S2实验二培养基及其配制理论资料
实验二 培养基的配制和灭菌
实验二培养基的配制和灭菌一、实验目的微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。
培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。
二、内容、材料和方法(一)培养基的配制培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。
1马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）这是植病实验室最常用的培养基(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分离和培养，有时也用于植物病原细菌。
成分：马铃薯200克蔗糖 10~20克琼脂 17~20克加水至1000毫升方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。
马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH，培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不必调节pH。
5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。
2肉汁胨培养基（BPA）这种培养基主要用于细菌的分离和培养成分：牛肉浸膏 3克蛋白胨 5~10克蔗糖 10克酵母浸膏 1克琼脂 17~20克加水至 1000毫升方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入，调节pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。
牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再开始沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。
实验2培养基制备和灭菌技术_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验二培养基制备和灭菌技术一、实验目的1．学习一般培养基的制备方法。
2．掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用的灭菌方法。
二、实验原理（一）培养基培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的一种基质。
它是微生物的生活环境，各种微生物对养分和培养基的物理、化学要求条件不一样，为了分离、培养、鉴定、保藏和研究不同种类的微生物，就应当根据它们的需要，配制合适的培养基。
微生物在培养基上生长发育，必须在一定的最适酸碱度范围才能表现出它们最好的生命活动力。
不同的微生物对酸碱度的要求不同，因此，我们在配制培养基时，必须调节培养基的pH值。
培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质配制而成，如马铃薯、玉米粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等，这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定的天然有机物质配制成的培养基，如牛肉膏蛋白胨、马铃薯、麦芽汁培养基。
它适用于生产上大规模培养微生物。
2．合成培养基:合成培养基是用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，也称化学成分明确的培养基，例如高氏一号培养基、查氏培养基等。
一般适用于在实验室范围内研究微生物的形态、代谢、分类鉴定、生物测定、菌种选育和遗传分析等工作。
3．半合成培养基:在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。
大多数微生物都能在此种培养基上生长，因此，应用广泛，如马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基，大多数霉菌都生长良好。
4．固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基，常用凝固剂有洋菜、明胶、硅胶，硅胶用于配制自养微生物的固体培养基；对于其他多数微生物来讲，洋菜最为合适，一般加入1.5～2.5%即可凝固成固体，如牛肉膏蛋白胨培养基等。
微生物学实验二 培养基配制、相关器皿的包扎及共56页
微生物学实验二 培养基配制、 相关器皿的包扎及
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
13、遵守纪律的风气的培养，只有领 导者本 身在这 方面以 身作则 才能收 到成效 。—— 马卡连 柯 14、劳动者的组织性、纪律性、坚毅 精神以 及同全 世界劳 动者的 团结一 致，是 取得最 后胜利 的保证 。—— 列宁 摘自名言网
15、机会是不守纪律的心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
培养基配方及配置
培养基配方及配置
一般来说，培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分，包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分，如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分，如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置：
1.基础培养基成分：
- 水：900ml
-蛋白胨：10g
-酵母提取物：5g
-NaCl：5g
2.添加剂：（可根据实验需求进行必要的添加）
- 抗生素（如氨苄青霉素）：100μg/ml
- 抗菌剂（如氯霉素）：25μg/ml
3.配制方法：
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中，并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中，加水至1000ml，并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2（一般使用缓冲液进行调节）。
-用自制滤纸过滤器滤过，将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂，将相应的药物加入培养基中，并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌，或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程，不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时，需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度，并注意配制和保管过程中的无菌操作，以确保培养基的质量和有效性。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
(整理)S2实验二培养基及其配制理论
实验二培养基及其配制（理论）一、培养基成分及作用培养基（culture medium）是植物组织培养的物质基础，也是植物组织培养能否获得成功的重要因素之一。
培养基成分对离体培养植物的生长发育起调控作用。
选择合适的培养基并掌握正确的制备方法是组织培养成功的前提。
（一）植物必需的营养元素植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：1、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；2、构成一些特殊的胜利活性物质，参与活跃的新陈代谢；3、这些元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等点化学方面的作用；4、在发育方面，特定的元素影响植物的形态发生和组织、器官建成。
Arnon和Stout（1939）提出的确定植物必需营养元素的3个标准：A、缺乏该元素，植物生育发生障碍，不能完成其生活史B、缺乏该元素，就表现为专一的病症，且这种缺素症可以用补充改元素来预防和恢复C、改元素在植物营养生理上表现直接的效果，而不是由于土壤的物理、化学、微生物条件的改进而产生的间接效果。
国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。
根据植物体内含量多少，可把这些元素分为：大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种。
微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下有的只含0.1mg/kg。
Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种。
（二）培养基营养成分及作用培养基是外植体生长的土壤，它所含有的不同营养元素直接影响着培养材料的生长发育。
培养基中的营养元素以有机物和无机物两类形式存在，绝大多数营养元素以无机物的形式存在。
按照国际植物生理协会的建议：所需浓度> 0.5mmol/L的元素为大量元素所需浓度< 0.5mmol/L的元素为微量元素1、大量元素N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置，又称生命元素。
实训二__MS培养基的配制与灭菌
实训二__MS培养基的配制与灭菌实训二MS培养基的配制与灭菌（3学时）一、目的要求通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。
二、仪器与用具1、仪器：酸度计或pH试纸、电磁搅拌器、电炉2、用具：高压灭菌锅、微量移液器、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶（三角瓶）、烧杯、标签3、试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1 N 、0.5N NaOH，0.1 N 、0.5N HCl三、方法步骤（一）MS固体培养基的配制1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。
2、取少量的蒸馏水（约为配制培养基量的2/3）加入烧杯中。
注意：配500ml培养基用1000ml烧杯。
3、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。
如配制1000ml培养基：需：MS大量元素母液100mlMS微量元素母液10mlMS铁盐母液10mlMS有机物母液10ml4、通过计算，用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。
5、加入蔗糖（30g/L），溶解。
6、定容：用容量瓶。
7、调pH值：一般pH=5.8。
用0.1 N 和0.5N 的NaOH和HCl 将pH调至所需的数值。
注意：①经高温高压灭菌后，培养基的pH值会下降0.2—0.8，故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。
②pH值的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pH大于6.0时，培养基将会变硬；低于5.0时，琼脂就不能很好地凝固。
③如果pH值与所需的数值相差很大，可先用0.5N的NaOH或HCl调节，至接近时，再用0.1N的酸、碱调节。
以免加入过量的水溶液，导致溶液体积增大，培养基不能很好地凝固（因加入的琼脂量一定）。
8、分装到大三角瓶中（500ml、1000ml）。
9、加琼脂（6-10g/L）。
常用6.6--7 g/L10、封口：用棉塞或锡箔纸、牛皮纸。
注明培养基名称、配制时间。
培养基及配制全解
（5）母液配制（以MS培养基为例）
无机大量 母液 激素母液
有机物母液
无机微量母液
铁盐母液
配制MS培养基时母液的计算
A 无机大量母液(扩大10倍配1L )
成分
硝酸钾 硝酸铵 硫酸镁 磷酸二氢钾 氯化钙
称量工具
托盘天平 百分电子天平
注意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中 有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解， 再进行混合，而且钙盐最后缓慢加入进去。
多数需过滤灭菌。
6.3 抗氧化物
1)常用抗氧化剂：半胱氨酸、VC 2)用量：50－200mg/L， 3)作用：防止氧化 4)注意：可用抗氧化剂洗 涤外植体伤口表面。
6.4 其它成分： AgNO3 ：
• 作用：吸附乙烯，促进茎芽分化，防玻璃 化苗、早衰、落叶；只能短期培养，
• 用量 1~10mg/L，需过滤灭菌
B 无机微量母液（扩大100倍配1000ml）
成分
硼酸，硫酸铜， 硫酸锰，硫酸锌， 氯化钴，钼酸钠， 碘化钾
称量工具
万分电子天平
C 铁盐（扩大100倍1000ml）
铁盐
硫酸亚铁， Na2-EDTA
注意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它 溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。
在装有800ml 蒸馏水的烧杯中加入2粒氢氧化钠。溶解后 加入3.73g EDTA-Na2，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢 慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解，冷却后定容至 1000ml，置于冰箱中备用。
使用效价： IAA<IBA<NAA<2,4-D
NAA、IBA →生根培养 2,4-D →愈伤组织诱导与增殖 （2）作用 诱导愈伤组织和根分化，促进细胞分裂 和伸长。 NAA和IBA常与细胞分裂素结合用于芽的增殖。 （3）浓度 0.05－5mg/L （4）配制 生长素可溶解在稀NaOH中或溶于乙醇。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验二培养基及其配制（理论）一、培养基成分及作用培养基（culture medium）是植物组织培养的物质基础，也是植物组织培养能否获得成功的重要因素之一。
培养基成分对离体培养植物的生长发育起调控作用。
选择合适的培养基并掌握正确的制备方法是组织培养成功的前提。
（一）植物必需的营养元素植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：1、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；2、构成一些特殊的胜利活性物质，参与活跃的新陈代谢；3、这些元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等点化学方面的作用；4、在发育方面，特定的元素影响植物的形态发生和组织、器官建成。
Arnon和Stout（1939）提出的确定植物必需营养元素的3个标准：A、缺乏该元素，植物生育发生障碍，不能完成其生活史B、缺乏该元素，就表现为专一的病症，且这种缺素症可以用补充改元素来预防和恢复C、改元素在植物营养生理上表现直接的效果，而不是由于土壤的物理、化学、微生物条件的改进而产生的间接效果。
国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。
根据植物体内含量多少，可把这些元素分为：大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种。
微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下有的只含0.1mg/kg。
Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种。
（二）培养基营养成分及作用培养基是外植体生长的土壤，它所含有的不同营养元素直接影响着培养材料的生长发育。
培养基中的营养元素以有机物和无机物两类形式存在，绝大多数营养元素以无机物的形式存在。
按照国际植物生理协会的建议：所需浓度> 0.5mmol/L的元素为大量元素所需浓度< 0.5mmol/L的元素为微量元素1、大量元素N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置，又称生命元素。
在培养基中主要以NO3—-N和NH4—-N两种形式存在。
P是磷脂主要成分。
培养基中常用KH2PO4NaH2PO4等。
K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。
培养基中常以KCl、KNO3等盐类提供。
Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；S是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。
它们常以MgSO4·7H2O提供，用量为1—3mg/L 较为适宜；Ca是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，Ca及钙调素在细胞信号转导中起重要作用。
常以CaCl·2H2O提供。
2、微量元素在微量元素中，铁的使用最大，铁是一些氧化酶的组成成分。
同时又是叶绿素形成的必要条件。
由于培养基的pH较高，所以培养中几乎都使用不易分解的乙二胺四乙酸铁这种鳌合物来防止铁的沉淀。
硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系；铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长；锰参与植物的光合、呼吸代谢；钼参与氮素的代谢；氯是光合作用水光解的活化剂。
微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节。
缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。
随病势发展，叶片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落叶。
严重缺铁时，新梢顶端枯死。
缺铜症状：新梢顶端叶片的叶尖失绿变黄，叶片出现褐色斑点至扩大变成深褐色，引起落叶。
枝顶端生长不良，其下部的芽开始生长，形成丛生的细枝。
缺锰典型症状：叶脉间失绿褪色，但叶脉仍保持绿色，脉间出现坏死斑，缺素症状由幼叶开始。
缺钼典型症状：叶较小，叶脉间失绿,有坏死斑点，且叶边缘焦枯，向内卷曲。
十字花科植物缺钼时叶片卷曲畸形，老叶变厚且枯焦缺硼典型症状：受精不良,籽粒减少，“花而不实”，“蕾而不花”；根尖、茎尖的生长点停止生长，而形成簇生状；常引起各种腐烂病。
3、碳源碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机酸，以糖类物质最重要。
一般来说，蔗糖是最好的糖源，它具有热易变的性质，经高压灭菌后，大部分分解为D-葡萄糖、D-果糖，仅剩下部分的蔗糖，这更利于吸收和利用。
蔗糖使用浓度一般在2%—5%。
此外，糖还可以提供能源和调节渗透压，调节培养基的渗透压一般在1.5—4.1 MPa。
4、维生素类这类化合物在植物细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，对生长，分化等有很好的促进作用。
主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素。
5、肌醇又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用，是细胞壁的构建材料。
肌醇参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活动，具有促进活性物质发挥作用的效果，在培养基中加入1.0mg/L的肌醇就足以影响V B1的效应。
使用浓度一般在50—100mg/L。
6、氨基酸氨基酸是蛋白质的组成成分，也是一种很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。
培养基中常用的是甘氨酸，还有其他氨基酸，用量一般在10—1000mg/L之间。
7、天然复合物为了促进某些愈伤组织和器官的生长，在培养基中还常加入多种化学成分不明的、复杂的天然营养混合物，如水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物等。
8、琼脂为使培养材料在培养基上固定和生长，要外加一些支持物，构成固体培养基。
琼脂是使用最普遍的凝固剂。
用量一般在6—10g/L之间，以颜色浅、透明度高好，洁净为上品。
除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结冷胶等。
9、活性炭培养基中加入活性炭主要是为了吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质。
加入适量的活性炭对抑制外植体褐变、防止玻璃苗的产生、促进培养物生长和分化、促进生根具有一定作用。
但活性炭也有副作用，它的吸附作用没有选择性，所以在吸附抑制物的同时，使一些营养成分也吸附了。
10、抗生素主要目的是防止外植体内生菌造成的污染。
11、生长素类主要生理作用是促进细胞伸长和分裂，还有促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实等作用。
在职物组织培养中，主要被用于诱导愈伤组织的形成、根的分化以及细胞的分裂和伸长。
生长素一般溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，以后者的溶解效果更好。
常用的生长素有IAA(吲哆乙酸)、NAA (奈乙酸)、2,4-D(二氯苯氧乙酸)和IBA(吲哆丁酸)等。
12、细胞分裂素类细胞分裂素影响细胞分裂、顶端优势的变化和茎芽的分化等。
主要作用是促进细胞分裂和分化，诱导胚状体和不芽的形成，延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成。
还用于离体成花的调控。
细胞分裂素一般溶于0.5—1.0mol/L的盐酸或稀薄的NaOH中。
常用的细胞分裂素有KT (激动素)、BA(6-卞基腺嘌呤)、2-ip(异戊烯氨基嘌呤)玉米素等。
13、赤霉素类和脱落酸在组织培养中不常使用。
赤霉素主要作用是加速细胞的伸长生长，也促进细胞的分裂。
主要是GA3。
脱落酸具有抑制细胞分裂和伸长、促进脱落和衰老、促进休眠和提高抗逆能力等作用。
二、培养基的分类与配制（一）培养基的种类根据培养基的形态不同可以分为固体培养基与液体培养基；根据培养过程不同可以分为初代培养基与继代培养基；根据其作用不同可以分为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；根据其营养水平不同则分为基本培养基和完全培养基。
（二）几种常见培养基的特点1、MS培养基特点是无机盐浓度高，具有高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐的用量很大，同时还含有一定数量的铵盐，营养丰富，不需要添加更多的有机附加物。
2、White培养基是1943年White设计的，1963年做了改良，特点是无机盐浓度较低。
使用广泛，在生根培养、胚胎培养中有良好的效果。
3、B5培养基是1968年由Gamborg等设计的，特点是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。
4、N6培养基是1974年由我国的朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计的，特点是KNO3和（NH4）SO4含量高，不含钼。
（三）培养基的配制配制培养基应做好几点工作：1、实验用具的准备。
包括配制过程中所需电炉、酸度计、高压灭菌锅等设备及其他玻璃器皿的清洗和准备；2、试剂、药品的准备。
3、根据培养基的配方、母液扩大倍数及需要配制的培养基体积计算所需各种母液及其他附加物的量。
具体操作如下：1、取规定数量的糖源和凝固剂置于烧杯或搪瓷锅内，加蒸馏水或去离子水至培养基最终体积的3/4，在恒温水浴中加热使之溶解，并不断搅拌，防止琼脂凝块儿。
配制液体培养基时因不含凝固剂，无须高温加热。
2、根据计算所需量依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质母液及其他特殊的附加物，搅拌均匀。
吸取各种母液的移液器应专用，以免产生交叉感染。
对高温高压条件下不稳定或容易分解的植物生长调节物质必须在培养基进行高温高压灭菌后，用过滤的方法加入。
3、加水定容至规定体积，搅拌均匀。
在标准温度下将培养基定容后进行称量，并以此质量为标准进行较高温度的培养基的定容。
4、调整培养基的pH值。
一般采用1mol/LNaOH与1mol/LHCl来调整其pH值。
5、分装。
已经配制好的培养基应尽快的分装，以防止含琼脂的培养基在较低温度下凝固。
分装时应注意到培养基占该容器的1/3—1/4为宜。
6、封口。
培养基分装后，应立刻用封口膜将容器口部封严。
封口膜应具有透光、透气性，但不通透尘埃、微生物等杂质。
（四）培养基的灭菌组织培养必须在无菌环境中进行，因此作为外植体生长的介质的培养基的灭菌操作非常重要。
培养基分装封口后立刻进行灭菌，至少在24h内完成灭菌程序。
一般采用的是高压蒸汽灭菌。
高压蒸汽灭菌的原理：通过加热，在密闭的高压锅内随着水蒸汽压力的不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在0.105MPa压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度乃热的芽孢。
一般情况下，灭菌在温度121℃，压力0.105MPa下，保持20—30min即可。
灭菌锅有很多种，实验室中手提式高压蒸汽灭菌锅是最常用的，但是在使用时要注意一下几点：1、锅中应放足量的水，以免造成空烧或干烧；2、装锅时不要过度倾斜，可保持内部有一定的空间，利于蒸汽流动；3、增压前高压锅内的空气必须排净，否则易影响灭菌效果；4、灭菌过程中，应尽量保持压力恒定，严格遵守灭菌时间；5、排气降压时应缓慢进行；6、只有待高压锅内压力表指针恢复到零后，才能开启压力锅；7、高压锅工作时，应有专人看守。
（五）培养基的保存灭菌后的培养基经冷却和凝固后即可使用，若要检验灭菌效果，可将培养基置于培养室中3天，若没有污染现象，说明灭菌可靠，可以使用。
培养基最好保存在低温条件下，但在常温下保存时要进行防尘和避光处理，保存时间不可过长。