芦丁的提取与鉴定

芦丁的提取与鉴定
一、实验目的要求
1、熟悉黄酮类化合物的提取原理。

2、掌握芦丁的提取的基本方法。

二、实验重点和难点
芦丁的提取的基本方法。

三、实验原理
芦丁亦称芸香苷，广泛存在于植物界中，其中以槐花米（槐树的花蕾）和乔麦叶中含量较高。

槐花米中的含量为12～16％，已知的成分为：
1、芦丁：熔点为177～178℃，为淡黄色小针状结晶。

溶解度为：冷水中1：8000，热水中1：200，冷乙醇中1：300，热乙醇中1：30。

难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。

2、槲皮素（Quercetin）：熔点为316℃，313～314℃，黄色结晶。

溶于热乙醇1：60、冷乙醇1：650，可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。

3、皂苷：其粗品为白色粉末，经酸水解后得二种皂甙元及糖的部分，两种皂苷元为桦脂醇和槐花双醇，另外还含有槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。

本实验用芦丁在热水冷水溶解度差别较大的性质，用热水提取，然后再利用其在热乙醇和冷乙醇中溶解度的差异，进行精制。

四、实验仪器、试剂与材料
1、仪器：棉花、500ml烧杯、1000ml烧杯、电热套、漏斗、架盘天平、真空泵、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、剪刀、冷凝管、蒸馏烧瓶、乳胶管、研钵、量筒、容量瓶、试管、紫外分析仪、层析缸、聚酰胺酯薄层板。

2、试液：
（1）4mol/L硫酸溶液：取硫酸24ml，边搅拌边加入60ml水中，放冷，加水稀释至100ml，摇匀，即得。

（2）1％三氯化铝乙醇溶液：取三氯化铝1g，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。

（3）0.1mol/L硝酸银试液：取硝酸银1.75g，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。

（4）10％氨试液：取氨10ml，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。

3、试剂与材料：槐米、芦丁对照品、乙醇、硫酸、碳酸钡、盐酸、镁粉、醋酸铅、α-萘酚、正丁醇、醋酸、三氯化铝、硝酸银、氨水、氯仿、甲醇、丁
酮、乙酰丙酮。

五、操作步骤
1、芦丁的提取：取20g槐花米于烧杯中漂洗干净，捞取上浮的花蕾，弃去下沉的杂质，将洗净的花蕾置于1000ml烧杯中，加沸水500ml，煮沸50分钟，不断补充蒸发掉的水分，趁热过滤（用棉花），再用200ml水提取40分钟，合并两次滤液，浓缩1/2体积，放置过夜，析出芦丁。

抽滤，沉淀用少量冷水洗三次，抽干，60℃以下干燥，称重计算收率。

2、重结晶：将粗制芦丁研细，加95％乙醇回流溶解（每2g芦丁加70ml左右乙醇）趁热过滤，滤液浓缩至原体积的1/3～1/4，放置，析出结晶，抽滤，干燥称重，得精制芦丁，计算收率。

3、水解：取1/2量精制芦丁，加少量乙醇回流溶解，然后加4mol/L硫酸溶液（1g芦丁加80ml硫酸）水浴回流1小时，待全部水解后，蒸去乙醇，冷却，析去槲皮素，抽滤，滤液内含糖。

槲皮素沉淀经水洗、抽干、干燥，称重，计算收率。

再用乙醇重结晶一次，得黄色针晶，为槲皮素精品。

含糖的溶液，取10ml于水浴上加热，同时于搅拌下加碳酸钡细粉中各至中性，滤除白色的硫酸钡沉淀，滤液在水浴上浓缩至1～2ml，供纸层析用。

4、层析鉴定：
（1）槲皮素和芦丁的纸层析鉴定：
1）点样：取层析滤纸距下端3cm处用铅笔划线，为原点线，每隔1.5cm处点样品，将点好样品的滤纸在层析缸中饱和30分钟，再上行展开。

2）试液：芦丁乙醇液、芦丁标准品乙醇液、精制槲皮素乙醇液。

3）展开剂：正丁醇-醋酸-水4：1：5。

4）显色：可见光下观察色斑，紫外灯下观察萤光光斑点；喷1％三氯化铝乙醇溶液再观察萤光斑点。

（2）糖的纸层析鉴定：
1）点样：取一号滤纸距下端3cm处用铅笔划线，为原点线，每隔1.5cm处点样品，将点好样品的滤纸在层析缸中饱和30分钟，再上行展开。

2）试液：水解液、葡萄糖水溶液、鼠李糖水溶液。

3）展开剂：正丁醇-醋酸-水4：1：5。

4）显色：氨性硝酸银溶液（临用时等量0.1mol/L硝酸银试液与10％氨试液混合而成）喷洒，加热观察色斑。

（3）槲皮素和芦丁的薄层层析鉴定：
1）固定相：聚酰胺酯薄层板。

2）样品：精制芦丁、芦丁标准品、精制槲皮素。

3）展开剂：氯仿-甲醇-丁酮-乙酰丙酮16：10：5：1。

4）显色：可见光下观察色斑，紫外灯下观察萤光光斑点；喷1％三氯化铝乙醇液再观察萤光斑点。

六、结果与讨论
1、计算芦丁收率，讨论影响收率的因素。

2、根据色谱结果分析所制备的芦丁纯度。