人白蛋白重组表达的最新研究进展-ppt

▪ 华东理工大学郭美锦，储炬等于2000年发表文章称该校生 物反应器工程国家重点实验室已经采用 Pichia pastoris 进 行了高密度高表达发酵研究,表达水平已达到5 克/ 升左右。
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来源网址：
▪ 华北制药：
▪ 药用基因工程重组人血白蛋白研发及产业化项目
▪ 华北制药集团新药研究开发有限责任公司从1997年开始采 用毕赤酵母作为宿主菌分泌表达重组人血白蛋（rHSA ）。 经过多年的努力，通过与国内外有关单位协作，已建立了 从菌种构建至发酵、纯化的完整工艺。已得到稳定高效表 达人血白蛋白的基因工程生产菌株完成了中试研究，开发 了具有自主知识产权的纯化工艺路线。制定了重组人血白 蛋白的质量标准草案，中试规模制备的样品各项指标检定 合格。
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国内外研究进展
▪ Lawn R .M. 等在1981年首次报道了重组人血白蛋白 (Recombinant Human Serum Albumin ,rHSA)cDNA序列 和首次采用色氨酸(Trp)启动子，色氨酸引导肽及来自质粒 pBR322的Tcr和Ampr基因构建了第一个表达重组人血白 蛋自的表达载体pHSAI并在大肠杆菌(E.coli)中得到了成功 表达。HSA在大肠杆菌中表达量为细胞总蛋白的7%，但 由于HSA含有大量的二硫键使得其在体外极难完成正确折 叠，未能得到有生物功能的蛋白;同时细菌细胞壁脂多糖 造成热反应也带来很多麻烦。
人血清白蛋白的酵母重组表 达研究进展
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人血清白蛋白供需不平衡
▪ 监管严格
▪ 采血站数量下降
▪ 血液传染病病毒泛滥
▪ 不再审批新的生产企业
▪ 进口受到严格限制
▪ 需求量巨大
▪ 2011年02月12日有文章称《血液制品“告 荒”》
国内血液制品的严重短缺。这类产品，除了人血白蛋白， 其他的血液制品如乙肝免疫球蛋白、静脉丙种球蛋白等都 处于严重短缺的状态。
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国内研究进展
▪ 近几年来，我国也掀起了重组HSA的研究热潮，华北制药 集团、中科院上海生化所、华东理工大学、中山医科大学、 中科院微生物所、过程工程研究所，以及安徽中科大亚杰 科技股份有限公司等单位己经开始利用基因重组技术生产 白蛋白的研究;目前我国在这方面的研究工作已经取得一 定进展。
高
安全 -
低 高 高 -
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酵母表达体系的建立
▪ 毕赤酵母由于分泌蛋白量高、表达稳定，且70年 代人们曾广泛使用毕赤酵母生产单细胞蛋白，已 基本掌握其生长规律及大规模高密度发酵技术， 采用甲醇诱导强启动子AOX，起始转录人血白蛋 白，将表达质粒整合到Pichia pastoris的基因组染 色体上，表达质粒不会因酵母传代而丢失，可稳 定表达目的产物，且表达量高，用甲醇诱导时， 表达率可占分泌总蛋白的80%以上。这非常有利 于产物的提取。
▪ 本项目内容为按照现行CMP 要求开发规模生产艺．建 设药用重组白蛋白生产基地，年生产规模达到吨级。市场 分析，白蛋白总销售量为120-150吨左右。
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▪ 外界传闻：华北制药：马上要公告获得人造白蛋白。 事实上有消息源确认重组人血白蛋白马上投产就等批文 可以理解为一旦批文下发，马上投产 市场价人造白蛋白10克500块 公司设计产能15吨 15吨产能，预计 2010 年底建成，2011 年初投产
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国外研究进展
▪ 国外许多实验室和公司在重组白蛋白方面进行了大量研究， 如英国的DELTA公司，美国的GENETECH公司以及日本 的三菱公司等。日本在重组人血白蛋白方面的研究走在了 最前面。1994年日本的绿十字GREEN CROSS（三菱公 司的前身)公司被批准进人二期临床，现在日本三菱公司 已完成三期临床。该公司已经建厂进行大规模生产，一期 工程完毕可达12.5吨/年的生产能力，并计划逐步提高到 40吨/年，已预定商品名“Albrec”,所生产的产品纯度可 达99.999999%,英DELTA公司已经完成一期临床试验，美 国等正处于临床前研究阶段。
▪ 新闻： 2011中国人血白蛋白制品360°产业论坛 时间： 2011-3-18 至 2011-3-19 地点：上海和颐酒店 主办单位： 世易传媒
▪
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▪ 基因重组人血白蛋白与华北制药
王平 华北制药股份有限公司董事长
关于产品简介：重组人血白蛋白未来将成为重磅产品
同人血白蛋白相比，重组人血白蛋白不仅纯度更高，而且可以有
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人重组白蛋白不同表达体系的对比
Hale Waihona Puke Baidu
技术可行性
表达量
提取、纯化
安全性
活性
细菌 酵母
动物 植物
可行
毫克级
可行
克级。国外 有报道，达 到5g/L,7g/L
技术不成熟，
高
实验室阶段
可行，在马
-
铃薯有成功
表达，不成
熟
难度高，后 修饰困难
难度小。外 分泌，可完 成信号肽切
除 容易
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来源网址：凤凰网财经频道
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主要内容
➢ 国内外进展 ➢ 酵母表达体系的建立 ➢ rHSA在毕赤酵母的表达 ➢ 影响酵母表达外源蛋白的因素 ➢ 提高rHSA表达的一些策略 ➢ rHSA在汉逊酵母中的表达与纯化 ➢ 新型集成干扰素-人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的
分泌表达和纯化 ➢ rHSA 结构分析 ➢ rHSA 的应用展望
效地避免人血白蛋白携带病毒的风险，另外还可以解决血源供应的周
期性等问题。因此，重组人血白蛋白实现大规模量产在血液制品行业
将具有革命意义。
受益于国内血制品行业的高景气度，该产品的市场潜力巨大。人
血白蛋白市场供应缺口较大，并且这种局面不会在短时间改善。基因
重组人血白蛋白是人血白蛋白的替代产品。至今，在国际上掌握重组
白蛋白的厂商也只有三家，日本绿十字、英国 Delta 公司和美国的默
克。国内除华北制药外尚无单位能规模化生产重组白蛋白项目。华北
制药除培养基级白蛋白外还掌握了更高级别的白蛋白技术，白蛋白产
20品11-纯04-化01 技术已经达到国际上先进水平。
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rHSA 表达体系的建立
▪ 随着基因重组技术所表达蛋白的复杂性越来越高， 酵母作为真核生物具有能对所表达的蛋白进行翻 译后修饰，易于大规模培养等优点逐渐取代大肠 杆菌生产外源蛋白。在HSA的重组研究过程中， 人们分别采用了酿酒酵母、汉逊醉母、裂殖酵母、 克鲁维氏酵母、毕赤酵母等作为宿主细胞，以及 转基因动物、转基因植物来分泌表达重组人血白 蛋白。