《薄层色谱法》PPT课件-PPT课件
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
HPLC一通常采用反相色谱。
对污染物抗受力强
TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不 可逆吸附物质均无影响。
HPLC—— 颗粒物质、腐蚀性物质、 不可逆吸附物质均有大的影响。
Байду номын сангаас
2 薄层色谱系统
薄层板 未改性固定相 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料， 对能形成氢键的物质有特别的选择性。
硅胶CMC——以CMC为黏合剂。配制 0.2% ～ 0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬 浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀 浆。
反相薄层板制备——以不同链长的 正构烷 烃为固定液, 配制成适当浓度的溶液(如5% 硅酮油乙醚溶液), 浸渍硅胶板。
薄层板活化
涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前 置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后 置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有 不同，如：
2
1 原点
离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动 相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于 制备色谱。
锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优 点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术 可以在一般的展开室中进行类似展开。
溶
剂
薄层被刮
前
掉部分
沿
检测
物理方法——紫外光下显示荧光或荧光淬灭
硅胶
110℃
1h
氧化铝
110℃
30min
比纸色谱具有速度快、分离清晰、灵敏度高、可 以采用各种方法显色等特点。
点样
要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽 可能非极性，否则易使斑点扩展。
采用多次点加法，第二次点加时应待 前一次点加的溶剂挥发后再进行。
点样量应适中，过载会引起斑点拖尾， 分离度变差，以最小检测量的几倍～几 十倍为宜。
薄层色谱法
1概述
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。
因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率 高，结果直观，很快被用作定性和半定量的 方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步 操作的仪器化，并实现了计算机化。
分步展开——混合物性质差别较大时， 一种流动相不能有效分离时，可采用不 同溶剂依次展开不同距离。
连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸 发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前 沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对 保留值。
二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。 将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距 离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方 向成90 的方向进行展开。
自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。
药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径 2-4mm, 点间距离约为1.5-2.0cm。
展开方式
多数采用直线形上行展开，薄层板水平 角度以75 为最佳。展开距离一般为1015cm。
多次展开——一次展开未达满意分离时， 可将薄层板干燥后再次用同一种溶剂展 开，可重复多次，直到混合物分离为止。
有机黏结剂——羧甲基纤维素钠(CMC）、 淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特 点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓 硫酸作显色剂。
荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指 示剂，常用的荧光指示剂
在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光 素、硫化镉、阴极绿等。
在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。
手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 – 5ul），微量注射器。
自动点样
Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气 流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层 上流下样品条带。
• 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加； 条带宽度不超过2mm，有利于改善分 辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要 求薄层板强度高。
含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示， 并以下标注明其激发光波长。例 硅胶HF254
薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例：
硅胶板（粒度10 ～40um）
硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅 速研磨均匀，立即涂铺。
化学方法——加化学试剂显色，要求显色稳定、 持久、专属、灵敏、线性良好。
斑点定位方法
碘蒸气法——灵敏、简便，为通用显色法。将 碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸 内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂 置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑点。放置时 间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信 噪比降低。用针头将斑点标记下来，放在通风 处使碘挥发。
载板:薄层色谱中负载固定相薄层的平面介 质,一般为玻璃板、金属板或塑料板
——玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡 数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分 漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。要求 光滑、平整、洗净后不附水珠。
黏结剂
无机黏结剂——石膏（硫酸钙）， 添加石膏的吸附剂以字母“G”表示。 没有黏结剂的吸附剂以字母“H”表 示。无机黏结剂的优点是：耐高温， 耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否 则匀浆易凝固。薄层强度差。
薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）
固定相和流动相
TLC——流动相流动靠毛细作用力， 流动相选择较少受限制。而 HPLC是 在封闭的系统内，流动相流量靠泵控 制，溶剂选择受检测器限制。
样品处理
TLC要求没有HPLC严格。
色谱分离
TLC可同时分离多个样品，并可采用相同 或不同溶剂进行同向或双相多次展开，通 常采用正相色谱。
表面改性固定相
疏水改性硅胶——化学键合烷基
亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二 羟基等，薄层板极性介于极性吸附剂和 疏水改性剂之间（极性次序：硅胶﹥氨 基﹥氰基﹥二羟基﹥ 反相）。
表面改性纤维素——乙酰化纤维素
药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土类、 氧化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一 般要求10 – 40 um。
对污染物抗受力强
TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不 可逆吸附物质均无影响。
HPLC—— 颗粒物质、腐蚀性物质、 不可逆吸附物质均有大的影响。
Байду номын сангаас
2 薄层色谱系统
薄层板 未改性固定相 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料， 对能形成氢键的物质有特别的选择性。
硅胶CMC——以CMC为黏合剂。配制 0.2% ～ 0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬 浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀 浆。
反相薄层板制备——以不同链长的 正构烷 烃为固定液, 配制成适当浓度的溶液(如5% 硅酮油乙醚溶液), 浸渍硅胶板。
薄层板活化
涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前 置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后 置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有 不同，如：
2
1 原点
离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动 相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于 制备色谱。
锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优 点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术 可以在一般的展开室中进行类似展开。
溶
剂
薄层被刮
前
掉部分
沿
检测
物理方法——紫外光下显示荧光或荧光淬灭
硅胶
110℃
1h
氧化铝
110℃
30min
比纸色谱具有速度快、分离清晰、灵敏度高、可 以采用各种方法显色等特点。
点样
要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽 可能非极性，否则易使斑点扩展。
采用多次点加法，第二次点加时应待 前一次点加的溶剂挥发后再进行。
点样量应适中，过载会引起斑点拖尾， 分离度变差，以最小检测量的几倍～几 十倍为宜。
薄层色谱法
1概述
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。
因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率 高，结果直观，很快被用作定性和半定量的 方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步 操作的仪器化，并实现了计算机化。
分步展开——混合物性质差别较大时， 一种流动相不能有效分离时，可采用不 同溶剂依次展开不同距离。
连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸 发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前 沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对 保留值。
二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。 将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距 离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方 向成90 的方向进行展开。
自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。
药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径 2-4mm, 点间距离约为1.5-2.0cm。
展开方式
多数采用直线形上行展开，薄层板水平 角度以75 为最佳。展开距离一般为1015cm。
多次展开——一次展开未达满意分离时， 可将薄层板干燥后再次用同一种溶剂展 开，可重复多次，直到混合物分离为止。
有机黏结剂——羧甲基纤维素钠(CMC）、 淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特 点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓 硫酸作显色剂。
荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指 示剂，常用的荧光指示剂
在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光 素、硫化镉、阴极绿等。
在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。
手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 – 5ul），微量注射器。
自动点样
Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气 流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层 上流下样品条带。
• 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加； 条带宽度不超过2mm，有利于改善分 辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要 求薄层板强度高。
含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示， 并以下标注明其激发光波长。例 硅胶HF254
薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例：
硅胶板（粒度10 ～40um）
硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅 速研磨均匀，立即涂铺。
化学方法——加化学试剂显色，要求显色稳定、 持久、专属、灵敏、线性良好。
斑点定位方法
碘蒸气法——灵敏、简便，为通用显色法。将 碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸 内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂 置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑点。放置时 间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信 噪比降低。用针头将斑点标记下来，放在通风 处使碘挥发。
载板:薄层色谱中负载固定相薄层的平面介 质,一般为玻璃板、金属板或塑料板
——玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡 数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分 漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。要求 光滑、平整、洗净后不附水珠。
黏结剂
无机黏结剂——石膏（硫酸钙）， 添加石膏的吸附剂以字母“G”表示。 没有黏结剂的吸附剂以字母“H”表 示。无机黏结剂的优点是：耐高温， 耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否 则匀浆易凝固。薄层强度差。
薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）
固定相和流动相
TLC——流动相流动靠毛细作用力， 流动相选择较少受限制。而 HPLC是 在封闭的系统内，流动相流量靠泵控 制，溶剂选择受检测器限制。
样品处理
TLC要求没有HPLC严格。
色谱分离
TLC可同时分离多个样品，并可采用相同 或不同溶剂进行同向或双相多次展开，通 常采用正相色谱。
表面改性固定相
疏水改性硅胶——化学键合烷基
亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二 羟基等，薄层板极性介于极性吸附剂和 疏水改性剂之间（极性次序：硅胶﹥氨 基﹥氰基﹥二羟基﹥ 反相）。
表面改性纤维素——乙酰化纤维素
药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土类、 氧化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一 般要求10 – 40 um。