第九版核医学配套课件 6 体外分析技术
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此外，还需有将B、F分开的分离试 剂（方法）；
因此，放免法就是三大试剂，一大 分离试剂（方法）。
5. 放射免疫分析的基本试剂
（1）抗体：亲和力、特异性、滴度（稀释度）； （2）标记抗原： 比活度、放射化学纯度、免疫活性、 生物活性、半衰期足够长、125I； （3）标准品：化学结构、免疫活性、定量精确。
3. RIA标准曲线制作
常用的计算方式有B、B/B0%等。 B或B/B0%作纵坐标来对应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应变量不同，标准曲线
的形状也不同。但是这些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗原浓度变化而变化的函 数关系。
RIA标准曲线
4. 未知样品的测量
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
RIA法抗体稀释曲线示意图
6. 放射免疫分析的分离方法
（1）液相分离方法（沉淀法、双 抗体法、双抗体法+沉淀法）； （2）固相分离法。
RIA沉淀分离法示意图
--孙思邈
第6章 体外分析技术
授课人：XX XX
目录
第一节 放射性标记分析技术 第二节 非放射性标记免疫分析技术 第三节 其他体外分析方法 第四节 体外分析实验室质量控制 第五节 常用体外分析实验室管理方法简介 第六节 体外分析的临床应用
重点难点
掌握 放射免疫分析与免疫放射分析原理、试剂组成及两者比较
γ-免疫计数仪
标记物与被测物之间的函数关系可以用标准竞争 抑制曲线（标准曲线）来表示。 制作方法：
将药盒中一系列已知浓度（递增）的标准品 抗原（标准品），分别加入相应的试管； 加入固定量的*Ag和Ab； 待竞争结合反应达到平衡后，分离抗原的结 合部分和游离部分； 用放射性测量仪（γ-计数仪）测定*Ag-Ab 。（B）或游离*Ag（F）的放射性，在坐标纸 或计算机拟合曲线。
熟悉 非放射性标记免疫分析优点、体外分析实验室质量控制
了解 体外分析实验室管理方法、体外分析项目
体外分析技术概述
体外分析技术是核医学专业重要的组成部分，是核医学专业发展的基础 。核医学体外分析技术是在放射免疫分析基础上发展起来的集各种体外分析 方法为一体，以标记免疫分析（放射性核素及各类发光物质为标记物）为核 心，其他分析方法为辅助的一类临床实验医学。
—
—
100
—
125I-Ag
100
100
100
100
蒸馏水
100
—
—
—
抗体
—
100
100
100
混匀，37℃温育1小时
分离试剂
500
500
500
500
充分混匀，室温（15～28℃）下放置15分钟
离心前任取两管测量，作为总放射性T，3500rpm（离心力1500g）离心20分钟，立即弃去上清
液，测各管1分钟的发射性计数（cpm）。
温浴反应达平 衡
加入*Ag已知定量(ml)
分离（固相 、液相）B、 F
Ag【各种体液（待
测抗原)】与一定量
的*Ag (标记抗原）
共同与限量特异性
Ab发生反应
RIA分析待测样本测量示意图
5. 放射免疫分析的基本试剂
RIA试剂盒组成
放免分析的三大试剂 ➢ 特异性抗体（Ab)； ➢ 标准品抗原 (Ag) ； ➢ 标记抗原(*Ag) ；
3. RIA标准曲线制作
纵坐标 横坐标
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
温浴反应达平 衡
加入已知定量(ml) 125IAg标记抗原（*Ag）
RIA标准曲线制作
分离（固相 、液相）B、 F
B%=B/(B+F )
F%=F/(B+F )
R=B/F
3. RIA标准曲线制作
γ-计数仪：实际测量的放射性信号 是仪器输出的电脉冲数，单位为： cpm（counts perminute）或者 cps（counts persecond）。
20世纪50年代，放射免疫分析法的建立与临床应用，开创了微量物质 检测的新纪元。
1. RIA的基本原理
特异性 抗体 Ab
百度文库
*Ag与Ag 免疫活性相同 ；
在一定的反应条件下；
*Ag、Ab为恒定量；
*Ag＋Ag > Ab。
Ag =* Ag , AgAb =*AgAb
B%=B/(B+F)
Ag > *Ag , *AgAb (B) *Ag(F)
“十三五”普通高等教育本科国家级规划教材 卫生部“十三五”规划教材
全国高等医药教材建设研究会“十三五”规划教材 全国高等学校教材
供基础、临床、预防、口腔医学类专业用
《核医学》(第9版) 配套课件
主编 王荣福/安锐
《核医学》(第9版)
凡大医治病，必当安神定志，无欲无求，先发大慈恻隐之心，誓愿 普救含灵之苦。
核医学体外分析是对取自人体的生物样本进行微生物学、免疫、化学、 血液学、生物物理、细胞学、病理学或其他检测，为人类疾病早期诊断、预 防、治疗或健康评价提供信息的学科。体外分析技术分为放射分析和非放射 性分析技术。
放射性技术 RIA
免疫学技术
1977Yalow 获诺贝尔奖
微生物： RMA； 酶： R E A ； 受体：R R A ； 特异结合蛋白：CPBA。
改变结合体对
Ag
Ag-Ab
+Ab
*Ag *Ag-Ab
改变标记物
荧光：FIA（RMA）； 化学发光：CLA； 酶：EIA。
小分子半抗联接125I； 单克隆技术； 固相技术； 商品化的药盒。
理论与实践上更丰富 更完善的RIA： ➢ 可测物达300多种； ➢ 涉及生命科学及临床 与基础多个学科； ➢ RIA显像； ➢ RIA治疗。
F%=F/(B+F)
Ag < *Ag , *AgAb (B) *Ag (F)
R=B/F
RIA的基本原理示意图，原理是竞争性结合抑制反应
2. 放射免疫分析加样流程
RIA加样程序（体积：µl）
试剂 标准品
NSB管 100（零标准品）
S0-S5标准管 100
样品管 —
质控管 —
质控血清
—
—
—
50
待测样本
放射免疫分析法原理与体外分析技术发展示意图 RIA是所有标记免疫分析的基础，超微量分析的检测源于RIA，RIA及在此基 础上发展起来的检测方法，是临床医疗不可缺的诊断、治疗疗效评价的手段
第一节
放射性标记分析技术
一、放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是指在体外条件下, 利用非标记抗原（含待测抗原 及标准品，简称Ag）及定量的放射性核素标记抗原（*Ag）对限量的特异性 抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的 一种超微量分析技术。
因此，放免法就是三大试剂，一大 分离试剂（方法）。
5. 放射免疫分析的基本试剂
（1）抗体：亲和力、特异性、滴度（稀释度）； （2）标记抗原： 比活度、放射化学纯度、免疫活性、 生物活性、半衰期足够长、125I； （3）标准品：化学结构、免疫活性、定量精确。
3. RIA标准曲线制作
常用的计算方式有B、B/B0%等。 B或B/B0%作纵坐标来对应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应变量不同，标准曲线
的形状也不同。但是这些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗原浓度变化而变化的函 数关系。
RIA标准曲线
4. 未知样品的测量
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
RIA法抗体稀释曲线示意图
6. 放射免疫分析的分离方法
（1）液相分离方法（沉淀法、双 抗体法、双抗体法+沉淀法）； （2）固相分离法。
RIA沉淀分离法示意图
--孙思邈
第6章 体外分析技术
授课人：XX XX
目录
第一节 放射性标记分析技术 第二节 非放射性标记免疫分析技术 第三节 其他体外分析方法 第四节 体外分析实验室质量控制 第五节 常用体外分析实验室管理方法简介 第六节 体外分析的临床应用
重点难点
掌握 放射免疫分析与免疫放射分析原理、试剂组成及两者比较
γ-免疫计数仪
标记物与被测物之间的函数关系可以用标准竞争 抑制曲线（标准曲线）来表示。 制作方法：
将药盒中一系列已知浓度（递增）的标准品 抗原（标准品），分别加入相应的试管； 加入固定量的*Ag和Ab； 待竞争结合反应达到平衡后，分离抗原的结 合部分和游离部分； 用放射性测量仪（γ-计数仪）测定*Ag-Ab 。（B）或游离*Ag（F）的放射性，在坐标纸 或计算机拟合曲线。
熟悉 非放射性标记免疫分析优点、体外分析实验室质量控制
了解 体外分析实验室管理方法、体外分析项目
体外分析技术概述
体外分析技术是核医学专业重要的组成部分，是核医学专业发展的基础 。核医学体外分析技术是在放射免疫分析基础上发展起来的集各种体外分析 方法为一体，以标记免疫分析（放射性核素及各类发光物质为标记物）为核 心，其他分析方法为辅助的一类临床实验医学。
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100
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125I-Ag
100
100
100
100
蒸馏水
100
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抗体
—
100
100
100
混匀，37℃温育1小时
分离试剂
500
500
500
500
充分混匀，室温（15～28℃）下放置15分钟
离心前任取两管测量，作为总放射性T，3500rpm（离心力1500g）离心20分钟，立即弃去上清
液，测各管1分钟的发射性计数（cpm）。
温浴反应达平 衡
加入*Ag已知定量(ml)
分离（固相 、液相）B、 F
Ag【各种体液（待
测抗原)】与一定量
的*Ag (标记抗原）
共同与限量特异性
Ab发生反应
RIA分析待测样本测量示意图
5. 放射免疫分析的基本试剂
RIA试剂盒组成
放免分析的三大试剂 ➢ 特异性抗体（Ab)； ➢ 标准品抗原 (Ag) ； ➢ 标记抗原(*Ag) ；
3. RIA标准曲线制作
纵坐标 横坐标
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
温浴反应达平 衡
加入已知定量(ml) 125IAg标记抗原（*Ag）
RIA标准曲线制作
分离（固相 、液相）B、 F
B%=B/(B+F )
F%=F/(B+F )
R=B/F
3. RIA标准曲线制作
γ-计数仪：实际测量的放射性信号 是仪器输出的电脉冲数，单位为： cpm（counts perminute）或者 cps（counts persecond）。
20世纪50年代，放射免疫分析法的建立与临床应用，开创了微量物质 检测的新纪元。
1. RIA的基本原理
特异性 抗体 Ab
百度文库
*Ag与Ag 免疫活性相同 ；
在一定的反应条件下；
*Ag、Ab为恒定量；
*Ag＋Ag > Ab。
Ag =* Ag , AgAb =*AgAb
B%=B/(B+F)
Ag > *Ag , *AgAb (B) *Ag(F)
“十三五”普通高等教育本科国家级规划教材 卫生部“十三五”规划教材
全国高等医药教材建设研究会“十三五”规划教材 全国高等学校教材
供基础、临床、预防、口腔医学类专业用
《核医学》(第9版) 配套课件
主编 王荣福/安锐
《核医学》(第9版)
凡大医治病，必当安神定志，无欲无求，先发大慈恻隐之心，誓愿 普救含灵之苦。
核医学体外分析是对取自人体的生物样本进行微生物学、免疫、化学、 血液学、生物物理、细胞学、病理学或其他检测，为人类疾病早期诊断、预 防、治疗或健康评价提供信息的学科。体外分析技术分为放射分析和非放射 性分析技术。
放射性技术 RIA
免疫学技术
1977Yalow 获诺贝尔奖
微生物： RMA； 酶： R E A ； 受体：R R A ； 特异结合蛋白：CPBA。
改变结合体对
Ag
Ag-Ab
+Ab
*Ag *Ag-Ab
改变标记物
荧光：FIA（RMA）； 化学发光：CLA； 酶：EIA。
小分子半抗联接125I； 单克隆技术； 固相技术； 商品化的药盒。
理论与实践上更丰富 更完善的RIA： ➢ 可测物达300多种； ➢ 涉及生命科学及临床 与基础多个学科； ➢ RIA显像； ➢ RIA治疗。
F%=F/(B+F)
Ag < *Ag , *AgAb (B) *Ag (F)
R=B/F
RIA的基本原理示意图，原理是竞争性结合抑制反应
2. 放射免疫分析加样流程
RIA加样程序（体积：µl）
试剂 标准品
NSB管 100（零标准品）
S0-S5标准管 100
样品管 —
质控管 —
质控血清
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50
待测样本
放射免疫分析法原理与体外分析技术发展示意图 RIA是所有标记免疫分析的基础，超微量分析的检测源于RIA，RIA及在此基 础上发展起来的检测方法，是临床医疗不可缺的诊断、治疗疗效评价的手段
第一节
放射性标记分析技术
一、放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是指在体外条件下, 利用非标记抗原（含待测抗原 及标准品，简称Ag）及定量的放射性核素标记抗原（*Ag）对限量的特异性 抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的 一种超微量分析技术。