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•2011 - J. Cell Biol., 193: 307 - 318
Defective nucleotide excision repair with normal centrosome structuresand functions in the absence of all vertebrate centrins.
DeMars G, Fanelli F, Puett D
•2011 - J. Cell Sci., 124: 2349 - 2356
Real-time monitoring of redox changes in the mammalian endoplasmic reticulum.
van Lith M, Tiwari S, Pediani J, Milligan G, Bulleid NJ
293humankidneyDMEM3
B16mousemelanomaRPMI1-3
PC1.0hamsteradenocarcinowenku.baidu.comaRPMI10
质量控制:
纯度>95%(HPLC)
经细菌和哺乳动物细胞系鉴定活性
保存
4°C或-20°C保存2年,避免反复冻融。
产品信息:
产品名称产品编号规格品牌报价折扣
嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月,4℃条件下保质期一年。为了达到最理想的稳定状态和最长的保质期,最好存放于-20°C,保质期为2年。
Puromycin(嘌呤霉素)——pac基因筛选抗生素
2013-11-26 17:21来源:深圳欣博盛生物科技有限公司点击次数:170关键词:Puromycin invivogen
Blasticidin化学特性
CAS号:58-58-2
分子式:C22H29N7O5, 2HCl
分子量:471.51
pKa值:6.8和7.2
分子结构:
推荐使用浓度
大肠杆菌
大肠杆菌对Puromycin不敏感。
哺乳动物细胞
细胞系种属组织培养基Puromycin(ug/ml)
HelahumanuterusDMEM3
(4)病毒转导后约6-8h,再添加1ml完全培养基(血清和双抗,如果已经使用双抗。)到细胞内,然后孵育过夜;
(5)病毒转导后48h,使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。
(6)约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基;
(7)每天检测细胞并观察活细胞生长比例,以及turboGFP表达的水平及所占比例。在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。
Dantas TJ, Wang Y, Lalor P, Dockery P, Morrison CG
注:病毒的MOI越高,每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素筛选时,需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞,但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立的最低浓度。
储存方法和稳定性:
嘌呤霉素稳定性高,可以常温运输,收到产品后4℃存放;
(2)准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度);
(3)细胞孵育过夜后加入筛选培养基,孵育细胞;
(4)约2-3天更换新鲜的筛选培养基;
(5)每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
(6)最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。
►嘌呤霉素筛选稳定转染细胞
(1)day 0:24孔板内以5~8 x 104cells/孔的密度铺板,孵育过夜;
(2)制备筛选培养基:含有最佳筛选浓度嘌呤霉素(由杀灭曲线确定)的新鲜培养基;
(3)day 1:筛选第一天,去除旧的培养基,加入一定量MOI的病毒颗粒;(加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。)
Puromycin是由Streptomyces alboniger(白黑链霉菌)产生的一种肽基核苷抗生素,可抑制原核细胞和真核细胞的肽基转移。Puromycin可抑制革兰氏阳性菌和多种动物细胞和昆虫细胞的增殖,但是真菌和革兰氏阴性菌对Puromycin具有抗性,在一些特殊的情况下,Puromycin也可用于大肠杆菌。目前,Puromycin最重要的应用是用于选择携带pac抗性基因的转染细胞。
使用步骤:(哺乳动物细胞筛选)
►嘌呤霉素杀灭曲线的确定(shRNA稳定转染细胞株,仅作参考)
为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线(kill curve)。
(1)24孔板内以5~8 x 104cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜;
Puromycinant-pr-1100 mg (10 x 1 ml)invivogen¥1,582请询
Puromycinant-pr-5500 mg (50 x 1 ml)invivogen¥5,292请询
文献引用
•2011 - Mol. Endocrinol., 25: 1416 - 1430
The extreme C-terminal region of Gαs differentially couples to theluteinizing hormone and beta2-adrenergic receptors.
Defective nucleotide excision repair with normal centrosome structuresand functions in the absence of all vertebrate centrins.
DeMars G, Fanelli F, Puett D
•2011 - J. Cell Sci., 124: 2349 - 2356
Real-time monitoring of redox changes in the mammalian endoplasmic reticulum.
van Lith M, Tiwari S, Pediani J, Milligan G, Bulleid NJ
293humankidneyDMEM3
B16mousemelanomaRPMI1-3
PC1.0hamsteradenocarcinowenku.baidu.comaRPMI10
质量控制:
纯度>95%(HPLC)
经细菌和哺乳动物细胞系鉴定活性
保存
4°C或-20°C保存2年,避免反复冻融。
产品信息:
产品名称产品编号规格品牌报价折扣
嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月,4℃条件下保质期一年。为了达到最理想的稳定状态和最长的保质期,最好存放于-20°C,保质期为2年。
Puromycin(嘌呤霉素)——pac基因筛选抗生素
2013-11-26 17:21来源:深圳欣博盛生物科技有限公司点击次数:170关键词:Puromycin invivogen
Blasticidin化学特性
CAS号:58-58-2
分子式:C22H29N7O5, 2HCl
分子量:471.51
pKa值:6.8和7.2
分子结构:
推荐使用浓度
大肠杆菌
大肠杆菌对Puromycin不敏感。
哺乳动物细胞
细胞系种属组织培养基Puromycin(ug/ml)
HelahumanuterusDMEM3
(4)病毒转导后约6-8h,再添加1ml完全培养基(血清和双抗,如果已经使用双抗。)到细胞内,然后孵育过夜;
(5)病毒转导后48h,使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。
(6)约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基;
(7)每天检测细胞并观察活细胞生长比例,以及turboGFP表达的水平及所占比例。在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。
Dantas TJ, Wang Y, Lalor P, Dockery P, Morrison CG
注:病毒的MOI越高,每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素筛选时,需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞,但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立的最低浓度。
储存方法和稳定性:
嘌呤霉素稳定性高,可以常温运输,收到产品后4℃存放;
(2)准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度);
(3)细胞孵育过夜后加入筛选培养基,孵育细胞;
(4)约2-3天更换新鲜的筛选培养基;
(5)每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
(6)最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。
►嘌呤霉素筛选稳定转染细胞
(1)day 0:24孔板内以5~8 x 104cells/孔的密度铺板,孵育过夜;
(2)制备筛选培养基:含有最佳筛选浓度嘌呤霉素(由杀灭曲线确定)的新鲜培养基;
(3)day 1:筛选第一天,去除旧的培养基,加入一定量MOI的病毒颗粒;(加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。)
Puromycin是由Streptomyces alboniger(白黑链霉菌)产生的一种肽基核苷抗生素,可抑制原核细胞和真核细胞的肽基转移。Puromycin可抑制革兰氏阳性菌和多种动物细胞和昆虫细胞的增殖,但是真菌和革兰氏阴性菌对Puromycin具有抗性,在一些特殊的情况下,Puromycin也可用于大肠杆菌。目前,Puromycin最重要的应用是用于选择携带pac抗性基因的转染细胞。
使用步骤:(哺乳动物细胞筛选)
►嘌呤霉素杀灭曲线的确定(shRNA稳定转染细胞株,仅作参考)
为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线(kill curve)。
(1)24孔板内以5~8 x 104cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜;
Puromycinant-pr-1100 mg (10 x 1 ml)invivogen¥1,582请询
Puromycinant-pr-5500 mg (50 x 1 ml)invivogen¥5,292请询
文献引用
•2011 - Mol. Endocrinol., 25: 1416 - 1430
The extreme C-terminal region of Gαs differentially couples to theluteinizing hormone and beta2-adrenergic receptors.