质粒DNA的限制性酶切鉴定 ppt课件

pUCCARNAi（2892bp）
TAkara
【实验步骤】 1、在一个洁净的0.5 ml离心管中混匀下列反应物：
反应物
体积（µl）
灭菌水
2.2
10×Buffer
2
质பைடு நூலகம்DNA
5
PstI
0.8
总计
10
2、将反应物置于37℃水浴，温浴1～3小时。 3、琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切结果。
思考题
如 果 一 个 DNA 酶 解 液 在 电 泳 后 发 现 DNA未被酶切或者酶切不完全, 你认为可能 是什么原因？
实验三、 质粒DNA的限制性酶切鉴定
【一、实验目的】
学习和掌握限制性内切酶的特性、酶解， 并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键 工具。
学习通过限制性酶切法鉴定阳性克隆的方 法原理与技术。
【二、实验原理和背景】
限制性核酸内切酶（Restriction Endonuclease， REase，RE ），是一类能够识别双链DNA 分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切 割DNA双链结构的核酸内切酶。
HindⅠ
属名 种名 血清型 编号
酶活性的定义
一个活性单位（U)，是指在50l反应体系 中，37oC的条件下，经过1小时的反应时间， 将1g DNA 完全酶解所需要的酶量。
【实验仪器、材料与试剂】 一、实验仪器 微量移液器 微型离心机 恒温水浴箱
二、材料和试剂 重组质粒pUCCARNAi-X（2892+700bp） Pst I及其酶切缓冲液 H2O
Oryzae ② 古细菌( archaea) ③ viruses of certain unicellular
algae 小球藻病毒Chlorella viruses
限制性核酸内切酶的命名
1973年H.O Smith和D. Nathans提议的命名系统。 命名原则如下：
（1）由寄主微生物属名的第一个字母（大写，斜体） 和种名的前两个字母（小写，斜体）构成酶的基本名 称。如：大肠杆菌（Escherichia coli）用Eco表示；
若该微生物为变种或品系，再加上该变种或品系的 第一个字母（正体）。如：EcoK 。
（2）如果某一寄主菌株，具有几种不同的限制与修 复系统，则以罗马数字(正体)表示在该菌株中酶发现 的先后顺序。如：HindⅠ、Hind Ⅱ 和Hind Ⅲ 。
Haemophilus influenzae serotype d
An EcoRⅠrestriction enzyme
限制性核酸内切酶的作用
体外剪切基因片段的重要工具，所以常常与核 酸聚合酶、连接酶以及末端修饰酶等一起称为 工具酶。
限制性核酸内切酶不仅是DNA重组中重要的工 具，而且还可以用于基因组酶切图谱的鉴定。
ER来源
① 细菌（bacteria） Hin dⅢ: Haemophilus influenzae Rd XorKII,XorKI : Xanthomonas oryzae pv.