单克隆抗体

单克隆抗体的选择及克隆化 杂交瘤细胞及阳性孔的筛选，用多孔细胞培养板筛选， 稀释度要保证每个孔不多于1个细胞，通过抗原抗体 杂交法检测阳性反应
稀释方法获得产特定单克隆抗体的克隆
克隆化是指将抗体阳性孔进行克隆，目的是将抗体 分泌细胞、抗体非分泌细胞、特异性抗体分泌细胞 和无关抗体分泌细胞分开
大量获得单克隆抗体的方法
在DNA水平对Ig基因进行切割、拼接或修饰，导入受体细胞表达的抗体。
思考题:
1. 2. 单克隆抗体和普通抗体有何区别 单克隆抗体技术的应用领域
monoclonal antibodies
通过杂交瘤技术制备单克隆抗体
一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体的筛选原理
杂交瘤细胞的筛选：HAT培养基筛选 讨论：细胞融合后，体系中会存在哪些细胞？ HAT系次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤 （aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三 种物质
单克隆抗体（ monoclonal antibody ）
1. 传统抗体的产生及特点
多克隆抗体，多个克隆产生的抗体的混合物 产量少，纯度低，特异性差，不能大量制备
2. 单克隆抗体技术
1975年分子生物学家克勒和米尔斯坦创建了 杂交瘤技术，获得杂交瘤，通过克隆化可得 到来自单个杂交瘤细胞的克隆系，即杂交瘤 细胞系，所分泌的抗体是针对同一抗原决定 簇的高度单一的抗体 单克隆抗体是由单个B淋巴细胞经过无性繁殖 （克隆），形成基因型相同的细胞群，所产 生的化学性质单一，纯度高，特异性强的抗 体
3. 单克隆抗体的应用
3.1 作为生物治疗的导向武器
将针对某一肿瘤的单克隆抗体与化疗药物或放疗药物连接， 利用单抗的特异导向作用，将药物带到靶器官，直接杀伤 靶细胞 抗肿瘤细胞毒剂，化疗药物、细菌毒素、植物毒素或放射 同位素等
药物
3.2 医学诊断
将放射标记物与单抗连接，折射患者体内进行放射免疫 显像，协助肿瘤的诊断 肿瘤诊断、病原微生物诊断、机体移植排斥反应、白血 病诊断等
ຫໍສະໝຸດ Baidu
3.5 单克隆抗体在天然药物研究中的应用 以单克隆抗体为基础的酶联免疫分析可用 于天然药物有效成分的分离与纯化、新药 筛选等研究
3.6 在食品安全领域的应用
动物性食品检测，如对抗生素、激素类药物及病原微 生物等的检测，植物性食品中农药残留、生物毒素、 病原菌等检测
4. 抗体的发展
Polyclonal antibody: 第一代抗体
3.3 作为免疫增强剂或免疫抑制剂
增强抗原的免疫原性 将单抗制成佐剂加到疫苗里，减少疫苗接种时药物的 用量和避免多次接种并能引起机体更好的产生免疫应 答 抗人T淋巴细胞单抗（McAb）作为一种新型免疫抑制 剂，治疗自身免疫疾病和抗器官移植排斥反应
3.4 作为研究工作的探针
利用单抗的特异性，将其作为探针，从分子、细胞和器官 等不同水平，研究抗原物质的结构与功能，从理论上阐明 机理 用荧光物质标记单抗作为探针，快速确定与其结合的相应 生物大分子在细胞中的位置和分布
由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混 合物。如:免疫血清（含多种特异性抗体）
Monoclonal antibody: 第二代抗体
由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇 的特异性抗体。特异性强、灵敏度高。
Genetic engineering antibody: 第三代抗体