药敏试验及耐药检测

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7、万古霉素耐药的肠球菌（vancomycin-resistant
Enterococcus） VRE 对万古霉素耐药主要有5种表型VanA、VanB、 VanC、VanD和VanE，除VanC为天然耐药外，其余均 为获得性耐药。VanA、VanB可通过质粒将耐药性传递 给其他肠球菌或其他种类的细菌，若传递给MRSA，则 会导致VRSA的出现。
④中介还意味它是一个缓冲区，避免微小的、未能 控制的技术因素造成重大的结果解释错误，特别是 对那些药物毒性范围窄的药物。
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药敏试验结果的表示及其临床意义
剂量依赖敏感(susceptible-dose dependent,SDD)
※
是指抗菌药对感染菌的MIC接近该药在血液和组织中通 常可达到的浓度，感染菌的临床应答率可能低于敏感菌； 当高剂量使用该药仍然安全时，则高剂量给药可能有效。 这个概念主要用于真菌的药敏试验，类似于细菌药敏试 验的“中介”。
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药敏试验结果的表示及其临床意义
※
中介(intermediate,I)： ①抗菌药对感染菌的MIC接近该药在血液和组织中 通常可达到的浓度，感染菌的临床应答率可能低于 敏感菌。 ②意味着某些药物在生理浓集的部位(如尿液中的 喹诺酮类和β内酰胺类)具有临床效力，或者可用。 ③若某药在高剂量使用时是安全的(如β内酰胺类)， 则中介意味着高于通常剂量的药物进行治疗可能有 效。
测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药 对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈越大， MIC越小。 根据CLSI标准，对量取的抑菌圈直径判断病原菌对该药物的
敏感S/中介I/耐药R。
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VRE的简便检测方法是用纸片扩散法，对于中介的结果
（15-16mm）需补做MIC。
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8、克林霉素诱导耐药试验（D-实验）
克林霉素能被红霉素诱导产生耐药，靠近红霉素纸 片的克林霉素纸片抑菌圈出现“截平”现象，像字母 D。 检测葡萄球菌
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药敏试验结果的表示及其临床意义
联合药敏试验的结果可以表现为无关、拮抗、相加、协 同。 协同作用是临床和实验室期盼的结果。 协同用药最典型的例子是青霉素或其同类物与氨基糖苷
类抗生素联合治疗肠球菌感染心内膜炎。
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抗菌药物联合应用目的在于： ①治疗单一用药可能不能控制的混合感染 ②治疗单一抗菌药物不能有效控制的严重细菌 感染 ③治疗病因未明的严重感染 ④预防或推迟细菌抗生素耐药性的发生 ⑤减少药物的毒性反应
B组（一级试验，有选择报告药物） C组（补充试验，有选择报告药物） U组（仅用于泌尿道的补充试验药物） O组（有适应症，不允许常规试验并报告药物）
常规药敏试验报告药 物为前四种
Inv组（处于研究阶段，未被FDA认可药物）
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肠球菌
A组：氨苄西林、青霉素 B组：达托霉素、利奈唑胺、奎奴普汀/达福普汀、万古霉 素 C组：高水平庆大霉素、链霉素 U组：环丙、左氧、诺氟沙星、呋喃妥因、四环素
KPC酶能水解除头 霉素外的各种β内酰 胺类抗生素，可由肠 杆菌科细菌产生。
改良Hodge试验
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4、耐甲氧西林葡萄球菌（methicillin resistance staphylococci, MRS）筛选
MRS多是MecA基因编码了对β-内酰胺类药物低亲和力的蛋
白PBP2a，取代了固有的青霉素结合蛋白PBPs。 MRS的简便检测方法是用头孢西丁纸片扩散法，要基于头孢 西丁的结果报告苯唑西林敏感或耐药。 MRS不论其体外药敏试验结果如何，其对所有的β-内酰胺
※
结果的表示方法只是对抗菌药物临床治疗效果的一种
预测。 敏感(susceptible,S)：表明该菌株所致感染可使用此 种抗微生物药物常规剂量进行治疗，除非存在禁忌证。 耐药(resistant,R)：耐药是指即使使用大剂量的抗菌药 物治疗时，该抗菌药在感染部位也不能抑制该感染菌 生长。
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抗菌药物敏感性试验 （antimicrobial susceptibility test AST）
简称药敏试验，是指在体外测定抗菌药物抑制或杀菌的能力的实验
药敏试验用抗菌药物的分组 CLSI将抗菌药物分成A、B、C、U、O、Inv六个主要组别
A组（一级试验并常规报告药物）
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耐药机制
1、遗传学机制
染色体介导的耐药 为细菌本身所固有的耐药，
一般具有种属特异性，如肠球菌耐头孢菌素，
革兰阴性杆菌耐万古霉素等。 质粒介导的耐药 耐药基因易于传播，目前该 类耐药在临床上占有重要地位。如由质粒介导 的产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的大肠埃希菌
和肺炎克雷伯菌。
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SUMMIT
常用的药敏试验方法：纸片扩散法、稀释法、E-test、 联合药敏试验、全自动药敏检测系统 药敏试验结果表示及其临床意义 S 表明推荐的抗菌药物可以使用，可能达到临床效果； I 意味着这个范围的抗菌药物在常规剂量下疗效不理想， 高浓度下可能有效； R 意味着此种情况下抗菌药物不能用于此菌株的治疗。 SDD 真菌的药敏试验，类似于细菌药敏试验的“中介” NS MIC值高于该敏感折点时，就报告为不敏感
直接测定抗菌药物的最低抑菌浓度（minimal inhibitory
concentration, MIC) 稀释法包括两种：肉汤稀释法和琼脂稀释法。 基本原理：在肉汤或琼脂中将抗菌药物进行一系列（倍 比）稀释后，定量接种待实验菌，在合适的温度下孵育
一定时间，待检菌肉眼未见生长的最小药物浓度，即为
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耐药菌检测试验
1、直接β内酰胺酶试验
目前多采用色原法，以头孢硝噻吩为底物，直接与 试验菌作用，纸片由黄色变为红色为阳性。 检测阳性结果表明：该细菌对所有对青霉素酶不稳 定的青霉素（包括青霉素和广谱青霉素）耐药。需 要对葡萄球菌、肠球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟 菌等常规检测。
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参考文献
药理学. 人民卫生出版社 第2版. 实验诊断学. 人民卫生出版社 第2版. 实验诊断学. 北京大学医学出版社 第3版. 临床微生物学检验. 人民卫生出版社 第5版. 全国临床检验操作规程. 人民卫生出版社 第4版. M100 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. CLSI 27th Edition.
属、大肠埃希菌和奇异变形杆菌应报告对所有青霉素类、
头孢菌素类（包括头孢吡肟）以及氨曲南耐药，但不包 括头霉素、碳青霉烯类和含β-内酰胺酶抑制剂的复合制 剂。
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肠杆菌科细菌ESBLs的检测
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3、KPC（Klebsiella pneumoniae carbapenemase） 酶的检测
streptococcus pneumonia, PRSP） K-B法 OX<19 mm时做青霉素MIC≧2 μg/ml
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6、高水平氨基糖苷类耐药的肠球菌（high-level
aminoglycosde resistance, HLAR） K-B法 庆大霉素120μg，出现中介结果（7-9 mm） 需补做MIC进行确证。
稀释法
E-test
联合药敏试验
全自动药敏检测系统
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纸片扩散法 （改良Kirby-Bauer法，K-B法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。
纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围 区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内
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纸片扩散法操作简易，结果直观易于理解，但非定量结果，
且对慢生长菌和扩散慢的药物纸片法不适用。
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稀释法
Dilution antimicrobial susceptibility test
类药物和β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂均无临床疗效；绝大多
数的MRS具有多重耐药性，包括氨基糖苷类、大环内脂类、 四环素类。
临床治疗MRSA引起的感染首选万古霉素。
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葡萄球菌mec-A介导 的耐药性检测
头孢西丁
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5、耐青霉素肺炎链球菌检测试验（penicillin resistance
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药敏试验结果的表示及其临床意义
不敏感(nonsusceptible,NS)
※
当某新的抗菌药问世时，由于尚未发现耐药株，故
早期的解释标准只有敏感折点；当某个分离株的
MIC值高于该敏感折点时，就报告为不敏感。
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药敏试验结果的表示及其临床意义
※
简而言之： S 表明推荐的抗菌药物可以使用，可能达到临 床效果； I 意味着这个范围的抗菌药物在常规剂量下疗效 不理想，高浓度下可能有效； R 意味着此种情况下抗菌药物不能用于此菌株 的治疗。
的刻度浓度即为抗生素抑制细菌的特定浓度，又称抑制
浓度(IC)，它与MIC呈高度相关。二者直接相对应， CLSl的 MIC折点值适用于E试验。 具体操作视频请点击这里
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联合药敏试验
此实验是为了了解两种抗菌药物联合应用时的抗菌效果。
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耐药机制
2.生物化学机制
产生灭活酶或钝化酶使抗生素失活。如β -内酰胺酶、 氨基糖苷类钝化酶、氯霉素乙酰基转移酶。 作用靶位的改变使抗生素失去作用位点。如MRSA产 生青霉素结合蛋白2a。
主动外排机制
药物泵出系统。
如铜绿假单胞菌其外膜存在着独特的
细菌生物膜的形成。
该药物对待检菌的最低抑菌浓度。 试验菌的结果报告可用MIC(μg/ml)数值或用敏感(S)、中
介(I)和耐药(R)报告。
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仪器
手工
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浓度梯度纸条扩散法（E test）
是一结合稀释法和扩散法原理对细菌药敏试验直接定量 的技术。 将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜， 围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点
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Antibiotic Resistance A Global Problem
1961 — MRSA
1967 — PRSP 1983 — ESBLS 1986 — VRE 1988 — MBL 1997 — VISA 2002 — VRSA
Emergence → Spread
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铜绿假单胞菌
A组：头孢他啶、庆大霉素、妥布霉素、哌拉西林 B组：阿米卡星、氨曲南、头孢吡肟、环丙、左氧、亚胺 培南、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦，替卡西林 U组：洛美或氧氟沙星、诺氟沙星
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常用药敏试验的方法
体外AST包括：※
抑菌试验：纸片扩散法
欢迎同学们学习实验诊断学
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感染性疾病的实验诊断 --药敏试验及耐药检测
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重点掌握
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常用的药敏试验方法
※ ※
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药敏试验结果表示及其临床意义 ※ ※
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主要内容
耐药菌历史 耐药机制
抗微生物药物敏感性试验
耐药菌检测试验 药敏结果的表示及其临床意义
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பைடு நூலகம்
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2、超广谱β内酰胺酶的检测（extanded spectrum betalactamases, ESBLs） ESBLs由革兰氏阴性杆菌产生，质粒编码，其活性可被 β内酰胺酶抑制剂抑制，可通过转化、转导、接合、转 移等方式传递，易于造成耐药菌流行。 检测包括纸片法筛查和确证试验。产ESBLs的克雷伯菌