优良酵母菌株的分离和筛选
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ｔｅｓｔ
ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｙｅａｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ
量影响程度也不相同。在最优生长条件下，取得最 高生物量的前３株优良菌株分别为３号（ＯＤ值： ２．１８６）、５号（ＯＤ值：２．１７９）和９号（ＯＤ值：
２．１９８）［７｜。
的２５０ ｍＬ的三角瓶中，２８℃、１６０ ｒ／ｒａｉｎ振荡，并培
２．５
参考文献：
ｍ 嗍 阅
王晓宏，刘大程，殷兆丽，等．复合酵母培养物对奶牛生产性能 的影响［Ｊ］．饲料工业，２０１０（１０）：３７—３８． 成娟丽，张福元．生物蛋白饲料的应用［Ｊ］．畜牧与饲料科学，
２００６（６）：４９—５１．
肖连冬，马红霞．活菌益生高蛋白饲料的生产及应用［Ｊ］．饲料
工业，２００７（２８）：１３—１６．
ｏｆ Ｎｏ．３，Ｎｏ．５，Ｎｏ．９ ｙｅａｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ
辛亚平，昝林森，杜双田。等．几株纤维素分解菌对统糠的混合 发酵研究［Ｊ］．畜牧兽医杂志。２０１０，２９（５）：２５—３１． 辛亚平，咎林森，杜双田，等．降解纤维素菌株筛选及其鉴定 ［Ｊ］．畜牧兽医杂志。２０１１，３０（５）：卜５．
结论
从青贮玉米和大麦啤酒糟饲料中分离１０ｋ酵
ｒ／ｍｉｎ下离心５ ｒａｉｎ，弃去上清液，加入９ ｍＬ蒸馏 水，使细胞重新悬浮，在６２０ ｎｍ下比浊。以培养时
万方数据
５２
家畜生态学报
第３４卷
间为横坐标，ＯＤ值为纵坐标，绘制生长曲线［８］。 通过正交试验结果（表４）筛选出３号、５号和９ 号菌，测定生长发育曲线（图１）。３号菌株的稳定期
为４２～７２ ｈ，生长对数期为６～４２ ｈ，４２ ｈ达最高生
ｈ、３６ ｈ、４２ ｈ、４８ ｈ、５４ ｈ、６０ ｈ、６６ ｈ、７２
ｈ时间点，测Байду номын сангаас
定其ｐＨ值，然后将样液分别分装在两个５ ｍＬ试管 中，冰浴使其生长停止。设３个重复，取其中一管 测定ＯＤ值，绘制出生长发育曲线图。
万方数据
第１期
刘晓辉，等：优良酵母菌株的分离和筛选
５１
号和７号菌发生衰退。其余各酵母菌株的形态大 小、酵母细胞个体及出芽方式观察结果如表３所示。
２．２
菌量等进行优化。培养４８ ｈ，并测定ＯＤ值，发现不 同酵母菌株的最适宜培养条件很相似，为初始ｐＨ 为５．５，３２℃、接菌量为１２ ｍＬ／Ｌ，转速１８０ ｒ／ｒａｉｎ 时，测定的ＯＤ值达最高，即生物产量最高（表４）。 酵母菌株不同，不同的培养条件下各因子对生物产
培养条件优化和筛选结果 采用秸秆粉培养基，对８株分离酵母菌株通过
ｈ，３６
ｈ时生物产量达到最高，ＯＤ值为２．２３１。经过
ｈ达最高生长
鉴定９号菌株为酿酒酵母。
点（５号ＯＤ值：１－９０２；９号ＯＤ值：２．２３１）。通过比 较９株菌株最高生物产量时间点可知，９号菌生物 量最高（图１）。９号菌送至南京金斯瑞生物科技有 限公司进行鉴定，结果为酿酒酵母［９］。
—－３号．４－５号—．＿９号
６．渭南市畜牧技术推广中心，陕西渭南７１４０００；７．西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌７１２１００）
［摘
要］
试验采用麦芽浸粉培养基和秸秆粉培养基，利用平板划线法，从富含酵母菌的青贮
饲料和酒糟饲料中分离出酵母菌，经过培养条件的优化，从中筛选出用作反刍动物饲用的优良 酵母菌株。试验结果表明，从青贮玉米和大麦啤酒糟中分离得到９号菌株生物产量最高，ＯＤ 值为２．２３１，为优良酵母菌株。 ［关键词］ 酵母茵；青贮饲料；培养基；分离；筛选
孙满吉，刘彩娟，张永根，等．直接饲喂酵母培养物对奶牛瘤胃
发酵的影响［Ｊ］．动物营养学报２０１０，２２（５）：１
３９０—１ ３９５．
忉 嘲 嘲
范亚菊，邰丽萍．酵母培养物在奶牛生产中的应用［Ｊ］．兽药饲
料，２０１１（７）１１０—１１２．
图１
Ｆｉｇ．１
３号、５号、９号酵母菌株生长曲线
ｃｕｒｖｅ
Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚａｎｌｓ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｌｌ．ｃｎ
万方数据
５０
家畜生态学报
第３４卷
养基平板上接种纯化后酵母菌菌株，３０℃恒温培养
４８
培养菌液接种在麦芽浸粉培养基平板上，３０℃培养
４８
ｈ，并观察菌落形态。观察是否有发酵现象，清浊
ｈ计数，于高倍显微镜下观察出芽过程。 纯化培养菌株后，转接到装
度，沉淀物的疏松度和紧密度等。观察菌落的形态 大小，厚度，同心圈，辐射线，凹凸度，光滑度、光泽 度、透明度、有无褶皱等，颜色及其他特征‘５｜。
ｈ、３ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、１８ ｈ、２４ ｈ、３０
２结果与讨论
２．１
分离酵母菌菌落和细胞个体的形态特征 在高倍显微镜下，酵母菌具有典型的真核细胞
结构，有细胞壁、细胞核、细胞质、细胞膜、线粒体、微 体、液泡等。酵母菌通常有球形、椭圆形、腊肠形、卵 圆形或者藕节形等形态，无鞭毛，不能游动。本试验 观察到酵母菌的生殖方式为出芽生殖（表３）。酵母 菌比细菌大，约１～５／ｚｍ或５～３０“ｍ，呈乳白色或 红色，表面湿润、粘稠，少数干燥，不透明。液体培养 发酵，培养液变浑浊，有的形成浮膜、有沉淀物卟］。 从青贮饲料和大麦啤酒糟中各分离出５株疑似 酵母菌珠，进行编号１～１０。在培养过程中发现４
正交试验，对培养条件温度、初始ｐＨ、装液量和接
表３
Ｔａｂｌｅ ３
酵母菌细胞个体和菌落形态特征及出芽方式
Ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｂｕｄｄｉｎｇ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｃｅｌｌ ｉｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｎｄ ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ
表４分离酵母菌株正交试验结果
Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｆｉｎｅ Ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｙｅａｓｔ
ＬＩＵ Ｘｉａｏ—ｈｕｉｌ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｃｈｕａｎ２，ＸＩＮ Ｘｉａｏ—ｌｉｎ９３，ＢＡＩ Ｙａｎ—ｑｉｎ４， ＸＵ
３０ ｍｉｎ。
玉米秸秆粉培养基：取当年生无霉变的优质干 燥玉米秸秆加工而成的０．１ ｍｍ粒度细粉２０ ｇ、蛋 白胨１ ｇ、葡萄糖２
１ ０００ ｍＬ，ｐＨ １．２．２ ｇ、ＮａＣｌｌ０
ｇ、琼脂粉２０ ｇ、蒸溜水
ｍｉｎ¨Ｊ。
６．５～７．０，１２１℃灭菌３０
增茵培养在无菌条件下称量饲料样品１０
ｇ，放人带有玻璃珠的三角瓶中，加人麦芽浸粉液培 养基，１８０ ｒ／ｍｉｎ，３０℃振荡培养过夜。
第３４卷第１期 ２０１３年１月
家畜生态学报
Ａｃｔａ Ｅｃｏｌｏｇｉａｅ Ａｎｉｍａｌｉｓ Ｄｏｍａｓｔｉｃｉ
Ｖ０１．３４ Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１３
优良酵母菌株的分离和筛选
刘晓辉１，张效川２，辛小玲３，白延琴４，徐文华５，蔡 涛６，辛亚平ｎ，昝林森７。
（１．天津市兽药饲料监察所，天津３００２１０；２．吴起县畜牧局，陕西吴起７１７６００；３．富平县畜牧兽医Ｔ作站，陕西富平７１１７００； ４．子长县畜牧兽医局史家畔畜牧兽医站，陕西子长７１７３００；５．榆林市榆阳区牛家梁镇畜牧兽医丁作站，陕西榆林７１９０００；
２
奏
３
１．５
Ⅲ 嘲
汤少伟，付石军，郭时金．酵母培养物在饲料中的应用［Ｊ］．中国
饲料。２０１１（８）：２１—２３．
ｌ
翁鸿珍，池永红．奶酒中酵母菌的分离与筛选［Ｊ１．中国酿造，
２０１０（４）：７３－７５．
Ｏ．５
Ｏ ０ ３ ６ １２ １８ ２４ ３０ ３６ ４２ ４８ ５４ ６０ ６６ ７２
嘲
时问愚
Ｔｉｍｅ
装液量／（ｍＬ／瓶）
Ｌｏａｄｅｄ ｌｉｑｕｉｄ
１ ２ ３ ４ ３ ４ １ ２ ４ ３ ２ １ ２ １ ４ ３
空列
Ｅｍｐｔｙ ｃｏｌｕｍｎｓ
１ ２ ３ ４ ４ ３ ２ １ ２ １ ４ ３ ３ ４ １ ２
９旧¨２ ０ ４ ５ ６
３ ４ ４ ４ ４
采用正交设计试验设计Ｌ。。（４４），对培养条件的 温度、初始ｐＨ、接菌量、装液量进行４个水平试验， 优化培养条件，筛选出生长性能好的酵母菌菌株。 然后采用玉米秸秆粉培养基，在不同条件下培养４８ ｈ，并测定生物量［５］。 通过正交试验Ｌ。。（４４）优化筛选出３株菌株进 行生长曲线测定试验。根据正交试验的结果，按照 每个菌株最适合的培养条件，在１８０ ｒ／ｍｉｎ条件下 培养４８ ｈ。分别在０
［文献标识码］
Ａ
［中图分类号］￥８１１．６
［文章编号］
１００５—５２２８（２０１３）０１—００４９—０４
酵母是一种肉眼看不见的微小单细胞微生物， 能将糖发酵成酒精和二氧化碳，是一种天然发酵剂， 分布于整个自然界，它有自己的生命现象，是一种典 型的兼性厌氧微生物，在有氧气和没有氧气存在的 条件下都能够存活［１］。酵母菌是人类文明史中被应 用得最早的真菌类微生物。利用酵母菌发酵饲草饲 料，具有成本低、原料广、周期短、产量高等优点，可 提高饲料营养物质的消化率和吸收率，减少饲料原 料浪费，同时缓解蛋白质饲料资源日益短缺的矛盾， 促进我国畜牧业结构转型，推动畜牧业进一步发 展［２］。本试验采用麦芽浸粉培养基和秸秆粉培养 基，利用平板划线法，从富含酵母菌的青贮饲料和酒 糟饲料中分离出酵母菌，经过培养条件的优化，从中 筛选出优良酵母菌株，作为饲料酵母；为饲料酵母及 发酵饲料在畜牧业生产中的应用提供理论依据［３］。
养２４ ｈ；（２）将上述培养好的菌液按照１０％的比例 接入另外１５瓶装有５０ ｍＬ种子培养基的２５０
ｍＬ
三角瓶中，并标号０～１５，２８℃、１６０ ｒ／ｍｉｎ振荡培 养，每间隔２ ｈ取出一瓶培养液和ｌ ｍＬ菌液，４
０００
２．３生长曲线测定
用稀释培养法（ＭＰＮ）测定生物量：（１）菌种预 培养。将斜面菌种１环至盛有５０ ｍＬ种子培养基
因子
Ｆａｃｔｏｒ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８
温度／＇ｃ
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｌ １ １ １ ２ ２ ２ ２ ３ ３ ３
初始ｐＨ
Ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ
１ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４
接菌量／（ｍＬ／Ｌ）
Ｉｎｏｃｕｌｕｍ
１ ２ ３ ４ ４ １ ２ ３ ３ ４ １ ２ ２ ３ ４ １
母菌菌株，测定显微镜菌落形态，通过系列试验优化 筛选，并鉴定其生长曲线，认为９号菌株属于酵母 属，在初始ｐＨ为５．５，温度为３２℃、接菌量为１２ ｍＬ／Ｌ，装液量为１００ ｍＥ／瓶，转速１８０ ｒ／ｍｉｎ，培养
３６
长点（０Ｄ值：２．１３２）；５号和９号菌株的生长对数期 均为６～３６ ｈ，稳定期为３６～７２
１．２．３
分离、纯化酵母茵
用２层无菌纱布过滤增
１材料与方法
１．１材料 青贮玉米饲料、大麦啤酒糟、麦芽浸粉、秸杆粉。
１．２方 法
菌液，取滤液１ ｍＬ并稀释为１０～、１０～、１０～、
１０一、１０～、１０１
６个浓度梯度，各取０．５ ｍＬ均匀涂
在麦芽浸粉培养基平板上，在３０℃恒温下培养４８
～７２ ｈ，挑选与酵母菌特征菌落相似菌落转接到斜
鉴为稳定菌落。采用秸秆粉培养基，对分离到的酵 母菌株通过正交试验探索培养条件，优化温度、初始 ｐＨ、装液量和接菌量等。培养４８ ｈ，并测定ＯＤ值。
１．２．１
１０
培养基的制备
麦芽浸粉培养基：葡萄糖
ｇ、蛋白胨２ ｇ、麦芽浸粉１ ｇ、酵母膏１ ｇ、琼脂粉 ｇ、乳酸０．３ ｍＬ／Ｌ、水１
０００
１２
ｍＬ、ｐＨ、１２１℃灭菌
面培养基上，平板划线纯化，分离纯化为单一菌落， 无杂菌，编号后转接斜面。
１．２．４
采用麦芽浸粉培养基，通过平板划线法从青贮 饲料和酒糟饲料中分离出酵母菌，进一步纯化，至镜
观察酵母菌菌落形态
在麦芽浸粉液体培
［收稿日期］２０１２—１０—２２，修回日期：２０１２—１１一０９ ［基金项目］国家８６３项目（２０１０ＡＡｌＯＺｌＯｌ，２０１１ＡＡｌ００３０７，２０１ｌＺＸ０８００７－００２，２０１１ＫＴＣＬ０２—１１。２０１２ＢＡＤｌ２８０７）；现代农业产业产 业技术体系建设专项资金资助（ｃＡＲ孓３８）；陕西省农业攻关项目（２０１０Ｋ０２—１３） ［作者简介］刘晓辉（１９６３一），女，河北保定人，硕士，高级兽医师，主要从事动物兽药管理工作。 ＊［通讯作者］辛亚平（１９６５一），男，陕西扶风人，博士，副教授，主要从事养牛学的教学科研和推广丁作。Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉｎｙａｐｉｎｇ＠１２６．ｃｏｍ； 昝林森（１９６３一），男，陕西扶风人，博士，教授，博士生导师，主要从事养牛学的教学科研和推广工作。
１．２．５
１．２．６优化培养条件
有２０ ｍＬ麦芽浸粉液的１００ ｍＬ锥形瓶中，１８０ ｒ／ ｍｉｎ，３０℃培养４８ ｈ，并进行显微镜检测，４℃保存 菌液备用。
观察酵母菌形态及出芽方式
取１ ｍＬ纯
表１
正交设计试验因素水平表
Ｔａｂｌｅ １
Ｆａｃｔｏｒｓ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ
ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｙｅａｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ
量影响程度也不相同。在最优生长条件下，取得最 高生物量的前３株优良菌株分别为３号（ＯＤ值： ２．１８６）、５号（ＯＤ值：２．１７９）和９号（ＯＤ值：
２．１９８）［７｜。
的２５０ ｍＬ的三角瓶中，２８℃、１６０ ｒ／ｒａｉｎ振荡，并培
２．５
参考文献：
ｍ 嗍 阅
王晓宏，刘大程，殷兆丽，等．复合酵母培养物对奶牛生产性能 的影响［Ｊ］．饲料工业，２０１０（１０）：３７—３８． 成娟丽，张福元．生物蛋白饲料的应用［Ｊ］．畜牧与饲料科学，
２００６（６）：４９—５１．
肖连冬，马红霞．活菌益生高蛋白饲料的生产及应用［Ｊ］．饲料
工业，２００７（２８）：１３—１６．
ｏｆ Ｎｏ．３，Ｎｏ．５，Ｎｏ．９ ｙｅａｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ
辛亚平，昝林森，杜双田。等．几株纤维素分解菌对统糠的混合 发酵研究［Ｊ］．畜牧兽医杂志。２０１０，２９（５）：２５—３１． 辛亚平，咎林森，杜双田，等．降解纤维素菌株筛选及其鉴定 ［Ｊ］．畜牧兽医杂志。２０１１，３０（５）：卜５．
结论
从青贮玉米和大麦啤酒糟饲料中分离１０ｋ酵
ｒ／ｍｉｎ下离心５ ｒａｉｎ，弃去上清液，加入９ ｍＬ蒸馏 水，使细胞重新悬浮，在６２０ ｎｍ下比浊。以培养时
万方数据
５２
家畜生态学报
第３４卷
间为横坐标，ＯＤ值为纵坐标，绘制生长曲线［８］。 通过正交试验结果（表４）筛选出３号、５号和９ 号菌，测定生长发育曲线（图１）。３号菌株的稳定期
为４２～７２ ｈ，生长对数期为６～４２ ｈ，４２ ｈ达最高生
ｈ、３６ ｈ、４２ ｈ、４８ ｈ、５４ ｈ、６０ ｈ、６６ ｈ、７２
ｈ时间点，测Байду номын сангаас
定其ｐＨ值，然后将样液分别分装在两个５ ｍＬ试管 中，冰浴使其生长停止。设３个重复，取其中一管 测定ＯＤ值，绘制出生长发育曲线图。
万方数据
第１期
刘晓辉，等：优良酵母菌株的分离和筛选
５１
号和７号菌发生衰退。其余各酵母菌株的形态大 小、酵母细胞个体及出芽方式观察结果如表３所示。
２．２
菌量等进行优化。培养４８ ｈ，并测定ＯＤ值，发现不 同酵母菌株的最适宜培养条件很相似，为初始ｐＨ 为５．５，３２℃、接菌量为１２ ｍＬ／Ｌ，转速１８０ ｒ／ｒａｉｎ 时，测定的ＯＤ值达最高，即生物产量最高（表４）。 酵母菌株不同，不同的培养条件下各因子对生物产
培养条件优化和筛选结果 采用秸秆粉培养基，对８株分离酵母菌株通过
ｈ，３６
ｈ时生物产量达到最高，ＯＤ值为２．２３１。经过
ｈ达最高生长
鉴定９号菌株为酿酒酵母。
点（５号ＯＤ值：１－９０２；９号ＯＤ值：２．２３１）。通过比 较９株菌株最高生物产量时间点可知，９号菌生物 量最高（图１）。９号菌送至南京金斯瑞生物科技有 限公司进行鉴定，结果为酿酒酵母［９］。
—－３号．４－５号—．＿９号
６．渭南市畜牧技术推广中心，陕西渭南７１４０００；７．西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌７１２１００）
［摘
要］
试验采用麦芽浸粉培养基和秸秆粉培养基，利用平板划线法，从富含酵母菌的青贮
饲料和酒糟饲料中分离出酵母菌，经过培养条件的优化，从中筛选出用作反刍动物饲用的优良 酵母菌株。试验结果表明，从青贮玉米和大麦啤酒糟中分离得到９号菌株生物产量最高，ＯＤ 值为２．２３１，为优良酵母菌株。 ［关键词］ 酵母茵；青贮饲料；培养基；分离；筛选
孙满吉，刘彩娟，张永根，等．直接饲喂酵母培养物对奶牛瘤胃
发酵的影响［Ｊ］．动物营养学报２０１０，２２（５）：１
３９０—１ ３９５．
忉 嘲 嘲
范亚菊，邰丽萍．酵母培养物在奶牛生产中的应用［Ｊ］．兽药饲
料，２０１１（７）１１０—１１２．
图１
Ｆｉｇ．１
３号、５号、９号酵母菌株生长曲线
ｃｕｒｖｅ
Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚａｎｌｓ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｌｌ．ｃｎ
万方数据
５０
家畜生态学报
第３４卷
养基平板上接种纯化后酵母菌菌株，３０℃恒温培养
４８
培养菌液接种在麦芽浸粉培养基平板上，３０℃培养
４８
ｈ，并观察菌落形态。观察是否有发酵现象，清浊
ｈ计数，于高倍显微镜下观察出芽过程。 纯化培养菌株后，转接到装
度，沉淀物的疏松度和紧密度等。观察菌落的形态 大小，厚度，同心圈，辐射线，凹凸度，光滑度、光泽 度、透明度、有无褶皱等，颜色及其他特征‘５｜。
ｈ、３ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、１８ ｈ、２４ ｈ、３０
２结果与讨论
２．１
分离酵母菌菌落和细胞个体的形态特征 在高倍显微镜下，酵母菌具有典型的真核细胞
结构，有细胞壁、细胞核、细胞质、细胞膜、线粒体、微 体、液泡等。酵母菌通常有球形、椭圆形、腊肠形、卵 圆形或者藕节形等形态，无鞭毛，不能游动。本试验 观察到酵母菌的生殖方式为出芽生殖（表３）。酵母 菌比细菌大，约１～５／ｚｍ或５～３０“ｍ，呈乳白色或 红色，表面湿润、粘稠，少数干燥，不透明。液体培养 发酵，培养液变浑浊，有的形成浮膜、有沉淀物卟］。 从青贮饲料和大麦啤酒糟中各分离出５株疑似 酵母菌珠，进行编号１～１０。在培养过程中发现４
正交试验，对培养条件温度、初始ｐＨ、装液量和接
表３
Ｔａｂｌｅ ３
酵母菌细胞个体和菌落形态特征及出芽方式
Ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｂｕｄｄｉｎｇ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｃｅｌｌ ｉｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｎｄ ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ
表４分离酵母菌株正交试验结果
Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｆｉｎｅ Ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｙｅａｓｔ
ＬＩＵ Ｘｉａｏ—ｈｕｉｌ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｃｈｕａｎ２，ＸＩＮ Ｘｉａｏ—ｌｉｎ９３，ＢＡＩ Ｙａｎ—ｑｉｎ４， ＸＵ
３０ ｍｉｎ。
玉米秸秆粉培养基：取当年生无霉变的优质干 燥玉米秸秆加工而成的０．１ ｍｍ粒度细粉２０ ｇ、蛋 白胨１ ｇ、葡萄糖２
１ ０００ ｍＬ，ｐＨ １．２．２ ｇ、ＮａＣｌｌ０
ｇ、琼脂粉２０ ｇ、蒸溜水
ｍｉｎ¨Ｊ。
６．５～７．０，１２１℃灭菌３０
增茵培养在无菌条件下称量饲料样品１０
ｇ，放人带有玻璃珠的三角瓶中，加人麦芽浸粉液培 养基，１８０ ｒ／ｍｉｎ，３０℃振荡培养过夜。
第３４卷第１期 ２０１３年１月
家畜生态学报
Ａｃｔａ Ｅｃｏｌｏｇｉａｅ Ａｎｉｍａｌｉｓ Ｄｏｍａｓｔｉｃｉ
Ｖ０１．３４ Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１３
优良酵母菌株的分离和筛选
刘晓辉１，张效川２，辛小玲３，白延琴４，徐文华５，蔡 涛６，辛亚平ｎ，昝林森７。
（１．天津市兽药饲料监察所，天津３００２１０；２．吴起县畜牧局，陕西吴起７１７６００；３．富平县畜牧兽医Ｔ作站，陕西富平７１１７００； ４．子长县畜牧兽医局史家畔畜牧兽医站，陕西子长７１７３００；５．榆林市榆阳区牛家梁镇畜牧兽医丁作站，陕西榆林７１９０００；
２
奏
３
１．５
Ⅲ 嘲
汤少伟，付石军，郭时金．酵母培养物在饲料中的应用［Ｊ］．中国
饲料。２０１１（８）：２１—２３．
ｌ
翁鸿珍，池永红．奶酒中酵母菌的分离与筛选［Ｊ１．中国酿造，
２０１０（４）：７３－７５．
Ｏ．５
Ｏ ０ ３ ６ １２ １８ ２４ ３０ ３６ ４２ ４８ ５４ ６０ ６６ ７２
嘲
时问愚
Ｔｉｍｅ
装液量／（ｍＬ／瓶）
Ｌｏａｄｅｄ ｌｉｑｕｉｄ
１ ２ ３ ４ ３ ４ １ ２ ４ ３ ２ １ ２ １ ４ ３
空列
Ｅｍｐｔｙ ｃｏｌｕｍｎｓ
１ ２ ３ ４ ４ ３ ２ １ ２ １ ４ ３ ３ ４ １ ２
９旧¨２ ０ ４ ５ ６
３ ４ ４ ４ ４
采用正交设计试验设计Ｌ。。（４４），对培养条件的 温度、初始ｐＨ、接菌量、装液量进行４个水平试验， 优化培养条件，筛选出生长性能好的酵母菌菌株。 然后采用玉米秸秆粉培养基，在不同条件下培养４８ ｈ，并测定生物量［５］。 通过正交试验Ｌ。。（４４）优化筛选出３株菌株进 行生长曲线测定试验。根据正交试验的结果，按照 每个菌株最适合的培养条件，在１８０ ｒ／ｍｉｎ条件下 培养４８ ｈ。分别在０
［文献标识码］
Ａ
［中图分类号］￥８１１．６
［文章编号］
１００５—５２２８（２０１３）０１—００４９—０４
酵母是一种肉眼看不见的微小单细胞微生物， 能将糖发酵成酒精和二氧化碳，是一种天然发酵剂， 分布于整个自然界，它有自己的生命现象，是一种典 型的兼性厌氧微生物，在有氧气和没有氧气存在的 条件下都能够存活［１］。酵母菌是人类文明史中被应 用得最早的真菌类微生物。利用酵母菌发酵饲草饲 料，具有成本低、原料广、周期短、产量高等优点，可 提高饲料营养物质的消化率和吸收率，减少饲料原 料浪费，同时缓解蛋白质饲料资源日益短缺的矛盾， 促进我国畜牧业结构转型，推动畜牧业进一步发 展［２］。本试验采用麦芽浸粉培养基和秸秆粉培养 基，利用平板划线法，从富含酵母菌的青贮饲料和酒 糟饲料中分离出酵母菌，经过培养条件的优化，从中 筛选出优良酵母菌株，作为饲料酵母；为饲料酵母及 发酵饲料在畜牧业生产中的应用提供理论依据［３］。
养２４ ｈ；（２）将上述培养好的菌液按照１０％的比例 接入另外１５瓶装有５０ ｍＬ种子培养基的２５０
ｍＬ
三角瓶中，并标号０～１５，２８℃、１６０ ｒ／ｍｉｎ振荡培 养，每间隔２ ｈ取出一瓶培养液和ｌ ｍＬ菌液，４
０００
２．３生长曲线测定
用稀释培养法（ＭＰＮ）测定生物量：（１）菌种预 培养。将斜面菌种１环至盛有５０ ｍＬ种子培养基
因子
Ｆａｃｔｏｒ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８
温度／＇ｃ
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｌ １ １ １ ２ ２ ２ ２ ３ ３ ３
初始ｐＨ
Ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ
１ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４
接菌量／（ｍＬ／Ｌ）
Ｉｎｏｃｕｌｕｍ
１ ２ ３ ４ ４ １ ２ ３ ３ ４ １ ２ ２ ３ ４ １
母菌菌株，测定显微镜菌落形态，通过系列试验优化 筛选，并鉴定其生长曲线，认为９号菌株属于酵母 属，在初始ｐＨ为５．５，温度为３２℃、接菌量为１２ ｍＬ／Ｌ，装液量为１００ ｍＥ／瓶，转速１８０ ｒ／ｍｉｎ，培养
３６
长点（０Ｄ值：２．１３２）；５号和９号菌株的生长对数期 均为６～３６ ｈ，稳定期为３６～７２
１．２．３
分离、纯化酵母茵
用２层无菌纱布过滤增
１材料与方法
１．１材料 青贮玉米饲料、大麦啤酒糟、麦芽浸粉、秸杆粉。
１．２方 法
菌液，取滤液１ ｍＬ并稀释为１０～、１０～、１０～、
１０一、１０～、１０１
６个浓度梯度，各取０．５ ｍＬ均匀涂
在麦芽浸粉培养基平板上，在３０℃恒温下培养４８
～７２ ｈ，挑选与酵母菌特征菌落相似菌落转接到斜
鉴为稳定菌落。采用秸秆粉培养基，对分离到的酵 母菌株通过正交试验探索培养条件，优化温度、初始 ｐＨ、装液量和接菌量等。培养４８ ｈ，并测定ＯＤ值。
１．２．１
１０
培养基的制备
麦芽浸粉培养基：葡萄糖
ｇ、蛋白胨２ ｇ、麦芽浸粉１ ｇ、酵母膏１ ｇ、琼脂粉 ｇ、乳酸０．３ ｍＬ／Ｌ、水１
０００
１２
ｍＬ、ｐＨ、１２１℃灭菌
面培养基上，平板划线纯化，分离纯化为单一菌落， 无杂菌，编号后转接斜面。
１．２．４
采用麦芽浸粉培养基，通过平板划线法从青贮 饲料和酒糟饲料中分离出酵母菌，进一步纯化，至镜
观察酵母菌菌落形态
在麦芽浸粉液体培
［收稿日期］２０１２—１０—２２，修回日期：２０１２—１１一０９ ［基金项目］国家８６３项目（２０１０ＡＡｌＯＺｌＯｌ，２０１１ＡＡｌ００３０７，２０１ｌＺＸ０８００７－００２，２０１１ＫＴＣＬ０２—１１。２０１２ＢＡＤｌ２８０７）；现代农业产业产 业技术体系建设专项资金资助（ｃＡＲ孓３８）；陕西省农业攻关项目（２０１０Ｋ０２—１３） ［作者简介］刘晓辉（１９６３一），女，河北保定人，硕士，高级兽医师，主要从事动物兽药管理工作。 ＊［通讯作者］辛亚平（１９６５一），男，陕西扶风人，博士，副教授，主要从事养牛学的教学科研和推广丁作。Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉｎｙａｐｉｎｇ＠１２６．ｃｏｍ； 昝林森（１９６３一），男，陕西扶风人，博士，教授，博士生导师，主要从事养牛学的教学科研和推广工作。
１．２．５
１．２．６优化培养条件
有２０ ｍＬ麦芽浸粉液的１００ ｍＬ锥形瓶中，１８０ ｒ／ ｍｉｎ，３０℃培养４８ ｈ，并进行显微镜检测，４℃保存 菌液备用。
观察酵母菌形态及出芽方式
取１ ｍＬ纯
表１
正交设计试验因素水平表
Ｔａｂｌｅ １
Ｆａｃｔｏｒｓ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ