体外培养成骨细胞的研究进展

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成牙骨质细胞的研究进展

成牙骨质细胞的研究进展

成牙骨质细胞的研究进展随着现代医学技术的不断发展,人类对于人体各器官的认知也日益提高。

在口腔领域中,成牙骨质细胞起着重要的作用,这是一类被广泛研究的细胞类型。

本文将介绍成牙骨质细胞的研究进展。

一、成牙骨质细胞的定义、分类及特点成牙骨质细胞是一种存在于口腔中的细胞,直接参与到人体的循环和代谢中。

成牙骨质细胞被广泛应用于齿周组织再生、骨缺损修复等临床治疗中。

成牙骨质细胞可以被分为牙骨质细胞和成骨细胞,其中牙骨质细胞主要存在于成牙的牙本质和牙周膜中,成骨细胞则主要分布在人体中的骨骼系统中。

成牙骨质细胞具有很高的增殖和分化潜能,在体外培养中可以通过合适的生长环境,使细胞增殖完全,同时也可以转变成其他骨骼系统中的细胞类型。

此外,成牙骨质细胞还可以分泌一系列的细胞因子和细胞外基质成分,对周围组织的再生和修复起到积极的促进作用。

二、成牙骨质细胞在牙髓组织的重要作用在牙髓组织修复和再生中,成牙骨质细胞的作用十分重要。

牙髓组织是成牙中最重要的一部分,它由一系列的血管、神经、间充质细胞、干细胞以及成牙骨质细胞等组成。

在牙髓组织发生损伤或受到其他影响时,成牙骨质细胞可以通过分化和增殖,再生出需要的组织。

研究表明,成牙骨质细胞可以通过促进骨形成、增强细胞和基质组分的分泌等作用来改善损伤的牙髓组织。

同时,成牙骨质细胞还可以分泌一系列的生物活性物质,包括生长因子、细胞因子、胶原蛋白、磷酸钙等成分,以促进受损牙髓组织的再生和修复。

三、成牙骨质细胞在口腔领域中的应用随着对成牙骨质细胞的认识和探索,人类开始将其应用于口腔领域的治疗中。

目前,成牙骨质细胞的应用领域主要包括齿周组织再生和骨缺损修复两个方面。

齿周组织再生是指再生缺损齿周膜、纤维连接组织和骨组织等剑齿周组织。

通过培养和使用成牙骨质细胞,可以促进其分化为牙骨质细胞、成骨细胞或是各类辅助细胞,从而实现齿周膜和骨组织的再生和重建。

骨缺损是一种常见的口腔问题,包括牙周炎、牙龈炎和齿周囊炎等。

人骨髓间充质干细胞体外向软骨细胞分化的实验研究

人骨髓间充质干细胞体外向软骨细胞分化的实验研究

( B C)i oco doy snm nl e c h r i t . Meh d T e oe r wmeeey a s m cl B S )ot ndi h MS n h nret oo yr u ue nvr t ei a io to s h n r sn hm lt e b ma o e l( M C b ie a n
层 培 养 法 在 软 骨 诱 导 剂 下 进行 诱 导 培 养 2 , 常 规 培 养 液 培养 的 B S 1 以 d M C作 为 阴性 对 照 。光 镜 下 观 察 诱 导 细 胞 形 态 学 的改
变, 苏木 素一 伊红 ( E 染 色、 H ) 甲苯胺蓝染 色、 Ⅱ型胶原蛋 白免疫组化等方法检 测诱 导细胞 的分泌 功能。 结果 学检测 阳性 , 对照组 阴性 。 结论 成人 B C在单层培养条件下可成功诱 导分化为软骨细胞。 MS
WU J —h n , A G T n — o X i , i c a g Y N o gt , U X a WE a -u ,H N J nw i F N Qn —u A B oa a a o N Y nh a A i —e, A i y ,M a・n a g ( r oa d sO cl yIstt, ag uH si lte o r layMei l n e i , i n7 0 3 , h a x, O t p ei no g tu T n d o t , ut Mit dc i rt X 10 8 S a n i h c o nie p a h F h ir a U v sy a C ia hn )
R sac n d eet t no u nb n ro -eie sn y l t cl t h n rct io eerho i rnii f ma o emarw dr dmee c ma s m l i oc od oye i v r f ao h v h e esn sn t

体外培养软骨细胞方法及其影响因素的研究进展

体外培养软骨细胞方法及其影响因素的研究进展

oral head cartilage[J].Clin OTthop Relat Res,1976,121:303 [4]Manning WK,Bonner WM.IsolAtion and culture of chondrocytes from human articular cartilage[J],Arthritis Rheum,1967,10(3):235— 239
[5]
宁旭,尚显文,尹培荣,等.胶原酶一次消化法培养兔软骨细胞 [J],贵卅I医药,2004,28(6):490
DN,Yang PY,Ku MC,et
[6]Hu
a1.Isolation and cultivation
Med
of human
articular
chondrocytes[j],Kaohsiung J
万方数据
华北煤炭医学院学报2009年7月第1l卷第4期J
North China CoM Medical University 2009
July,11(4)
・499・
3.2负性作用白细胞介索(IL)是由白细胞、内皮细胞、软骨 细胞等产生。IL对关节软骨细胞代谢作用主要表现为抑制透明 软骨特征性n、IV型胶原的合成,促进I、IⅡ型胶原的合成,使软 骨细胞变性,抑制软骨细胞增殖和蛋白多糖的合成;对关节软骨 的降解作用主要表现在促进软骨细胞合成和分泌金属蛋白酶, 提高软骨基质巾溶解蛋白分子酶类的活性。大量实验研究表 明,IL一1、IL一2、IL一6、IL一8、IL一10、IL一12均与关节软・跨’损 伤有关。另外,TNF也对软骨细胞有一定的损伤作用。 总之,体外关节软骨细胞培养的方法众多,并受到众多复杂 因素的调控,如何更好的综合运用这些方法,综合有利因素,仍 需大量实验进行进一步研究。 参考文献

光生物调节作用对高糖环境下成骨细胞影响的体外实验研究

光生物调节作用对高糖环境下成骨细胞影响的体外实验研究

■论著・光生物调节作用对高糖环境下成骨细胞影响的体外实验研究*王欢欢萇彪李炜温宁【摘要】目的:研究高糖环境下光生物调节作用对成骨细胞增殖、分化的影响。

方法:将成骨前体细胞MC3T3-E1分为对照组、光照组、高糖组和高糖+光照组,首先用CCK-8法检测各组24h、48h和72h的细胞活力,然后检测14天碱性磷酸酶染色情况及其活性,并对21天钙结节进行茜素红染色并半定量分析,实时荧光定量PCR检测21天成骨相关基因OCN、Runx2的表达,最后统计学分析各组间的差异。

结果:与对照组相比,光照组在24h、48h、72h的细胞活力增强,14天时碱性磷酸酶染色及活性增强,21天钙结节形成增加、OCN 和Runx2的表达上升;与对照组相比,高糖组在48h、72h的细胞活力下降,14天时碱性磷酸酶染色及活性减弱,21天钙结节形成减少、OCN及Runx2的表达降低;高糖+光照组与高糖组相比,在24h、48h、72h的细胞活力升高,14天时碱性磷酸酶染色及活性增强,21天钙结节形成增加、OCN和Runx2的表达增强;高糖+光照组与对照组相比,在21天时钙结节形成增加,其余指标差异无统计学意义。

结论:在高糖环境下,成骨细胞经光生物调节作用,可补偿高糖对细胞增殖分化的抑制,可为促进高糖环境下颌骨缺损的<关键词:光生物调节作用;高糖环境;成骨细胞;颌骨缺损[中国图书分类号]R783[文献标识码]A D01:10.19749/.cjgd.l672-2973.2021.03.001Effect of photobiomodulationon osteoblasts in high glucose environment in vitroWANG Huan—hua(+CHANG Biao,LI Wei,WEN N ing.(Beijing Friendship Hospital Affiliated to Capital Medical University G Chinese Academy ofSciences G Chinese PLA General Hospital,Beijing100050,China)[Abstract]Objective:To study the effect of photobiomodulation(PBM)on the proliferation and differentiation of osteoblasts in high glucose environment.Methods:MC3T3-E1cells were divided into four groups:control group,light group high glucose group,and high glucose+light K-8method was used to detect the cell viability of MC3T3-E1cells at24h, 48h and72h,alkaline phosphatase staining and its activity at14d were detected,alizarin red staining and semi quantitative analysis were performed on calcium nodules at21d,and the expression of osteogenic related genes OCN and Runx2at21d were detected by real-time quantitative PCR.Finally,the differences between the groups were statistically analyzed.Results: Compared with the control group,the cell viability of t he light group increased at24h,48h and72h,the alkaline phosphatase staining and its activity increased at14d,the calcium nodule formation increased at21d,and the expression of OCN and Runx2increased;Compared with the control group,the cell viability of high glucose group decreased at48h and72h,the staining and activity of alkaline phosphatase decreased at14d,the formation of calcium nodule decreased at21d,and the expression of OCN and Runx2decreased;Compared with the high glucose group,the viability of cells in the high glucose+ light group was increased at24h,48h and72h,the alkaline phosphatase staining and activity increased at14d,the calcium nodule formation increased at21d,and the expression of OCN and Runx2increased;The calcium nodule formation increased at21d in the high glucose+light group and the other indexes were not statistically significant compared with the control group.Conclusion:Low level laser irradiation of osteoblasts can compensate the inhibition of cell proliferation and differentiation caused by high glucose,which can provide a theoretical basis for promoting the repair of j aw defects in high glucose environment.Key words:photobiomodulation(PBM);high glucose environment;osteoblasts;jaw defects水基金项目:国家自然科学基金(项目编号:51972339)王欢欢首都医科大学附属北京友谊医院口腔科医师北京100050萇彪解放军总医院第一医学中心激光科主治医师北京100853李炜中国科学院博士北京100049温宁通讯作者解放军总医院第一医学中心口腔科主任医师教授北京100853・129・由外伤、炎症、肿瘤等引起的颌骨缺损在口腔临床中极为常见,而糖尿病患者因机体长期处于高血糖水平,会引起骨代谢紊乱,影响颌骨缺损修复[I]O有研究表明,光生物调节作用(photobio-modulation,PBM)可以作用于骨缺损区促进骨再生[2-3]o光生物调节作用又叫做低强度光疗、弱激光治疗等,主要指利用低强度的激光照射组织或细胞,引起光生物的治疗。

小鼠成骨细胞体外分离培养及鉴定

小鼠成骨细胞体外分离培养及鉴定
中图分类号 : 83 Q 1 文献标 识码 : A
随着细 胞培 养技术 的发展 ,采用 体 外 培养 成 骨 细胞 评 价人工 骨 替 代材 料 的生 物 活 性 、 物 相 容性 生 及骨 诱 导 性 等 , 已成 为 重 要 的研 究 手 段 。成 骨 1 细胞 的体 外 培 养 可 以 排 除 体 内多 种 因 素 的相 互 影
(. 1石河子大学医学院新疆地方与民族高发病重点实验室 ; 2 石 河子 大学 医学 院组织胚 胎 学教 研室 , . 新疆 石 河子 ,30 2 8 20 )
【 摘要 】 的 : 目 目 针对 前体外培养成骨细胞方法各异 , 建立一种 简易 的原代培养成骨细胞 的方法 , 并研究其生物学特
20 0 8年 l 月 2




De 2 08 c. 0
第3 0卷

第6 期
Ju a f n k n Me iie o r l g e dcn n o No
V0 . 0 No. 13 6
论著 ・
小 鼠成 骨 细 胞 体 外 分 离 培 养 及 鉴 定
符毓 豪 王 菊2 周 宗瑶2

2 i, 洗 , 干 ; 甘 油 明胶 封 片 , 检 ; 所 染 mn 水 待 ⑤ 镜 ⑥
结 果 为红色 即 为 阳性 , 之为 阴性 。 反
骨带骨膜 , 经无菌 P S缓 冲液洗 涤 2 B 3次 , 在含 1% 5
14 3 钙 化 结节 染 色 ( 素红 法 ) 细 胞 接种 方 法 .. 茜 同上 , 培养 1d后 , 下 可 见 黑 色 不 透 明 区 域 , 时 0 镜 此 进行 染 色 , 7 % 乙醇 固定 1mn0 2 用 5 0 i, . %茜 素 红 染 色 3mn蒸馏 水 冲洗 , 油 明胶 封 片 。 0 i, 甘

成骨细胞的研究与应用

成骨细胞的研究与应用

成骨细胞的研究与应用成骨细胞是一种在骨头中起关键作用的细胞。

这些细胞具有许多独特的特点,例如它们能够合成骨基质和分泌骨形成生长因子。

研究人员一直在探究成骨细胞的机制和应用,以帮助改善骨质疏松症等疾病的治疗。

一、成骨细胞的生理功能成骨细胞是一种细胞,主要分布在骨组织中。

成骨细胞的主要作用是促进骨形成。

它们能够合成骨基质和骨纤维蛋白等物质,以及分泌骨形成生长因子和促进骨细胞增殖的化学物质。

此外,它们还参与骨质重塑以及破骨细胞和成骨细胞之间的平衡。

二、成骨细胞与骨质疏松症骨质疏松症是一种常见的骨代谢疾病,其特征是骨质量低下、骨密度降低、骨质组织的微结构异常、骨折等。

成骨细胞在骨质疏松症的治疗中具有重要作用。

研究发现,针对成骨细胞的药物可以帮助提高骨密度和抑制骨质疏松症的发展。

此外,研究还表明,成骨细胞的数量和功能的下降是骨质疏松症发生的一个重要原因。

三、成骨细胞与骨折愈合成骨细胞在骨折愈合中起关键作用。

在骨受到损伤后,成骨细胞会通过旁分泌的骨形成因子和生长因子等分泌物质来引导骨生长和修复。

研究人员还在探索利用成骨细胞在骨科手术、骨折愈合和骨移植等方面的应用。

四、成骨细胞在组织工程方面的应用成骨细胞在组织工程方面也具有广阔的应用前景。

组织工程是一种将生物学、医学和工程学方法相结合,利用体外培养细胞和人工材料等技术来重建人体组织的方法。

利用成骨细胞,研究人员可以在体外进行组织工程构建,制造出具有骨质结构和功能的三维复合结构,该技术可以应用于骨再生和骨移植等方面。

总之,成骨细胞在骨组织中具有非常重要的作用,其机制与功能的研究和应用可以帮助我们更好地理解骨生长和疾病的发生发展。

未来,我们相信,随着对成骨细胞的深入研究,我们会创造出更多的医学应用和发展前景。

体外培养成骨细胞的研究进展

体外培养成骨细胞的研究进展

体外培养成骨细胞的研究进展
徐杨俊;赵建宁
【期刊名称】《中国骨伤》
【年(卷),期】2010(023)007
【摘要】随着体外细胞培养技术的发展,人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质、骨膜及骨外组织中成功培养出了具有典型成骨细胞特性的细胞,研究表明培养出的成骨细胞具有良好的生物学特性,在不同环境下可以形成骨组织,联合支架的应用,构建组织工程骨,将其植入体内修复骨缺损.现就成骨细胞的来源、分化调控因子、复合移植及中医药方面的研究进展作一综述.
【总页数】4页(P562-565)
【作者】徐杨俊;赵建宁
【作者单位】南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院骨科,江苏,南
京,210002;南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院骨科,江苏,南京,210002【正文语种】中文
【相关文献】
1.补肾方剂对成骨细胞体外培养干预的研究进展 [J], 贾英民;武密山;李恩
2.成骨细胞体外培养模型的研究进展 [J], 孙中洋;李东韬;赵学武;张舒
3.电离辐射对体外培养成骨细胞影响的研究进展 [J], 李玉梅;赵铱民
4.淫羊藿对体外培养成骨细胞影响的研究进展 [J], 孙海涛;丁仁
5.成骨细胞体外培养研究进展 [J], 徐展望;许波;李军
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骨膜细胞成骨能力及其复合移植研究进展

骨膜细胞成骨能力及其复合移植研究进展

骨膜细胞成骨能力及其复合移植研究进展作者:伍晓红闫福华来源:《海峡科学》2007年第08期【摘要】骨膜含有成骨和软骨的骨系祖细胞群,能在适当的条件下形成骨和软骨。

近年实验和临床研究证明,体外培养的骨膜细胞及体内移植的骨膜细胞都保持着成骨能力,移植到骨缺损处可促进骨形成。

本文就目前国内外对骨膜细胞成骨能力、骨膜细胞和载体的复合研究及其在口腔颌面骨修复中的应用研究作一综述。

【关键词】骨膜细胞成骨能力复合移植骨缺损骨修复由于创伤、炎症和肿瘤等各种原因造成的骨组织缺损后的修复重建,是当今医学研究的难点之一。

长期以来,自体骨移植是修复骨缺损的常用方法,然而自体骨移植因存在着骨数量有限和供区受损等问题,在临床上的应用受到很大的限制[1]。

近年来,人们把目光投向了骨组织工程这个新兴领域,利用生物学和工程学的原理和方法,将成骨细胞和载体材料复合移植入体内,达到修复骨缺损的目的。

骨组织工程的首要环节是充足的成骨细胞来源。

骨膜源性细胞(periosteum-derived cells,PDC)具有很强的增殖能力和分化成骨潜能[2],而且,取材方便,对患者造成的创伤小,成为骨组织工程理想种子细胞来源之一。

目前,将骨膜细胞体外培养扩增,结合适当的生物材料,移植入体内促进骨组织修复,已成为骨组织工程研究领域的一大热点。

本文就目前国内外对骨膜细胞成骨能力、骨膜细胞和载体的复合研究及其在口腔颌面骨修复中的应用研究作一综述。

1 骨膜细胞成骨依据骨膜是一种非均质膜结构,包括外部的纤维层和内部的生发层。

纤维层含有成纤维细胞,生发层含有骨祖细胞、成骨细胞和破骨细胞。

体外实验发现,骨膜生发层细胞具有较强的成骨分化能力,纤维层细胞成骨能力较差,但强于腱成纤维细胞[3]。

体内实验表明,骨和软骨的形成源于生发层细胞的增殖和分化[4],但近年有学者将兔的胫骨骨膜移入到肌肉中,发现骨膜纤维层形成软骨细胞和骨组织,生发层却出现坏死、消失,这与上述报道不一致[5]。

RAW264.7细胞在体外分化成破骨细胞的研究

RAW264.7细胞在体外分化成破骨细胞的研究

RAW264.7细胞在体外分化成破骨细胞的研究戴闽;程明;张斌;程细高【摘要】目的:观察小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的一般生物学特征及在重组细胞核因子kB受体活化因子配基(RANKL)诱导下形成成熟的有骨吸收能力的破骨细胞的可行性.方法:培养RAW264.7后,RANKL诱导RAW264.7,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察阳性多核细胞,电镜下扫描检测电镜骨吸收陷窝.结果:RANKL 诱导RAW264.7第3天开始出现少数多核巨细胞,随时间的延长细胞数目逐渐增多,第7天多核巨细胞数达峰值,多核巨细胞TRAP染色阳性,电镜下可见骨片上的吸收陷窝呈圆形或椭圆形,边界轮廓清晰,陷窝底部纤维腐蚀吸收的纹路清晰可见,提示多核巨细胞具有骨吸收功能.结论:RAW264.7是一种较好的破骨前体细胞模型.RANKL诱导RAW264.7形成破骨细胞方法简便易行、可重复性好.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2010(038)007【总页数】3页(P596-598)【关键词】单核巨噬细胞系统;细胞分化;破骨细胞;核因子κB受体活化因子;酸性磷酸酶;巨细胞;小鼠【作者】戴闽;程明;张斌;程细高【作者单位】330006,南昌大学第一附属医院骨二科;330006,南昌大学第一附属医院骨二科;330006,南昌大学第一附属医院骨二科;330006,南昌大学第一附属医院骨二科【正文语种】中文在骨发育和重建过程中,破骨细胞是唯一能导致骨的有机和无机部分都吸收的细胞。

破骨细胞介导的骨吸收与成骨细胞介导的骨形成之间的平衡是维持正常骨的生理学基础。

破骨细胞数量和活性的改变可导致多种代谢性骨病发生,一直是研究的热点和重点。

但破骨细胞的分离和纯化技术一直困扰着人们。

一种永生化的、能方便使用的破骨细胞前体细胞系对骨科相关疾病的研究意义重大。

本实验旨在研究RAW264.7细胞在重组细胞核因子κB受体活化因子配基(ligand of receptor activator of NF κB,RANKL)的诱导下生成有骨吸收能力的破骨细胞的可行性。

人骨髓基质干细胞体外诱导为成骨细胞的实验研究

人骨髓基质干细胞体外诱导为成骨细胞的实验研究

as y Re u t : ir s p , P sa nn , n Ko s ti i g a d ALP a s y al h w h t t e c l ut rd wi n i o a c l r s a . s l M c o c y AL ti i g Vo —  ̄a sa nn n s o sa l s o t a h el c l e t c dt n l ut e s u ho i u me im a e t ec a a t r t sa d t ea t i ft eo to l t . n l s n: B S sc n b d c d t i e e t t t t o l s d u h v h h r ce i i n h c i t o h e ba s Co cu i h M C a ei u e d f r n i ei o o e b ̄t sc vy s s o n o f a n s
i n iin l ut r d u i i o n c d t a Iu e me i m n vt . o o c r Ke r s B n ro s r ma c l; t o ls ; k l ep o p a e e y wo d : o ema r w to l el Ose ba t Al ai h h t s n s
rt d b rd e t c n rf g t n o e c l, u t r d wih o dn r u t r d im n n u e y c n iin lc l r d u . e a e y g a in e ti a i n P r l c lu e t r i a y c l e me u a d i d c b o dt a ut e me im Th u o o u d o u c l u t r t r ia ya dc n i o a u t r d im r x mi e y mirs o y ALP san n Vo — s asan n n P el c l e wi o d n r n dt n l l eme u we ee a n b co c p , s ud h o i c u d t i ig, n Ko s t i i ga dAL

植块法成骨细胞体外培养方法改良论文

植块法成骨细胞体外培养方法改良论文

植块法成骨细胞体外培养方法的改良【摘要】目的:对成骨细胞体外培养改良植块法的可行性进行观察。

方法:应用改进的植块接种培养技术进行成骨细胞的分离培养,通过细胞形态学、碱性磷酸酶(alp)细胞化学染色、骨钙素(bgp)免疫细胞化学染色、钙化结节的形成四方面对成骨细胞进行鉴定。

结果:(1)原代及传代细胞均贴壁生长,呈三角形、多角形、梭形等不规则形态,条件培养基中形成钙化结节,碱性磷酸酶细胞化学染色及骨钙素免疫细胞化学染色呈阳性。

结论:改进的植块接种培养法可获得成骨细胞,缩短成骨细胞的培养周期。

【关键词】成骨细胞 ;体外培养 ;方法 ;改良【中图分类号】r329 【文献标识码】a【文章编号】1044-5511(2011)11-0453-02近20年来随着细胞生物学及生物材料学技术的发展而出现了一门新的边缘学科——骨组织工程学。

骨组织工程学研究的方向主要在:种子细胞及载体材料两方面。

种子细胞主要来源是骨外膜成骨细胞[1]、松质骨组织中的成骨细胞[2]、软骨细胞[3]及骨髓基质细胞[4]。

传统的成骨细胞体外培养方法需多次传代,具有耗时、易污染的缺点,我们对体外培养方法进行了改良,现总结如下:一、材料与方法1实验动物:健康新西兰大白兔(赣南医学院实验动物中心提供,体重1.5-2kg)2、主要试剂及仪器:胎牛血清(华美生物工程公司)dmem(gibco)胰蛋白酶(gibco)edta(gibco)青霉素g钠盐(华美生物工程公司)链霉素(华美生物工程公司)骨钙素抗体(解放军总医院放免研究所)sabc试剂盒(博士德公司)倒置显微镜(olympus)低温冰箱(indesit)二氧化碳细胞培养箱(forma scientific)3、兔成骨细胞的植块接种原代培养及传代:组织块的来源是新西兰大白兔的肋骨,无菌操作下采取骨组织块,在无菌室内进行植块前的处理:去除肋骨四周的软组织(包括骨膜及软骨)及将肋骨剪成1mm×1mm×1mm大小的骨组织块,用中性d-hanks液反复冲洗组织块,直至液体清亮为止。

大鼠骨髓基质干细胞体外培养及定向诱导分化为成骨细胞的实验研究

大鼠骨髓基质干细胞体外培养及定向诱导分化为成骨细胞的实验研究
维普资讯
广
西






J OURNAL OF GUANGXIM EDI CAL UNI VERS TY I
Hale Waihona Puke 2 0 r 0 7 Ap ; 4( ) 2 2

・29 5 ・
大 鼠骨髓 基质 干细胞 体 外 培 养及 定 向诱 导分 化 为成 骨细 胞 的 实验研 究
1 2 5 成 骨 细 胞 鉴 定 : 碱 性 磷 酸 酶 ( L ) 色 : 代 培 养 .. ① A P染 传
细 胞 长 满 后 ,. 5 0 2 %胰 酶 消 化 制 成 浓 度 为 1 0/ 的细 胞 ×1 ml
甘油 磷 酸 钠 、 碱性 磷 酸 酶 检 测 试 剂 盒 等 。 11 3 培 养 液 配 置 : 基 础 培 养 液 : .. ① DME 培 养 液 ( l M 含 5
由广 西 医科 大 学 实 验 动 物 中心 提 供 。 11 2 主要 试剂 : .. DME 培 养 液 ( I C 、 牛 血 清 ( B M G B O)胎 GI—
C 、ec l分 离 液 ( HAR A I 、 塞 米 松 、 生 素 C、一 O)p ro1 P M C A) 地 维 B
目前 种 子 细 胞 的来 源 有 骨 、 膜 、 髓 及 骨 外 组 织 口 , 多 研 骨 骨 ]许 究发 现 骨 髓 来 源 的 种 子 细 胞 最 具 优 势 。 骨 髓 基 质 干 细 胞 ( o emarw srma cl , MS s 是 来 源 于 骨 髓 基 质 的 一 B n ro t o l e sB c ) l 种 间充 质 细 胞 , 有 多 向分 化 潜 能 , 一 定 的 诱 导 下 可 向 成 具 在 骨细 胞 分 化 。本 实 验 通 过 研 究 大 鼠 骨 髓 基 质 干 细 胞 体 外 培 养 的生 长 特 点 和诱 导 条 件 下 的成 骨 能 力 , 下 一 步 构 建 组 织 为

骨髓来源成骨细胞体外成骨表达的研究

骨髓来源成骨细胞体外成骨表达的研究
维普资讯
52 9
河北 医药 20 年 5月 第 3 08 0卷 第 5 期
H bi ei l ora, a 08V l 0 N . ee M d a Ju l M y20 , o 3 , o5 c n
的泪膜亦受影响 , 从而产生基于免疫的炎症反应 , 并损 害泪腺及 待于进一步实验研究。本研究局部雄激素治疗选择 的时机 为干 其神经的正常功能。如果雄 激素水平低于支持正常 泪液 分泌和 眼造模后 1 个月 , 治疗 时机 的选择对治 疗效 果是否存在 差异 和
及 眼表 面 的 炎 症 可 导 致 泪 腺 及 眼 表 上 皮 细 胞 凋 亡 、 液 中 水 样 步 研 究 。 泪 液 及 枯 液 的 分 泌 减 少 。 雄 激 素 水平 的 异常 可能 是 导 致 此 炎 症 发 生 的重 要 因 素 。Fra bibliotek 参 考 文 献
1 K e zr KL, n rne Da aMR, i n MD, ta .E e t f d o e e ce c nte Ul ma e1 f c a r g n d f in yo h on i
细 胞 的 萎 缩 和 淋 巴 细 胞 的浸 润 进 一 步 加 重 炎 症 过 程 , 成 恶 性 形
5 Sd ia t l n DA. e d ra d s xseo d it e e so r y y d o .O h a — v G n e tr i nl n e n d y e e sn rme p tl n e u h
任 立 中 高宏 阳 赵 峰 王伟
探 索在体 外诱 导兔骨髓基质干 细胞 (oem l w s m cU, M C ) bn a o t esB S s 向成骨细胞分化及 T e

骨组织工程中成骨、破骨细胞三维空间培养的研究进展

骨组织工程中成骨、破骨细胞三维空间培养的研究进展
进展 。
状结构中的结合水可 以流动 , 使凝胶中的细胞能和 外界 进行 物 质 交 换 ¨ J , 由 于凝 胶 网 络 的 承 载 作 用 ,
细胞 在凝 胶 中的形 态为 圆形 , 有利 于 细胞 的联 系 、 信
关键 词
骨组 织工程 ; 三维空间 ; 细胞 分布 ; 中医药
R 2 7 4 . 9; R 6 8 3
钠复合载体中生长分布 良好 , 形成球状细胞团 , 这样
独特 的 三维结 构 更 有 利 于细 胞 生 长 。 因此 , 在 体外 三维 培养 细 胞 时越 来 越 多 的 人 选 择 采 用 复 合 型 载
体。 1 . 2 孔 隙结构 对 细胞 分 布 的 影 响 评价 支架 材 料
1 . 1 E CM 的种 类 目前 在 骨 组 织 工 程 研 究 中选 用的E C M 主要 有 : 天 然有 机 高 分 子材 料 、 天然 无 机 材料 、 人工 合成 有机 材料 、 人工 合成 无机 材料 以及 复
合类材 料 。
矿 化 沉 积 。朱 建 华 等 通 过 研 究 P A N / C S / B C P / P L G A复 合 支 架 发 现 : 大 孔 小孔 相 连 通 的孔 隙 结 构
1 E CM 对 细胞 分布 的影 响
的重要 参 数 之 一 是 支 架 材 料 的 孔 隙 结 构 。研 究 表明, 充 足的血 液供 应是 形成 良好 骨组 织 的基础 , 孔
隙率 与孔径 大 小 对 其有 决 定 性 的影 响 。L i u e t a l _ 5 研 究发 现 , 随着 培养 时 间延长 和孔 隙率 的增 加 , 各组 成 骨 细胞 在 支 架 材 料 上 的空 间分 布 均 呈 增 长 的 趋 势 。Y e o e t a l 提 出组织 工程 支架 的孔径 尺 寸应 在 2 0 0— 4 0 0 m 范 围内有利 于新 生骨 组织 在 孔 隙 内部

现代医学实验学-成骨细胞的培养和骨折模型的制作

现代医学实验学-成骨细胞的培养和骨折模型的制作
3.培养基问题:低糖的DMEM培养基
4.培养瓶 培养瓶在接种前,使用1%多聚赖氨酸快速包被(具体方 法:每个50ml培养瓶加3-4ml1%多聚赖氨酸,尽量是底壁均铺满液体 ,拧上盖子,放置30min,倒掉1%多聚赖氨酸液体,用去离子水或PBS 液冲洗两遍), 包被的培养瓶,细胞很容易贴壁 。
大鼠成骨细胞
2铝
目前认为一些疾病如骨质疏松、骨软化等 与铝中毒有关。铝蓄积于骨骼,对骨骼和 神经系统等产生危害。文献报道低浓度铝 可刺激体外培养的成骨细胞的增殖和分化 ,铝对成骨细胞的作用不受培养液中生长 因子变化的影响。高剂量铝可抑制成骨细 胞的生长发育并对其产生一定的毒性作用
3氟
氟 一方面 作为骨基质构成物参与骨形成过程 ,另一方面,过量的氟摄入可导致齿、骨等 组织及器官的损害。体外研究则表明,氟通 过对成骨细胞的有丝分裂的作用促使成骨细 胞的生长速度加快、数量增多、功能增强。 氟对成骨细胞的作用与铝有所不同,需依赖 于培养液中部分生长因子,除去这些生长因 子,可消除氟对成骨细胞的作用.
传代培养步骤
1.弃除旧的培养液(可以吸,可以倒,倒的时候小心) 2.用PBS冲洗一遍(加PBS清洗或换液时,不要将细胞冲刷下来) 3.用0.25%的胰酶消化液消化30-45s,在显微镜下观察,细部变圆, 间距增大时,可用手拍打瓶侧壁与底壁,会发现细胞很快悬浮。 4.加入含15%的牛血清培养液终止消化 5.用吸管反复细心吹打瓶底,置离心管中后,可以用PBS或DHANKS再吹打,可以反复几次,目的是将细胞尽可能的洗刷干净
样细胞不会引起明显的改变 ,而单次高剂量辐射( 400 cGy)却使克隆成骨细胞系MC3T3-E1 的 ALP 活性增加. 2 微重力 目前认为失重条件下骨形成受到抑制是造成骨质 脱钙的主要原因,特别是成骨细胞数目的减少和活性

猪骨骼肌卫星细胞体外分离培养研究进展

猪骨骼肌卫星细胞体外分离培养研究进展

中国畜牧兽医 2022,49(8):2931-2942C h i n aA n i ma lH u sb a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i n e 猪骨骼肌卫星细胞体外分离培养研究进展喻宗岗1,马海明1,2(1.湖南农业大学动物科学技术学院,长沙410128;2.岭南现代农业科学与技术广东省实验室,广州510640)摘 要:猪骨骼肌是动物机体重要的运动组织及人类主要的肉食来源,也是研究肌肉生长发育和疾病的良好模型㊂猪出生后,骨骼肌的生长发育㊁损伤修复都需要肌卫星细胞的参与,体外分离培养猪骨骼肌卫星细胞是深入研究骨骼肌生长发育及疾病发生机理的基础,是在细胞水平进行分子功能验证的前提㊂随着肌肉发育和病理分子机制研究的不断深入,猪骨骼肌卫星细胞的体外分离培养技术也迅速发展起来㊂背最长肌㊁后腿肌和半腱肌常用于分离骨骼肌卫星细胞,1日龄猪背最长肌的分离效果最好㊂常用于分离骨骼肌卫星细胞的酶包括链酶蛋白酶㊁胶原酶㊁胰蛋白酶㊁胶原蛋白酶等,各酶及酶联合消化的时间不同,最优的过滤方式是200目+400目联合过滤,3次离心法可获得纯度较高的细胞㊂常使用的培养基为D M E M /F 12+10%胎牛血清(F B S )+1%青-链霉素(P /S )㊂骨骼肌肌卫星细胞常见标记物有配对盒基因3(P A X 3)㊁P A X 7㊁生肌决定因子5(M y f 5)㊁M y f 4㊁肌分化因子(M y o D )㊁肌细胞生成素(M y o G )等㊂作者通过对猪骨骼肌肌卫星细胞的分离㊁培养及鉴定等方面进行综述,梳理出各步骤中最佳参数,为建立规范猪骨骼肌卫星细胞分离程序提供参考,以期为肌肉发育和疾病研究提供理论及技术支持㊂关键词:猪;骨骼肌卫星细胞;分离;体外培养;酶消化法中图分类号:S 828文献标识码:AD o i :10.16431/j .c n k i .1671-7236.2022.08.009 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2022-03-27基金项目:岭南现代农业实验室科研项目(N T 2021005);宁乡花猪基础研究(5026401-0315069)联系方式:喻宗岗,E -m a i l :s t u d y 236@163.c o m ㊂通信作者马海明,E -m a i l :m a h a i m i n g2000@163.c o m R e s e a r c hP r o gr e s s o n I s o l a t i o n a n dC u l t u r e o f P o r c i n e S k e l e t a lM u s c l e S a t el l i t e C e l l s i n v i t r o Y UZ o n g g a n g 1,MA H a i m i n g1,2(1.C o l l e g e o f A n i m a lS c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,H u n a nA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,C h a n g s h a 410128,C h i n a ;2.G u a n g d o n g L a b o r a t o r y o f L i n g n a nM o d e r n A g r i c u l t u r a l S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,G u a n gz h o u 510640,C h i n a )A b s t r a c t :P o r c i n e s k e l e t a lm u s c l e i s a n i m p o r t a n tm o v e m e n t o r g a n i z a t i o n o f a n i m a l b o d y,t h em a i n m e a ts o u r c eo fh u m a nb e i n gs ,a n da g o o d m o d e l f o rm u s c l e g r o w t ha n dd i s e a s er e s e a r c h .A f t e r b i r t h ,p i g n e e d st h e p a r t i c i p a t i o n o f m u s c l es a t e l l i t ec e l l si nt h e g r o w t ha n d d e v e l o pm e n to f s k e l e t a lm u s c l e ,a n dt h ed a m a g er e pa i r .I s o l a t i o na n dc u l t u r eo f p o r c i n es k e l e t a lm u s c l es a t e l l i t e c e l l s i n v i t r o i s t h eb a s i s f o r i n -d e p t h s t u d y o n t h e g r o w t h a n d d e v e l o pm e n t o f s k e l e t a lm u s c l e a n d t h e p a t h o ge n e s i so fd i s e a s e s ,a n dt h e p r e m i s ef o r m o l e c u l a r f u n c t i o nv e r i f i c a t i o na t t h ec e l l u l a r l e v e l .W i t ht h ed e e p e n i ng o fth er e s e a r c h o n m u s c l ed e v e l o p m e n ta n d p a t h o l o gi c a l m o l e c u l a r m e c h a n i s m ,t h e t e c h n o l o g y of i s o l a t i o na n dc u l t u r eo f s a t e l l i t e c e l l so f p o r c i n e s k e l e t a lm u s c l e i n v i t r o h a sd e v e l o p e dr a p i d l y .T h el o ng i s s i m u sd o r s im u s c l e ,hi n dl e g m u s c l ea n ds e m i t e n d i n o s u s m u s c l e a r ec o m m o n l y u s e dt oi s o l a t es k e l e t a lm u s c l es a t e l l i t ec e l l s ,a n dt h el o n gi s s i m u sd o r s i m u s c l eo f1-d a y -o l d p i g l e t sh a v et h eb e s ti s o l a t i o ne f f e c t .E n z y m e sc o m m o n l y us e dt oi s o l a t e s k e l e t a lm u s c l e s a t e l l i t e c e l l s i n c l u d e p r o n a s e ,c o l l a g e n a s e ,t r y p s i n ,c o l l a g e n a s e ,e t c .,a n d t h e t i m e o f d i g e s t i o no fe a c he n z ym ea n di t sc o m b i n a t i o ni sd i f f e r e n t .T h eb e s t f i l t r a t i o n m e t h o di s200m e s h +400m e s hc o m b i n e df i l t r a t i o n ,a n d h i g h p u r i t y c e l l sc a n b eo b t a i n e d b y th r e et i m e s c e n t r i f u ga t i o n .T h eu s u a l m e d i u m i s D M E M /F 12+10%f e t a lb o v i n e s e r u m (F B S )+1%中国畜牧兽医49卷p e n i c i l l i n-s t r e p t o m y c i n(P/S).C o m m o n m a r k e r so f s k e l e t a lm u s c l es a t e l l i t ec e l l s i n c l u d e p a i r i n g b o x g e n e3(P A X3),P A X7,M y o-g e n i cd e t e r m i n a n t5(M y f5),M y f4,M y o-d i f f e r e n t i a t i o nf a c t o r (M y o D),m y o g e n i n(M y o G)a n ds oo n.I nt h i s p a p e r,t h e i s o l a t i o n,c u l t u r ea n d i d e n t i f i c a t i o no f m u s c l e s a t e l l i t e c e l l so f p o r c i n es k e l e t a lm u s c l ew e r er e v i e w e d,a n dt h eb e s t p a r a m e t e r s i ne a c h s t e p w e r es o r t e do u t,w h i c h p r o v i d e dr e f e r e n c e sf o re s t a b l i s h i n g as t a n d a r d i z e d p r o c e d u r ef o r i s o l a t i n gp o r c i n es k e l e t a l m u s c l es a t e l l i t ec e l l s,i n o r d e rt o p r o v i d et h e o r e t i c a la n dt e c h n i c a l s u p p o r t f o rm u s c l e d e v e l o p m e n t a n dd i s e a s e r e s e a r c h.K e y w o r d s:p i g s;m u s c l e s a t e l l i t e c e l l s;i s o l a t i o n;i n v i t r o c u l t u r e;e n z y m e d i g e s t i o nm e t h o d猪的解剖结构和生理特征与人相似,因此可以作为人类疾病研究的模型[1]㊂为比较病理模型的优劣,研究发现,猪假性肥大肌营养不良症(d u c h e n n e m u s c u l a r d y s t r o p h y,D M D)模型的病理状态比鼠模型中更接近于人[2-3]㊂因此,猪肌肉疾病模型比小鼠模型更有优势㊂骨骼肌卫星细胞在出生后机体骨骼肌发育㊁维持和再生等生命活动中都发挥着重要的作用[4]㊂骨骼肌卫星细胞不仅是肌纤维细胞核的来源,而且能促进纤维的肥大[5-6]㊂被激活的骨骼肌卫星细胞可以诱导肌细胞增殖㊁分化,并促使肌细胞与肌纤维融合[7]㊂骨骼肌卫星细胞不仅有增殖分化的潜能,而且可被招募参与骨骼肌运动[8],在肌纤维损伤修复和再生过程中发挥重要作用[9-10]㊂因此,骨骼肌卫星细胞也可以作为肌肉生长发育的良好体外研究模型[11]㊂骨骼肌卫星细胞最早由M a u r o[12]于1961年在青蛙腿肌上分离获得,它位于肌纤维质膜和基底膜之间[13],主要分布于慢肌纤维中[14]㊂之后陆续建立了细胞自然贴壁培养法㊁荧光激活细胞分选法和磁珠激活分选法等方法㊂自然贴壁法耗时㊁低效,荧光激活分选法依赖昂贵的仪器,磁珠法获得的细胞活力低[15]㊂通过添加酶可以适当缩短分离时间,并获得高纯度㊁高活力的细胞,但是目前酶消化法仍存在酶使用种类㊁剂量㊁消化时间不统一,离心过滤时离心力和滤径大小不一㊁离心过滤次数不一致等问题㊂作者通过对分离骨骼肌卫星细胞的取材㊁消化㊁过滤㊁离心㊁体外培养㊁鉴定等基本步骤进行综述,期望为体外获得高纯度㊁高活力的猪骨骼肌卫星细胞,建立规范有效的分离方法提供参考㊂1骨骼肌卫星细胞分离1.1取材1.1.1取材部位骨骼肌卫星细胞分离有直接分离法和肌纤维分离法2种㊂D o u m i t等[16]于1992年利用直接分离法首次从4~8周龄猪的半膜肌中分离出肌源卫星细胞;B e k o f f等[17]于1997年利用肌纤维分离法在小鼠骨骼肌中分离获得肌源卫星细胞㊂W i l s c h u t等[18]于2010年建立猪单纤维分离法,自此陆续从岗上肌[19]㊁趾长伸肌[20]㊁三角肌群[21]㊁背最长肌[22-24]㊁半腱肌㊁半膜肌[24-25]㊁股二头肌[26-27]㊁腓肠肌[28]㊁三头肌[29]㊁后腿肌㊁菱形肌[11,30]㊁第三腓骨肌[28]㊁胫骨前肌[4]等肌肉组织中分离出了猪骨骼肌卫星细胞(图1A)㊂因背最长肌相较四肢的小肌群更大,取材最容易,常被用于分离骨骼肌卫星细胞㊂1.1.2取材时期分离猪骨骼肌卫星细胞的材料可取自胎儿期至幼龄期,如60胚龄[31-32]㊁1日龄[4,33]㊁3日龄[19,27]㊁4日龄[26,28]㊁5日龄[24]㊁7日龄[34]㊁4~6周龄[23]㊁1月龄[19]㊁2月龄[35]㊁5月龄[36]和25周龄[34](图1B)㊂其中最常用的是出生后1日龄猪,并且1~7日龄猪占到85%以上,最大日龄为25周龄㊂猪日龄越大肌肉的体积越大,取材相对越容易,然而,随着时间的延长肌肉中骨骼肌卫星细胞的数量越少,其增殖分化潜能也会越低,因此要获得足够数量且分化潜能高的骨骼肌卫星细胞应取材于1日龄猪背最长肌㊂另外,即使取自同时期的同一部位,不同品种骨骼肌卫星细胞的增殖能力也存在差别[37],如中国大蒲莲猪骨骼肌卫星细胞的增殖能力高于长白猪[7]㊂1.2消化根据分离猪骨骼肌卫星细胞使用酶的种类,将分离方法分为单酶消化法和多酶消化法,单酶有链酶蛋白酶[38-39]㊁胶原酶D[34]㊁蛋白酶[24,27,40-41]㊁蛋白酶ⅩⅣ[31,42]㊁胰蛋白酶[25,43-44]㊁Ⅰ型胶原蛋白酶[45-52]㊁Ⅱ型胶原蛋白酶[7,29,53-63](图2)㊂Ⅱ型胶原蛋白酶是最常用的酶,不同的酶有最佳的使用方法㊂Ⅱ型胶原蛋白酶能有效消化肌肉组织中的结缔组织,用0.2%Ⅱ型胶原蛋白酶消化2h最佳(图3A㊁3D)㊂Ⅰ型胶原蛋白酶最佳使用方法是0.2%消化1~2h(图3B㊁3E)㊂蛋白酶使用量有4种规格(图3C),最佳消化时间是1h(图3F)㊂23928期喻宗岗等:猪骨骼肌卫星细胞体外分离培养研究进展联合使用2种酶的方法有胶原酶+Ⅹ型胰蛋白酶[19]㊁Ⅰ型胶原酶+胰蛋白酶[4,23,64-65]㊁Ⅱ型胶原酶+胰蛋白酶[66]㊁蛋白酶+Ⅺ型胶原蛋白酶[67-68](图2),其中,0.1%~0.2%Ⅰ型胶原酶+0.25%胰蛋白酶应用最多,也有联合使用胰蛋白酶+胶原酶+D N A 酶3种酶分离骨骼肌卫星细胞的[11,24]㊂罗桂芬等[21]比较了链霉蛋白酶㊁胰酶及胶原酶消化法的分离效果,发现链酶蛋白酶消化法与其他酶消化法相比,可获得数量最多的骨骼肌卫星细胞,但细胞活力没有差异㊂因为不同的酶作用于不同的底物,胶原蛋白酶主要作用于肌束,链酶蛋白酶和胰蛋白酶作用于基底膜和肌膜,促使骨骼肌卫星细胞的释放[69]㊂联合使用多种酶消化肌肉组织中的异质物,虽然能有效去除杂质,但是延长了消化时间㊂1日龄猪肌肉组织中含有最多的是结缔组织,因此使用Ⅱ型胶原蛋白酶是最有效的分离方法㊂p60d ,60胚龄;d ,出生后天数;w ,出生后周龄;m o n ,出生后月龄p 60d ,60e m b r y o a g e ;d ,D a y s a f t e r b i r t h ;w ,W e e k s a f t e r b i r t h ;m o n ,M o n t h s a f t e r b i r t h 图1 肌肉组织取样部位(A )和时期(B )及其使用百分率F i g .1 S a m p l i n g s i t e (A )a n d p e r i o d (B )o fm u s c l e t i s s u e s a n d t h e i r p e r c e n t a g e o f u se 图2 消化酶及其使用百分率F i g .2 D i g e s t i v e e n z y m e s a n d t h e i r p e r c e n t a ge of u s e 1.3 过滤和离心骨骼肌中包含血管㊁神经等结缔组织(图4),分离肌卫星细胞时需要过滤和离心除去结缔组织以获得高纯度的细胞㊂分离猪骨骼肌卫星细胞有不过滤㊁过滤1次和过滤多次3种方式(图5A )㊂1次过滤有20μm [19,26]㊁40μm [35,41,68]㊁70μm [4]㊁100μm [27,70]㊁100目[70]和300m m [46]等多种滤径参数(图5B )㊂2次过滤有100μm+40μm [34,67,71]㊁100μm+70μm [11,30,57]㊁200目+400目[55-56,59,66]㊁200m m +50m m [53,60,62]㊁200μm +70μm [45]㊁70μm+40μm [31,42]㊁76μm+37μm [72]㊁500μm+53μm [38]7种(图5C ),其中200目+400目在2次过滤中应用最广泛㊂3次过滤有100μm+70μm+40μm [29,48,58,61,64]和100目+200目+400目[73]2种;其中100μm+70μm+40μm 是3次过滤的最佳方式(图5C )㊂1次过滤虽然省时,但可能因过滤不足得到的细胞不纯;3次过滤不仅延长了时间,还可能因过度过滤损伤细胞而降低细胞活力㊂因此,最优的过滤方式是200目+400目2次过滤法㊂普通离心和密度梯度离心是骨骼肌卫星细胞常见的2种分离方式㊂普通离心有1次离心和多次离心2种,多次离心有多次单一离心力和多次不同离心力2种㊂300ˑg 离心5mi n (2次)[35]比1000r /m i n 离心10m i n 然后1000r /m i n 离心5m i n [47](图5D )时间短,相同分离效果下更为简便㊂多次不同离心力中(图5E ),2000r /m i n 离心5m i n 后1000r /m i n 离心10m i n [74]比300ˑg 离心6m i n 后800ˑg 再离心10m i n [39]用时少,故而更简捷㊂在用时上,3次离心中,1500ˑg 离心10m i n ㊁800ˑg 离心10m i n㊁800ˑg 离心5m i n 比100ˑg 离心5m i n ㊁1000ˑg离心5m i n (2次)[34]用时长,比1200ˑg 离心15m i n ㊁300ˑg 离心5m i n ㊁1200g 离心15m i n [27]用时短,但是先高离心力能有效去除大块碎屑,再低离心力去除细微杂质,还不至损伤细胞,造成细胞活3392中 国 畜 牧 兽 医49卷力下降,是最好的3次离心法㊂P e r c o l l 密度梯度离心有3种70%㊁50%㊁40%[26,43],70%㊁50%㊁40%㊁25%[26,44]和60%㊁20%[11,30](图5F ),其中60%㊁20%密度梯度离心法因为成分较其他2种更简单,因此最简便㊂1次和2次离心虽能去除大部分被消化的结缔组织,但是仍有残留,所获的细胞不纯,因此,要有效去除杂质,3次离心法是最佳选择㊂A ㊁D ,分别为Ⅱ型胶原蛋白酶的使用浓度和消化时间使用百分率;B ㊁E ,分别为Ⅰ型胶原蛋白酶的使用浓度和消化时间使用百分率;C ㊁F ,分别为蛋白酶的使用浓度和消化时间使用百分率Aa n dD ,T h ec o n c e n t r a t i o no ft y p e Ⅱc o l l a g e n a s ea n dt h e p e r c e n t a g eo fd i g e s t i o nt i m er e s p e c t i v e l y ;Ba n d E ,T h eu s a g e p e r c e n t a g e o f c o n c e n t r a t i o na n dd i g e s t i o n t i m eo f t y p e Ⅰc o l l a g e n a s e ,r e s p e c t i v e l y ;Ca n dF ,T h eu s a g e p e r c e n t a g eo f p r o t e a s e c o n c e n t r a t i o na n dd i g e s t i o n t i m e ,r e s p e c t i v e l y 图3 3种常用单酶使用条件F i g .3 A p p l i c a t i o n c o n d i t i o n s o f t h r e e c o m m o n s i n g l e e n z ym es 图4 骨骼肌结构模式图[33]F i g .4 S k e l e t a lm u s c l e s t r u c t u r em o d e l d i a gr a m [33]43928期喻宗岗等:猪骨骼肌卫星细胞体外分离培养研究进展A ,过滤次数使用百分率;B ,1次过滤使用百分率;C ,多次过滤使用百分率;D ,1次离心使用百分率;E ,多次离心使用百分率;F ,密度梯度离心使用百分率A ,T h e p e r c e n t a g e o f f i l t e r i n g t i m e s ;B ,T h e p e r c e n t a g e o f s i n g l e f i l t r a t i o n ;C ,T h e u s a g e p e r c e n t a g e o fm u l t i pl e f i l t r a t i o n ;D ,T h e p e r c e n t a g eo fs i n g l ec e n t r i f u g a t i o n ;E ,T h e p e r c e n t a g eo f m u l t i p l ec e n t r i f u g a lu s e ;F ,T h e p e r c e n t a g eo fd e n s i t y g r a d i e n t c e n t r i f u ga t i o n 图5 过滤和离心程序及其使用百分率F i g .5 F i l t r a t i o na n d c e n t r i f u g a t i o n p r o c e d u r e s a n d t h e i r p e r c e n t a ge of u s e 2 骨骼肌卫星细胞培养根据分离目标分为成肌细胞㊁骨骼肌卫星细胞分离法和单纤维分离法㊂常用成肌细胞㊁骨骼肌卫星细胞分离法来获得原代细胞㊂有研究比较了单核成肌细胞分离法和单纤维分离法获得骨骼肌卫星细胞的优劣,结果发现单核成肌细胞分离法无法得到同质性高的成肌细胞,且其中的肌卫星细胞数量少,再生能力差;单纤维分离法得到的卫星细胞细胞增殖能力更强,且可以了解骨骼肌卫星细胞初始位置和迁移转化等过程[20]㊂也有通过共培养骨骼肌卫星细胞和基质血管细胞来获得骨骼肌卫星细胞的方法[75]㊂离心后的细胞中含有成肌细胞和骨骼肌卫星细胞,为获得单一的骨骼肌卫星细胞还需进一步分离纯化㊂成肌纤维细胞贴壁早于肌卫星细胞,利用差速贴壁的特性,即可以获得成肌细胞和肌卫星细胞[75-76]㊂体外培养猪肌卫星细胞的培养液包含基础培养基㊁血清㊁抗生素和其他添加物等多种物质㊂对46篇文献的培养液分析归纳获得如下结果㊂猪肌卫星细胞的培养基有6种,使用频次最高的是D M E M /F 12(图6A )㊂血清因其中含有细胞生长必需的成分常被添加在培养基中,常见的添加方式有添加1种血清和添加2种血清㊂添加10%胎牛血清(F B S )比添加20%F B S 更经济㊂10%F B S+10%马血清(H S )和10%F B S +10%猪血清(P S )使用较少(图6B )㊂为防止外源微生物的污染,常在培养基中添加抗生素㊂在46篇研究中只有7篇未添加抗生素,抗生素使用率达到84%以上(图6C )㊂在添加抗生素的报道中,1%青-链霉素(P /S )是必需成分,也有同时添加了青-链霉素和两性菌素[11,26,28-30,43,47,49],还有同时添加了青-链霉素㊁两性菌素和庆大霉素[44]㊂在培养液中添加谷氨酰胺和谷氨酰胺丙氨酸二肽可提高细胞的活性㊁促进细胞生长㊂部分还添加了基础成肌纤维细胞生长因子(b F G F )㊁鸡胚提取物(C E E )㊁氨基酸(A A )㊁4-羟乙基哌嗪乙磺酸(H E P E S )和表皮生长因子(E G F )等物质(图6D~6H ),其中b F G F ㊁C E E 和E G F 可提高细胞的贴壁率,A A 为细胞生长提供营养,5392中 国 畜 牧 兽 医49卷H E P E S 保证细胞生长的缓冲能力㊂在培养液中添加胞外基质(如明胶㊁鼠尾胶原㊁多聚赖氨酸㊁层黏连蛋白和纤维黏连蛋白)可有效提高细胞的贴壁率[77]㊂对于没有损伤的细胞,有自然贴壁的能力,不用添加促贴壁的物质,增加添加物后细胞渗透压和缓冲力会改变还需要添加缓冲液,因此,D M E M/F 12+10%F B S +1%P /S 是猪骨骼肌卫星细胞培养的最佳培养液㊂①A ,基础培养基使用百分率;B ,血清使用百分率;C ,抗生素使用百分率;D ,谷氨酰胺使用百分率;E ,基础纤维生长因子使用百分率;F ,鸡胚提取物使用百分率;G ,氨基酸使用百分率;H ,其他添加物的使用百分率㊂②D M E M ,杜氏改良伊戈尔培养基;F B S ,胎牛血清;H S ,马血清;P S ,猪血清;F C S ,小牛血清;P S ,青-链霉素;A m p ,两性菌素;G TM ,庆大霉素;b F G F ,基础成肌纤维细胞生长因子;C E E ,鸡胚提取物;N E A A ,非必需氨基酸;A A ,氨基酸;H E P E S ,4-羟乙基哌嗪乙磺酸;E G F ,表皮生长因子;N o n e ,在46篇文献中未使用该物质①A ,T h eu s e d p e r c e n t a g e o f b a s i cm e d i u m ;B ,T h e u s e d p e r c e n t a g e o f s e r u m ;C ,T h e u s e d p e r c e n t a ge of a n t i b i o t i c s ;D ,T h e u s e d p e r c e n t ag eo f g l u t a m i n e ;E ,Th eu s e d p e r c e n t a g e o f b a si c f i b e r g r o w t h f a c t o r ;F ,T h e u s e d p e r c e n t a g e o f c h i c k e n e m b r yo e x t r a c t ;G ,T h eu s e d p e r c e n t a g eo fa m i n oa c i d s ;H ,T h eu s e d p e r c e n t a g eo fo t h e ra d d i t i v e s .②D M E M ,D u l b e c c o s m o d i f i e dE a g l e s m e d i u m ;F B S ,f e t a lb o v i n es e r u m ;H S ,H o r s es e r u m ;P S ,P o r c i n es e r u m ;F C S ,F e t a l c a l fs e r u m ;P /S ,P e n i c i l l i n -s t r e p t o m yc i n ;A m p ,A m p h o t e r i c i n ;G TM ,G e n t a m i c i n ;b F G F ,B a s i c f i b r o b l a s t g r o w t h f a c t o r ;C E E ,C h i c k e n e m b r y o e x t r a c t ;N E A A ,N o n e s s e n t i a l a m i n oa c id ;A A ,A m i n oa c i d ;H E P E S ,4-h y d r o x ye t h y l p i p e r a z i n ee t h a n e s u lf o n i ca c i d ;E G F ,E p i d e r m a lg r o w th f a c t o r ;N o n e ,T h e s u b s t a n c ew a sn o t u s e di n46l i t e r a t u r e s 图6 培养液各组分及其使用百分率F i g .6 C o m p o n e n t s o f c u l t u r em e d i u ma n d t h e i r p e r c e n t a ge of u s e 63928期喻宗岗等:猪骨骼肌卫星细胞体外分离培养研究进展3骨骼肌卫星细胞的鉴定骨骼肌卫星细胞是多潜能干细胞,可以分化为成肌细胞和成脂细胞,因此可以使用成肌或成脂标志物来鉴定㊂根据标志基因在细胞中的位置可分为核标记㊁转录因子标记和细胞表面膜蛋白标记[78]㊂常见的核标记有配对盒基因3(P A X3)㊁P A X7;转录因子标记有生肌调节因子5(M y f5)㊁M y f4㊁肌分化因子(M y o D)㊁肌细胞生成素(M y o G)等,表面膜蛋白主要有m-钙黏蛋白㊁α7-和β1-整合素㊁c-M e t㊁C-X-C趋化因子受体4型(C X C R4)㊁多配体蛋白聚糖-3和多配体蛋白聚糖-4㊁降钙素受体㊁颅脑损伤蛋白-1㊁C D34㊁血管细胞黏附分子-1 (V C AM1)和神经细胞黏附分子-1(N C AM1)[79-80]㊂肌卫星细胞标志基因有P A X7[7,43,47,53,56,60,63,66,81-83]和M y f5[27,40,67,84],成脂标志基因有脂蛋白脂酶(L P L)㊁过氧化物酶体增殖物激活受体(P P A Rγ)㊁脂肪细胞和定向分化因子1(A D D1)和固醇调节元件结合蛋白-1(S R E B P-1)[67],成肌标志基因有P A X7[27,28,34]㊁M y o D㊁M y o D1[4,26-28,67,85]㊁M y o G[26,28,85]㊁M y f5[27,28,33,34]㊁肌球蛋白重链(MH C)[24]和结蛋白(D e s m i n)[4,24,28,30,55]㊂P A X7是鉴定骨骼肌卫星细胞的最佳因子㊂免疫荧光(I F)㊁实时荧光定量P C R(q P C R)㊁流式细胞分析(F C)和免疫组化(I H C)是常用的鉴定方法(图7)㊂不同的鉴定因子因其表达的部位和鉴定的简便及有效性的不同而有所侧重㊂D e s m i n使用I H C法鉴定最为有效(图8A),M y f5用I F法鉴定效果最好(图8B)㊂M y o D的鉴定方式中q P C R 法相较I F法更为方便㊁经济,因此被广泛使用(图8C)㊂P A X7使用I F法鉴定最有效(图8D)㊂成脂细胞标志基因常用P C R法来鉴定,还可以使用油红O染色法来鉴定[51]㊂相较于D e s m i n㊁M y f5和M y o D,P A X7在卫星干细胞㊁卫星细胞和成肌细胞上均有表达(图9),因此是最佳的鉴定因子㊂图7鉴定方法及其使用百分率F i g.7I d e n t i f i c a t i o nm e t h o d s a n d t h e i r p e r c e n t a g e o f u se图8标记因子的鉴定方法及其使用百分率F i g.8I d e n t i f i c a t i o nm e t h o da n da p p l i c a t i o n p e r c e n t a g e o fm a r k e r f a c t o r s7392中 国 畜 牧 兽 医49卷图9 参与调控肌卫星细胞生长变化过程的标记因子[33]F i g .9 M a r k e r f a c t o r s i n v o l v e d i n r e g u l a t i n g t h e g r o w t ha n d c h a n ge s o fm u s c l e s a t e l l i t e c e l l s [33]4 小 结猪骨骼肌卫星细胞可以从不同时期的多种肌肉中分离,且各时期分离细胞的数量和增殖能力不同,部位决定着取材的便捷性,因此,常用1日龄猪的背最长肌分离猪骨骼肌卫星细胞㊂酶消化涉及到用酶种类及各酶使用方法,酶种类的增加可以有效去除肌肉中的杂质,但延长了消化时间,很可能因过度消化损伤细胞膜,降低细胞活力,所以使用单酶是比较保险的选择㊂0.2%Ⅱ型胶原蛋白酶37ħ消化2h 是最有效的消化方式㊂消化后的肌肉组织是细胞和异质碎屑的混合物,需要通过过滤和离心去除组织碎屑,获得纯细胞㊂单次过滤㊁单次离心难以有效去除杂质,多次过滤㊁离心可能会损伤细胞膜降低细胞活力,因此2次过滤加3次离心是最佳选择,即400目+200目过滤,1500ˑg 离心10m i n㊁800ˑg 离心10m i n ㊁800ˑg 离心5m i n 是最佳组合㊂过滤离心后的细胞还包含成肌细胞,因此需进一步培养纯化获得单一的骨骼肌卫星细胞㊂成肌细胞在培养液中正常生长后会较早贴壁,因此可取贴壁后的上清继续培养来获得骨骼肌卫星细胞㊂培养液对细胞的正常生长至关重要,原代细胞在离体环境中需要充足的营养和无菌环境,D M E M /F 12+10%F B S +1%P /S 是细胞培养的常见培养液㊂骨骼肌卫星细胞可通过核标志㊁转录标志和膜表面标志等标志基因或卫星细胞标记㊁成肌细胞标记和成脂细胞标记因子来鉴定,P A X 7基因广泛表达于肌卫星细胞和成肌细胞,因此是最佳的鉴定基因㊂尽管q P C R ㊁F C ㊁I F 和I H C 等方法均可用来鉴定,但I F 法更为直观和准确,因此广泛被使用㊂为获得纯度㊁活力和分化潜能更高的猪骨骼肌卫星细胞,还需要规范和优化取材㊁消化㊁过滤㊁离心㊁培养和鉴定等步骤,建立简便有效的体外分离培养程序㊂随着新的鉴定方法的出现和新技术的普及,猪骨骼肌卫星细胞的分离培养也将更加高效便捷㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] G R O E N E N M A ,A R C H I B A L D A L ,U E N I S H IH ,e ta l .A n a l y s e sof p i gg e n o m e s p r o v i d ei n s i gh ti n t o p o r c i n ed e m o g r a p h y an de v o l u t i o n [J ].N a t u r e ,2012,491(7424):393-398.[2] N A K AMU R A A ,T A K E D AS .M a m m a l i a nm o d e l so fd u c he n n em u s c u l a rd y s t r o p h y:P a t h o l o gi c 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r l a n d s ),2014,36(2):545-547.[6] F A R U PJ ,R A H B E K S K ,R I I SS ,e t a l .I n f l u e n c eo fe x e r c i s ec o n t r a c t i o nm o d ea n dpr o t e i n s u p p l e m e n t a t i o n o n h u m a ns k e l e t a l m u s c l es a t e l l i t e c e l l c o n t e n ta n d m u s c l ef i b e r g r o w t h [J ].J o u r n a l o f A p p l i e dP h y s i o l o g y ,2014,117(8):898-909.[7] Z HA O X ,Z HU R ,WA N G Y ,e ta l .D i f f e r e n t i a t i o np r o l i f e r a t i v e c a p a c i t y of s k e l e t a lm u s c l es a t e l l i t ec e l l s f r o m D a p u l i a na n dL a n d r a c e p ig s [J ].I t a l i a nJ o u r n a l o f A n i m a lS c i e n c e ,2020,19(1):574-585.[8] HAWK E T ,G A R R Y D .M y o ge n i c s a t e l l i t e c e l l s :P h y s i o l o g y t o m o l e c u l a r b i o l o g y [J ].J o u r n a l o f83928期喻宗岗等:猪骨骼肌卫星细胞体外分离培养研究进展A p p l i e dP h y s i o l o g y,2001,91(2):534-551.[9] M C C A R T H Y JJ,M U L A J,M I Y A Z A K I M,e ta l.E f f e c t i v ef i b 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s c l e-s p e c i f i cd o w n re g u l a t i o no fG Rl e v e l s i n h i b i t sa d i p o g e n e s i s i np o r c i n e i n t r a m u s c u l a ra d i p o c y t et i s s u e[J].S c i e n t i f i cR e p o r t s,2017,7(510):510-522.[47] M I L N E R D J,B I O N A Z M,MO N A C O E,e t a l.M y o g e n i c p o t e n t i a l o f m e s e n c h y m a l s t e m c e l l si s o l a t e d f r o m p o r c i n e a d i p o s e t i s s u e[J].C e l l a n dT i s s u eR e s e a r c h,2018,372(3):507-522.[48] WA N G S,S U N Y,R E N R,e t a l.H3K27m e3d e p l e t i o n d u r i n g d i f f e r e n t i a t i o n p r o m o t e s m y o g e n i ct r a n s c r i p t i o n i n p o r c i n e s a t e l l i t e c e l l s[J].G e n e s,2019,10(2313):231-243.[49] R E D S HAW Z,L O U G HN A P T.A d i p o g e n i cd i f fe r e n t i a t i o no fm u s c l ed e r i v e dc e l l s i s r e p r e s s e db yi n h i b i t i o n o f G S K-3a c t i v i t y[J].F r o n t i e r s i nV e t e r i n a r y S c i e n c 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成骨细胞的体外培养与鉴定

成骨细胞的体外培养与鉴定

成骨细胞的体外培养与鉴定☆
王 勇平 ,廖 皴 ,蒋 矗
I v to lur nd i n ir cu t e a den i c ton o t o a ; t i a i fos e bl s s f t
W a g Y g pn , io YiJa g Ya n on - ig La , i n o
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王 勇平 , 廖 皴 ,蒋 壶 . 骨 细 胞 的 体 外 培 养 与 鉴 定 [ . 国 组 织 工 程 研 究 与 临 床 康 复 ,2 1 , 1 (3: 3 —2 4 成 J中 】 0 1 53 ) 2 1 3 6 6
Abs r ct ta BACKGROUND: e me h so s e b a t ut r 『 vt a e c r n l i t s Th t od fo t o l s l e 门 i o h v e t i t i c u r ai m a on . 0BJE CTI VE: u TO s mmar e os e b a ts u c i i o c t e me h d, ul r on ion a d ien ic t n s g s i t o l s o r e,n vt ul t o c t e c d t , n z r ur u i d t ai in i f o M ET HODS: c A omp t rb e e r v s p r med i bMe n a f n da a a e e c u e - as d r ti al e wa e f or n Pu d a d W n a g t b s s t s ar h man s rp s p b ih d o u c i t u l e s b t e 0 0 an 01 t h eywo ds s e bls . e l ul e i e t c t n”i En i h a d Ch n s n ua e . e p p s e we n 2 0 d 2 wi t e k r ”o t o a t c l c t , d n i a i 0 h ur i f o n gl n i e e l g g s Th a er s a d s r i g i i o c l e an n ic t n o s e b a t r n lde . e c i n vt ut d i t ia i fo t o l s s we e i c u d Rep t ie r s a c n b n r ur de f o e i v e e r h a d Met n y i r c u e t a a alss we e ex l d d. RESULT AND S CONCLUSl ON: i h e e o m e t f e l ut r hnqu s/ i o. s e b a t r W t t ed v lp h n lc l et oc u ec i e n vt o t o l s s f r 0m n ma on ai I b e. p i t u . on er e m b e mar w nd n n b n is e h v e u c s f l ut r d. u i a e s o h t h s t o l s s h v os r a o . o e l u a e be n s c e s ul c l e St des h v h wn t a e e os e b a t a e o s y u t t p c l h a t it s a d g od b o o ia r p t e . ren l, h ut r d os e l t e c m mo x e i n a de t y i a ar c er i n o i l g c l o er s Cu r t t e c l e t obass ar o c sc p i y u n e p rme t l mo ln v r ii o

体外诱导MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化模型的建立

体外诱导MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化模型的建立

体外诱导MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化模型的建立1.包头医学院第一附属医院神经外科内蒙古包头 014030;2.包头医学院内蒙古包头 014030【摘要】目的观察MC3T3-E1细胞在体外诱导条件下成骨分化的特征及碱性磷酸酶(ALP)的表达情况。

方法将MC3T3-E1细胞于六孔板中培养,将含诱导剂(β-GP和抗坏血酸)的MEM-α培养基作为实验组,不含诱导剂的MEM-α培养基作为对照组,两组于第14天、21天是分别行茜素红染色,光学显微镜下观察细胞矿化情况;每隔两天换液一次并收集上清液进行碱性磷酸酶(AIP)活性检测。

结果培养第14天时两组均无矿化结节形成,第21天时实验组细胞出现明显矿化结节,对照组仍不明显;两组碱性磷酸酶(ALP)活性都于15天前呈上升趋势,其后呈下降趋势,实验组细胞活性明显高于对照组(p<0.05)。

结论实验组细胞培养过程中矿化程度和碱性磷酸酶(ALP)活性都明显高于对照组细胞。

【中图分类号】R329.2【文献标识码】A【文章编号】2096-0867(2016)09-234-02骨组织的生理过程包括骨的形成和骨的吸收,其中成骨细胞参与骨细胞形成、分泌和矿化等一系列过程[1]。

MC3T3-E1细胞系来源于小鼠锁骨细胞,是作为体外研究成骨细胞模型的常用细胞[2]。

本实验通过利用含诱导剂(β-GP和抗坏血酸)的培养基和无诱导剂培养基分别培养 MC3T3-E1细胞,观察两组细胞在不同时间的矿化和细胞活性情况。

1材料和方法1.1材料和仪器MC3T3-E1细胞(协和医科大学,中国),MEM-α培养基(gibco,美国),胎牛血清(四季青,中国),青链霉素(gibco,美国)二氧化碳培养箱(Thermo,美国),β-甘油磷酸钠和抗坏血酸(华迈科,中国),茜素红染色液(leagene,中国),碱性磷酸酶试剂盒(碧云天,中国)。

1.2细胞培养将MC3T3-E1细胞接种于含MEM-α培养基(10%胎牛血清,1%青链霉素)的培养瓶内,放置于二氧化碳培养箱(37℃,5%CO2,潮湿)培养,每三天更换一次培养液,待细胞铺满瓶底的80%以上时,可用胰蛋白酶消化,进行传代、冻存或用于后续实验。

矿产

矿产

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

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织, 联合 支 架 的应 用 , 建 组 织 工 程 骨 , 其 植入 体 内修 复 骨 缺 损 。 构 将 现就 成 骨 细 胞 的 来 源 、 化 调控 因 子 、 合 移植 及 中 分 复
医 药方 面的研 究进 展 作 一 综 述 。
【 键 词 】 成 骨 细胞 ; 细 胞 培 养技 术 ; 移植 ; 中药 关

5 2・ 6
中 国骨 伤 2 1 0 0年 7月 第 2 卷 第 7期 C iaJO to 3 hn r p& Ta m J 1 01 Vo. No7 h ru a u. 0, 1 2 23, .


综 述 ・
体外培养宁 赵
( 京 大 学 医学 院 临 床 学 院 南京 军 区南 京 总 医 院 骨科 , 苏 南京 南 江 200 ) 10 2
c n t c in o s u n i e r db n b ln e eb d e a r o ed f cs I i a t l te s u c f se ba t o sr t f is e e gn e e o e, e i a td i t o yt r p i n e e t. n t s r ce, o r eo to ls , u o t mp nh o b h i h o r g lt r c o , o o i r f a d C i e eme ii er s a c r ge s e er v e d e ua oy f tr c mp s eg a n h n s dc n e rh p o r s r e iwe . a t t e w Ke r s Ose ba t ; C l c l r e h i u ; T a s ln a in; C i e eh r a d u s ywo d t o lss el u t etc n q e u r n p a tt h n s e b l r g o
衡 、 量 平 衡 和损 伤 修 复 起 关 键作 用 。 着 细胞 培养 技 术 的发 骨 随 展 , 们 已经 从 许 多 动 物 的 颅 骨 、 髓 基 质 、 膜 及 骨外 组 织 人 骨 骨 中成 功 培 养 出 了具 有典 型成 骨 细 胞 特 性 的 细胞 ,研 究 表 明 培 养 出 的成 骨 细 胞 具 有 良好 的生 物 学 特 性 ,在不 同环 境 下 可 以 形 成 骨 组 织 , 就 成 骨 细 胞 的研 究 进 展 作 一 综 述 。 现
otol th v odbooi l hrce sc ,a rae oetsei df rn e v o m nscnapy on s n rh s ba s ae o i g a c aatrt scncet b n s ieet n i n et,a p ljit t df e e s g l c ii iu n f r a o t
在 于骨 髓 , 存 在 于胚 胎 时 期 间 充质 来 源 的骨 外 组 织 , 脂 肪 还 如 干细 胞 、 管 内皮 细 胞 、 胎 干 细 胞 等 。骨 髓 MS s 体 外 适 血 胚 C 在
当的培 养 条件下 , 具有 向成骨 细胞方 向分化 潜能 。G o to 等 r hs n
Z o g u s a g C iaJO ̄ o h n g oGuh n / hn h p& T a ma 2 0, 3 7) 5 25 5 ww zgz.o ru ,01 2 ( :6 —6 w. sz n g c
成 骨细 胞 是 骨 形 成 细胞 , 骨 组织 的生 长 发 育 、 代 谢 平 对 骨
ABS TRACT W i ed v l p n f elc l r c n lg i o p o l a e s c e su l u t a e se ba t el f t t e eo me t l u t e t h oo y i v t , e pe h v u c sf l c l v t d o t o l s c l o hh oc u e n r y i s tp c l h r c e sis r m u e f n ma k l, o e ma w, e o t u a db n su s su ish v h wn t a e e y ia a a tr t o an mb r i l ul b n  ̄o p r se m n o e t s e ;t d e a e s o t h s c i cf oa s i i h t
【 摘要】 随 着体外细胞培养技 术的发展 , 人们 已经从许 多动物的颅骨 、 骨髓基 质、 骨膜及骨外组 织中成功培养 出
了具有 典 型 成 骨 细胞 特 性 的 细 胞 ,研 究表 明培 养 出的 成 骨 细胞 具 有 良好 的 生物 学特 性 ,在 不 同环境 下 可 以形 成 骨 组
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