH CH OCOCH
香
戊酸、己酸酯类药物，有特臭。
7、卤元素的呈色反应
卤素在母核上：
氧瓶燃烧法破坏
如地塞米松磷酸钠
呈蓝紫色
茜素氟蓝—硝酸亚铈
有机氟 有机氯
有机破坏
Fˉ Clˉ
硝酸—硝酸银
卤素在侧链上：
加热水解法破坏
如丙酸倍氯他索
AgCl
总结
炔雌醇
CH3 C O
m.p.201℃
CH3 C N OH
+2HO O
NH2 N HO
+2H2O
黄体酮
双肟m.p.238℃
OCOCH2CH2 C6H5 O +NH2CNHNH2 HCl O H2N O C H N N
OCOCH2CH2
+H2O+HAc
苯丙酸诺龙
OCOCH2CH3
缩氨基脲m.p.178~185℃
△4–3–酮 C17–α–醇酮 基 肾上腺皮质 激素 雄性与蛋白 同化激素 雌性激素 C17–β– 羟基 C17–甲酮基 A环为3– OH苯环
+ +
+ + + +
孕激素
鉴别反应
+
UV、羰 还原性（碱 可成酯 基试剂、 性酒石酸酮、 氨基脲反 氨制AgNO3） 应
+
与亚硝基铁氰 UV、与 化钠、间二硝 重氮苯磺 基苯反应 酸盐反应
制备衍生物测定其熔点
[原理] 1.甾醇、甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯、 肟、缩氨脲. 测定其熔点进行鉴别。 2.利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体， 测定其熔点进行鉴别。 [特点] 繁琐费时，但专属性强.目前仍为一些国家药典采 用。
COCl + HO KOH O C O
+KCl+H2O
[方法]：对照品法
取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。
2.要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对 照品溶液的主斑点相同。
H2SO4
H3PO4 呈色 HClO4 HCl （荧光）
硫酸呈色反应应用最广 1）操作简便 2）反应灵敏 3）操作条件不易掌握
（某些甾体激素药物与硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈 色。如甲睾酮.）
(二)官能团的反应
1、C17–α–醇酮基（还原性）
适用：肾上腺皮质激素。 能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制 AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。 其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可 用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.
CH2OCOCH3 C=O O OH
+
O
N N
N
H 2O
N OH-
+
醋酸泼尼松
OH CH C=O O OH OH
四氮唑盐
+
N N
N N
+ CH3COOH
O
深红色的三苯甲鐕
2、C3–酮基和C20–酮基
与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯 肼反应生成腙。
CONHNH2 NO2
N CONHNH2
机理：
R C CH + AgNO 3
R C C A g↓ + HNO3
NaOH滴定，电 位法指示终点
6、水解产物的反应
适用： 本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯
原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸 酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物 来鉴别。
醋酸酯 类药物：
R OCOCH
C21
18 12 19 1 11 9 10 5
甾体激素 类药物均 具有环戊 烷骈多氢 菲母核。
C20
13 17
C
7
D
16
2
3
A
4
B
6
14 15 8
鉴别方法
化学鉴别法
呈色反应 官能团反应
制备衍生物测熔点 光谱法 色谱法 UV IR TLC HPLC
（一）与强酸的呈色反应
(甾体母核）
甾体激素 类药物
CONHNH2 .H2SO4
NO2
O
O NH N
O CH3 CH3 H H O H
CH3 H
CONHNH2
N
HCl
黄色
NNHCO N
+
N
室温下长 时间加热
O NH N
N
3，20-双腙
3.C17-甲酮基的呈色反应 适用：具有甲酮基的甾体激素类药物。
孕激素
能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反 应呈色。 黄体酮 其他甾体
△４-3-酮
～240nm
★ ★红外分光光度法
[必要性]
1.许多重要的甾体激 素药物紫外光谱非常 相似，紫外光谱鉴别 缺乏专属性。 2.甾体激素药物化学 结构上仅有微小的差 异，也难以用化学鉴 别法来区分。
红外分光光度法的优势
1.对样品无破坏, 样品用量较少 2.特征性极强、 信息量丰富: 每种化合物都有红外吸收，从红外光谱可以得 到大量信息。官能团区的吸收反映了化合物中 官能团的特征，而指纹区的吸收对于指认分子 提供了可靠的依据。
亚硝基铁氰化钠
蓝紫色 淡橙色或不显色
☻黄体酮专属性反应，称为“碱性硝普钠反应。
4.酚羟基的呈色反应
适用：雌激素类药物。 能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮 染料。 OH OH
+
COO
N=N
SO3-
H+
COO N=N SO3H
苯甲酸雌二醇
红色
5、乙炔基沉淀反应
适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、 炔诺酮）。
亚甲基、角甲基吸收 带
C CH OH H H H
γCH
HO
CH
1
ν
3300cm1616cm
-1
C C
1590cm1
苯环指纹区
3610cm
酚羟基 OH
-1
ν
3505cm -1
OH
ν
1505cm1
醇羟基
苯环的骨 架振动
黄体O
薄层色谱法
[特点]： 简便、快速、分离效能高。 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 ChP很多甾体激素制剂均用该法鉴别。 [应用范围]： 甾体激素制剂的鉴别、纯度检查以及含 量测定前的分离和制剂稳定性的研究。
OH
+H2O O
KOH O
+CH3CH2COOH
丙酸睾丸素
m.p.150~156℃
★紫外分光光度法
[原理]： 具有C=C-C=O共轭系统， △４-3-酮 ～240nm 和C=C-C=C共轭系统， 苯环（B带：280nm，K带：220nm ） 1.可用规定波长处的吸收度鉴别 如:曲安西龙 2. 吸收度的比值法。 如: 丙酸倍氯米松
演讲者：史颖超 048012126
鉴别的意义 甾体激素类鉴别
拓展
鉴别， what&why?
鉴别试验： 是根据药物的分子结构、理化性质, 采用物理、化学或生物学方法来判断药物 的真伪。是药检工作中的首项任务，只有 在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物 的杂质检查、含量测定。
基本结构
醇制KOH
H SO
C HOH
CH CH OCOCH
香
戊酸、己酸酯类药物，有特臭。
7、卤元素的呈色反应
卤素在母核上：
氧瓶燃烧法破坏
如地塞米松磷酸钠
呈蓝紫色
茜素氟蓝—硝酸亚铈
有机氟 有机氯
有机破坏
Fˉ Clˉ
硝酸—硝酸银
卤素在侧链上：
加热水解法破坏
如丙酸倍氯他索
AgCl
总结
炔雌醇
CH3 C O
m.p.201℃
CH3 C N OH
+2HO O
NH2 N HO
+2H2O
黄体酮
双肟m.p.238℃
OCOCH2CH2 C6H5 O +NH2CNHNH2 HCl O H2N O C H N N
OCOCH2CH2
+H2O+HAc
苯丙酸诺龙
OCOCH2CH3
缩氨基脲m.p.178~185℃
△4–3–酮 C17–α–醇酮 基 肾上腺皮质 激素 雄性与蛋白 同化激素 雌性激素 C17–β– 羟基 C17–甲酮基 A环为3– OH苯环
+ +
+ + + +
孕激素
鉴别反应
+
UV、羰 还原性（碱 可成酯 基试剂、 性酒石酸酮、 氨基脲反 氨制AgNO3） 应
+
与亚硝基铁氰 UV、与 化钠、间二硝 重氮苯磺 基苯反应 酸盐反应
制备衍生物测定其熔点
[原理] 1.甾醇、甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯、 肟、缩氨脲. 测定其熔点进行鉴别。 2.利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体， 测定其熔点进行鉴别。 [特点] 繁琐费时，但专属性强.目前仍为一些国家药典采 用。
COCl + HO KOH O C O
+KCl+H2O
[方法]：对照品法
取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。
2.要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对 照品溶液的主斑点相同。
H2SO4
H3PO4 呈色 HClO4 HCl （荧光）
硫酸呈色反应应用最广 1）操作简便 2）反应灵敏 3）操作条件不易掌握
（某些甾体激素药物与硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈 色。如甲睾酮.）
(二)官能团的反应
1、C17–α–醇酮基（还原性）
适用：肾上腺皮质激素。 能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制 AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。 其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可 用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.
CH2OCOCH3 C=O O OH
+
O
N N
N
H 2O
N OH-
+
醋酸泼尼松
OH CH C=O O OH OH
四氮唑盐
+
N N
N N
+ CH3COOH
O
深红色的三苯甲鐕
2、C3–酮基和C20–酮基
与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯 肼反应生成腙。
CONHNH2 NO2
N CONHNH2
机理：
R C CH + AgNO 3
R C C A g↓ + HNO3
NaOH滴定，电 位法指示终点
6、水解产物的反应
适用： 本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯
原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸 酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物 来鉴别。
醋酸酯 类药物：
R OCOCH
C21
18 12 19 1 11 9 10 5
甾体激素 类药物均 具有环戊 烷骈多氢 菲母核。
C20
13 17
C
7
D
16
2
3
A
4
B
6
14 15 8
鉴别方法
化学鉴别法
呈色反应 官能团反应
制备衍生物测熔点 光谱法 色谱法 UV IR TLC HPLC
（一）与强酸的呈色反应
(甾体母核）
甾体激素 类药物
CONHNH2 .H2SO4
NO2
O
O NH N
O CH3 CH3 H H O H
CH3 H
CONHNH2
N
HCl
黄色
NNHCO N
+
N
室温下长 时间加热
O NH N
N
3，20-双腙
3.C17-甲酮基的呈色反应 适用：具有甲酮基的甾体激素类药物。
孕激素
能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反 应呈色。 黄体酮 其他甾体
△４-3-酮
～240nm
★ ★红外分光光度法
[必要性]
1.许多重要的甾体激 素药物紫外光谱非常 相似，紫外光谱鉴别 缺乏专属性。 2.甾体激素药物化学 结构上仅有微小的差 异，也难以用化学鉴 别法来区分。
红外分光光度法的优势
1.对样品无破坏, 样品用量较少 2.特征性极强、 信息量丰富: 每种化合物都有红外吸收，从红外光谱可以得 到大量信息。官能团区的吸收反映了化合物中 官能团的特征，而指纹区的吸收对于指认分子 提供了可靠的依据。
亚硝基铁氰化钠
蓝紫色 淡橙色或不显色
☻黄体酮专属性反应，称为“碱性硝普钠反应。
4.酚羟基的呈色反应
适用：雌激素类药物。 能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮 染料。 OH OH
+
COO
N=N
SO3-
H+
COO N=N SO3H
苯甲酸雌二醇
红色
5、乙炔基沉淀反应
适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、 炔诺酮）。
亚甲基、角甲基吸收 带
C CH OH H H H
γCH
HO
CH
1
ν
3300cm1616cm
-1
C C
1590cm1
苯环指纹区
3610cm
酚羟基 OH
-1
ν
3505cm -1
OH
ν
1505cm1
醇羟基
苯环的骨 架振动
黄体O
薄层色谱法
[特点]： 简便、快速、分离效能高。 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 ChP很多甾体激素制剂均用该法鉴别。 [应用范围]： 甾体激素制剂的鉴别、纯度检查以及含 量测定前的分离和制剂稳定性的研究。
OH
+H2O O
KOH O
+CH3CH2COOH
丙酸睾丸素
m.p.150~156℃
★紫外分光光度法
[原理]： 具有C=C-C=O共轭系统， △４-3-酮 ～240nm 和C=C-C=C共轭系统， 苯环（B带：280nm，K带：220nm ） 1.可用规定波长处的吸收度鉴别 如:曲安西龙 2. 吸收度的比值法。 如: 丙酸倍氯米松