2.2《分解尿素的细菌的分离与计数》
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1.从肥沃、湿润的土壤先铲去表层土3cm左 右再取样 2. 小铁铲和信封要灭菌
3.称取土壤应在火焰旁
㈡.制备培养基：
以尿素为唯一氮源的选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 制备牛肉膏蛋白胨培养基的作用？ 作为对照，用来判断选择培养基是否起到了 选择的作用。 将菌液稀释相同的倍数，若在牛肉膏蛋白 胨培养基上生长的菌落数目明显多于选择培 养基上的数目,说明选择培养基已筛选出一些 菌落。
2、实验室中微生物的筛选原理：（p21第三段） 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包 括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻 止其他微生物生长。
2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基
3.分离不同的微生物采用不同的稀释度：
4、105、106稀释液 一般用 10 （1）测细菌数： （2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液 （3）测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于 计数的平板
【教学目标】
1．知识与技能 （1）分解尿素菌的分离与计数的实验步骤 （2）能分解尿素菌的鉴定 2．过程与方法 （1）通过实验，初步学会土样的选取和选择培养基的配制， 掌握细菌的记数方法 （2）运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数问题。 3．情感、态度与价值观 了解微生物分离培养技术在生活实际中的应用，体会科 学、技术、社会的相互关系
㈤.微生物的培养与观察
1.培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的培养与观察
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？（反馈一） 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 ③什么样的微生物可以在这个培养基上生长
选择培养基
①概念（p22）
反馈一：选择培养基的功能如何实现？
㈡.统计菌落数目：
①测定微生物数量的常用方法？ ②统计样品活菌数的常用方法？ ③稀释涂布平板法计数的原理？
1、显微镜直接计数： 可以利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定 容积里样品中微生物的数量。 缺点 不能区分死菌与活菌；
3
【教学目标】
1．知识与技能 （1）理解培养基对微生物的选择原理。 （2）了解对微生物数量测定的方法和原理。 （3）设置对照。 2．过程与方法 （1）通过实验，初步学会土样的选取和选择培养基 的配制，掌握细菌的计数方法 （2）运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计 数问题。 3．情感、态度与价值观 了解微生物分离培养技术在生活实际中的应用，体 会科学、技术、社会的相互关系
问题反馈
• 1.为什么培养基中尿素还要加葡萄糖为碳源？
• 2.如何设置对照实验？ • 3.选择培养基的功能如何实现？
1、课题目的
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一.研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
实例： DNA多聚酶链式反应 （PCR）是一种在体外将 少量DNA大量复制的技术， 此项技术要求使用耐高温 （930C）的DNA聚合酶。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。（p21第二段）
专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
脲酶 CO(NH2 ) H 2O 2+ 2NH + CO2
2.间接计数法（活菌计数法） （1）常用方法： 稀释涂布平板法
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只有一个 菌落 因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
注意事项
①计数用的起始菌液量必须是定量的（公式） ②为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
方案一：由其他同学用与A同学相同土样来自百度文库行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有 说服力，对照的设置是必不可少的。 讨论：如何设置对照证明选择培养基有选择作用？
注：误差太大，须重做或再多设几组
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基 中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质)
(六) .计算
1.公式：每克样品中的菌株数
＝(C÷V)×M
2.实例：计算106倍涂布的三个平板 菌落数分别为212、230、221
（七）菌种的鉴别 1、鉴定：鉴别培养基 加入某种指示剂或化学药品 2.鉴定分解尿素的细菌：酚红培养基： 原理： 脲酶催化尿素分解成氨→培养 基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性
问题反馈
1.为什么不同的微生物用不同的稀释度？ 2.如何计算菌落的数目？ 3.在选择培养基上生长的微生物一定是目的 菌株吗？
二.实验的具体操作
（一）土壤取样 （二）制备培养基： （三）样品的稀释 (四）取样涂布 （五）微生物的培养与观察 （六）细菌的计算 （七）菌种的鉴定
二.实验的具体操作
㈠.土壤取样
③为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
④统计的菌落往往比活菌的实际数目低（原因）
例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的 菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板， 统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三 个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的做法正确吗？如果有问题， 错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
[三]样品的稀释
1.应在火焰旁称取土壤10g。 2.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰 旁进行
（四）.取样涂布平板
1.涂布3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培 养基，并按照由106～稀104释度的顺序分别 吸取0.1 mL进行平板涂布操作。
2.实验时要对培养皿作好标记。注明培养基 类型、培养时间、稀释度、培养物等。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽
本课题知识小结:
3.称取土壤应在火焰旁
㈡.制备培养基：
以尿素为唯一氮源的选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 制备牛肉膏蛋白胨培养基的作用？ 作为对照，用来判断选择培养基是否起到了 选择的作用。 将菌液稀释相同的倍数，若在牛肉膏蛋白 胨培养基上生长的菌落数目明显多于选择培 养基上的数目,说明选择培养基已筛选出一些 菌落。
2、实验室中微生物的筛选原理：（p21第三段） 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包 括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻 止其他微生物生长。
2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基
3.分离不同的微生物采用不同的稀释度：
4、105、106稀释液 一般用 10 （1）测细菌数： （2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液 （3）测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于 计数的平板
【教学目标】
1．知识与技能 （1）分解尿素菌的分离与计数的实验步骤 （2）能分解尿素菌的鉴定 2．过程与方法 （1）通过实验，初步学会土样的选取和选择培养基的配制， 掌握细菌的记数方法 （2）运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数问题。 3．情感、态度与价值观 了解微生物分离培养技术在生活实际中的应用，体会科 学、技术、社会的相互关系
㈤.微生物的培养与观察
1.培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的培养与观察
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？（反馈一） 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 ③什么样的微生物可以在这个培养基上生长
选择培养基
①概念（p22）
反馈一：选择培养基的功能如何实现？
㈡.统计菌落数目：
①测定微生物数量的常用方法？ ②统计样品活菌数的常用方法？ ③稀释涂布平板法计数的原理？
1、显微镜直接计数： 可以利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定 容积里样品中微生物的数量。 缺点 不能区分死菌与活菌；
3
【教学目标】
1．知识与技能 （1）理解培养基对微生物的选择原理。 （2）了解对微生物数量测定的方法和原理。 （3）设置对照。 2．过程与方法 （1）通过实验，初步学会土样的选取和选择培养基 的配制，掌握细菌的计数方法 （2）运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计 数问题。 3．情感、态度与价值观 了解微生物分离培养技术在生活实际中的应用，体 会科学、技术、社会的相互关系
问题反馈
• 1.为什么培养基中尿素还要加葡萄糖为碳源？
• 2.如何设置对照实验？ • 3.选择培养基的功能如何实现？
1、课题目的
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一.研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
实例： DNA多聚酶链式反应 （PCR）是一种在体外将 少量DNA大量复制的技术， 此项技术要求使用耐高温 （930C）的DNA聚合酶。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。（p21第二段）
专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
脲酶 CO(NH2 ) H 2O 2+ 2NH + CO2
2.间接计数法（活菌计数法） （1）常用方法： 稀释涂布平板法
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只有一个 菌落 因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
注意事项
①计数用的起始菌液量必须是定量的（公式） ②为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
方案一：由其他同学用与A同学相同土样来自百度文库行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有 说服力，对照的设置是必不可少的。 讨论：如何设置对照证明选择培养基有选择作用？
注：误差太大，须重做或再多设几组
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基 中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质)
(六) .计算
1.公式：每克样品中的菌株数
＝(C÷V)×M
2.实例：计算106倍涂布的三个平板 菌落数分别为212、230、221
（七）菌种的鉴别 1、鉴定：鉴别培养基 加入某种指示剂或化学药品 2.鉴定分解尿素的细菌：酚红培养基： 原理： 脲酶催化尿素分解成氨→培养 基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性
问题反馈
1.为什么不同的微生物用不同的稀释度？ 2.如何计算菌落的数目？ 3.在选择培养基上生长的微生物一定是目的 菌株吗？
二.实验的具体操作
（一）土壤取样 （二）制备培养基： （三）样品的稀释 (四）取样涂布 （五）微生物的培养与观察 （六）细菌的计算 （七）菌种的鉴定
二.实验的具体操作
㈠.土壤取样
③为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
④统计的菌落往往比活菌的实际数目低（原因）
例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的 菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板， 统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三 个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的做法正确吗？如果有问题， 错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
[三]样品的稀释
1.应在火焰旁称取土壤10g。 2.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰 旁进行
（四）.取样涂布平板
1.涂布3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培 养基，并按照由106～稀104释度的顺序分别 吸取0.1 mL进行平板涂布操作。
2.实验时要对培养皿作好标记。注明培养基 类型、培养时间、稀释度、培养物等。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽
本课题知识小结: