2015版《中国药典》无菌、洁净室测定
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19
（1）纠正了我国在微生物检验系统中长期存在的对微生物 分类培养的概念。从按营养和培养条件；微生物的需气、 厌气分类；广谱的培养条件出发，更严谨、正确地提高污 染微生物的检出可能。
（2）与先进国家药典所用培养基一致，为实现结果互认打 下重要的基础。
20
“硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用 于需氧菌的培养；” “胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。”
13
采用全封闭式 的集菌过滤设 备及与之匹配 的一次性无菌 耗材
无菌操 作隔离 系统
或
无菌操 作洁净 区域
有效的监控、监测
无菌检 查条件 环境
采取降低污染的相应措施以及 进行必要的动态环境监控，保 证无菌检验结果的准确性。
14
15
16
所有有菌操作均不得在供试品检验用的实验 室或隔离系统中进行。 阳性对照试验、培养基适用性试验、验证试 验、以及可疑检出菌的转种再培养、分离纯化等 操作，均应在专门的阳性实验室内的100级超净 台、II级生物安全柜内进行。
7
定义
用于检查要求无菌的药品、 生物制品、医疗器具、原 料、辅料及其他要求无菌 的 品种是否感染菌的方法。
性质
是有关药品安全性的一种 定性试验，但过程控制的 一些因素均能直接影响无 菌检查的结果。
影响因素
环境、人员、用品无菌性、 检验数量、检验量、培养 基的适用性、方法的验证、 培养条件、结果判断、重 试规定等。
6
逐版发展提高的主要部分：
实验环境、设施的无菌保证 培养基品种及适用性检查要求 检验数量、检验量的增加 检验方法和仪器发展 验证试验要求 培养时间保证受损微生物的生长 结果判断规定 取消复试、及重试的规定
发展宗旨：加强检验的过程控制、提高方法的检出率、 保证检验结果的可靠性。
均培养14天， 转种后细菌培养2天、真菌培养3 天
培养基灵敏度 检查与方法验 证用菌株 检验方法
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色 念珠菌、黑曲霉 大肠埃希菌
只要供试品性状允许，应采用 薄膜过滤法 性状允许的样品采用薄 膜过滤，利于抗菌影响 去除 采用薄膜过滤，利于抗 菌影响去除
2015版
1.接种金黄色葡萄球菌、铜绿 假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜 培养物 ----至胰酪大豆胨液体培养基 中或 胰酪大豆胨琼脂培养基上 2.接种生孢梭菌的新鲜培养物 ----至.硫乙醇酸盐流体培养基 中 3.接种白色念珠菌的新鲜培养 物 ----至沙氏葡萄糖培养基中或 沙氏葡萄糖琼脂培养基上 4.接种黑曲霉的新鲜培养物 ----至沙氏葡萄糖琼脂斜面培 养基上
25
1.将药典2010年版三部无菌检查法和二部的整 合修订情况说明 2.2015版无菌检查方法文字具体增、修订情况 说明
26
1.焦点 2010年版三部无菌检查法中规定取与二部同样数量的样 品检验，但样品接种硫乙醇酸盐流体培养基必须分成双份，分 别置30~35℃、20~25℃两个温度下培养。而且阳性对照品 用量不增加，是在培养14天后在一份硫乙醇酸盐流体培养基 总加入阳性对照菌做阳性对照试验。 2.国际上，包括美国FDA和欧盟均早已接受无菌检查法适用于 生物技术产品及生物制品，USP/EP/BP/JP及ICH的无菌检查 法中均没有对生物制品做出特殊规定。
方法适用性试验中 的修订
——两种培养基接 入试验菌的调整
22
2010年版
2015年版
1.硫乙醇酸盐流体培养基 ——金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌 （4种菌）→（9支） 2.改良马丁培养基 ——白色念珠菌、黑曲霉 （2种菌）→（5支）
1.硫乙醇酸盐流体培养基 ——金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、生孢梭菌 （3种菌）→（7支） 2.胰酪大豆胨液体培养基 ——枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、 黑曲霉 （3种菌）→（7支）
4
1925年 1932年 1936年 1950年
直接接种法首先使用在英国。 英国药典推荐使用直接接种法无菌测试。 美国药典第十一章首先引用单个培养基的直接接种法。 美国药典第十六章推荐使用FTG和SB两种培养基分别培养需、厌 气菌和真菌。 1957年 美国FDA和MILLIPORE公司介绍膜过滤法用于抗生素无菌测试。 1963年 英国药典63版收载薄膜过滤法无菌测试。 1965年 美国药典引用薄膜过滤法用于非抑菌性药品的无菌测试。 1971年 欧洲药典第二版公布参照薄膜过滤法无菌测试。 1978年 欧洲药典修订版发行公布推荐使用薄膜过滤法无菌测试。 1988年 美国FDA规定假如第一次无菌检查不符合规定的样品不再复试， 这一批次的药品应报废。排除了药品无菌阳性后再测试的机会。 1998年 英国药典1998版规定无菌检查以一次检出为准，取消复试。 2000年 美国药典24版规定无菌测试以一次检出为准，取消复试。 2005年 通过ICH/PCG的协调各国药典已于2005年完成统一，保持一致。
——即某种污染了需氧菌的供试品，无论被接种在硫乙醇酸 盐流体培养基中还是被接种在胰酪大豆胨液体培养基中均 可被检出。
21
培养基修订 ——由TSB替代MM
——由TSA替代营养 肉汤
——由沙氏葡萄糖琼 脂代替MM琼脂
培养基灵敏度检查 的修订
菌液制备用培养基 的修订 ——各菌接种的培 养基调整
——两种培养基供 试用菌的调整
1
2
无菌检查的起源 无菌检查的发展历史 无菌检查法的发展宗旨
3
与静脉输液的起源和应用有关
——1665年，欧洲勃兰登堡候国御医约翰▪西吉斯 蒙德▪埃尔斯霍尔茨发表了《新灌药法及其方式方 法》 ——1831年，西欧霍乱肆虐，为了拯救在死亡线 上挣扎的病人，苏格兰医生赖特大胆启用静脉输 液疗法，他将大量煮沸过的食盐水静脉输注给霍 乱病人使大部分病人得救。 ——赖特在实践中观察到了输液产生的“注射热” ——随着显微镜的发明和微生物的发现，人们开始 了输液无菌检查的研究。
23
2010版
2015版
硫乙醇酸盐流体培养基接入 小于100cfu的 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 4种菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 改良马丁培养基接入小于 100cfu的 白色念珠 2种菌 黑曲霉
硫乙醇酸盐流体培养基接入 小于100cfu的 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 3种菌 生孢梭菌
胰酪大豆胨液体培养基接入 小于100cfu的 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 3种菌 黑曲霉
5
1953版
1963版 1977版 1985版 1990版 1995版 2000版
2005版
2010版
实验环境仅要求为无菌操作箱以防尘；用一种培养基的直接接种 法，取样量2支/瓶。 仅收载直接接种法；用三种培养基分别培养细菌和霉菌。 开始收载简单装置的薄膜过滤法限于抗生素样品。用两种培养基 指明分别培养细菌和霉菌。 要求实验环境为紫外线灭菌的无菌室；薄膜过滤法限于抗生素 样品；开始收载需、厌气菌培养基（FTG）及霉菌培养基。 与85年版相同，无发展。 增加对培养基进行灵敏度检查的要求。 规定实验环境为100级洁净度。要求全过程防止微生物污染，检 验量从2支/瓶增加为6~11支/瓶；增加50ml以上大容量液体也 应采用薄膜过滤法检查。首次收载全封闭无菌测试技术。 实验环境增收隔离系统，强调环境洁净度的验证，增加培养基 适用性检查，增加稀释液冲洗液品种；规定优先采用薄膜过滤法； 规定检验方法的验证试验；延长培养时间为14天、取消复试。 在2005版基础上强调检验的过程控制，保证检验结果的准确性。
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃；20~25℃ 改良马丁培养基23~28℃
经培训和认可
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃ 胰酪大豆胨液体培养基 20~25℃
均培养不少于14天 转种后培养均不少于4天
经培训和认可
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃ 胰酪大豆胨液体培养基 20~25℃
均培养不少于14天 转种后培养均不少于7天
局限性
微生物污染可以发生在生 产、储存、运输、货架、 使用等环节 任何时段， 产品中微生物的污染可以 是不均匀的。
8
比较项目
实验环境要求
2010
总体1000级、局部100级
USP35
应在无菌条件下进行
EP7.0
应在无菌条件下进行
人员要求
培养基、培养 条件与时间
具备微生物专业知识，并经过 无菌技术培训
一次检出结果为准（设备及环境不符合要求、实验过程有可能引起 污染的因素、阴性对照有菌生长、分离微生物可明确归因于实验过 程中所用的材料或技术错误造成的，单倍量重试。）
9
培养基体系的差异是导致中国药典无菌检查与国外药典 无菌检查的系统性差异，从而带来结果之间的不确定性 及不可比性。这是我国药典无菌检查法必须关注的问题！
17
2010年版 1.硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃；20~25℃ （三部） 2.改良马丁培养基 置23~28℃培养 3.选择性培养基 4.0.5%葡萄糖肉汤培养基 5.营养琼脂培养基 6.营养肉汤培养 7.改良马丁琼脂培养基
2015年版 1.硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃；20~25℃ 2.胰酪大豆胨液体培养基 （TSB） 置20~25℃培养 3.中和或灭菌用培养基 4.0.5%葡萄糖肉汤培养基 5.胰酪大豆胨琼脂培养基 （TSA） 6.沙氏葡萄糖液体培养基 7.沙氏葡萄糖琼脂培养基
稀释剂与薄膜 过滤冲洗液
1.0.1%蛋白胨水溶液 2.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 3.其他经验证过的溶液
1.0.1%蛋白胨水溶液 2.A+1ml吐温80 3.动物组织消化液+牛肉 浸膏+吐温80
1.0.1%蛋白胨水溶液 2.A+0.1%（聚乙氧基乙 醇、0.1%吐温-80） 3.十四烷酸异丙酯
结果判断与复 试规定
药典 分类依据 质控分类
检验体系 评价
USP/EP/JP 按营养和培养条件分 需气、厌气菌
与广谱的培养条件对应 严谨、正确
中国药典2010及之前版本 按微生物类别分 细菌、真菌
人为地选择培养 易误导结果判断或造成漏检
பைடு நூலகம்
10
1.实验环境的重大修订
2.培养系统的重大修订
3.对2010年版三部无菌检查法的整合、修订
18
（1）修订原因：在我国长期的微生物分类培养观念下，认为改良马丁 培养基更适合于真菌检查。但无菌检查是一个定性试验，根据检查方 法，要求所用培养基具有广谱的促菌生长能力，而不是、也不可能是 一开始就对可能污染的微生物进行分类培养。为此，各国药典无菌检 查用培养基都有一个不断改进至基本确定的发展过程。 （2）国外药典中的情况 ——1950年美国药典第十六章已确定使用硫乙醇酸盐流体培养基 （FTG）和胰酪胨大豆液体培养基（TSB） ——现行USP、BP、EP、JP及ICH均规定使用硫乙醇酸盐流体培养基 （FTG）和胰酪胨大豆液体培养基（TSB） （3）确立科研课题进行对比试验 通过科研课题的建立及大量实验，以国际品牌培养基为对照，考察 了我国药典微生物限度检查法、无菌检查法中国产培养基与 USP/BP/JP中规定的培养基的促菌生长能力的比较。通过大量实验数 据和统计分析，为2015版无菌检查法培养基的修订提供依据。
3.以国际发展趋势为主导，遵照2015年版药典编制大纲要求， 最终以二部为基础，在检验数量、检验量、阳性对照样品量、 阳性对照试验方法、培养温度等方面互相兼顾，作原则性要求 而不作具体细则规定。致力于今后逐步统一完善。
11
2010年版
无菌检查： 应在10000级背景下的100 级单向流空气区域内或隔离 系统进行
2015年版
无菌检查： 应在无菌条件下进行，试验 环境必须达到无菌检查的要 求
12
（1）2010版GMP中附录一《无菌药品》和附录三 《生物制品》中均规定，非最终灭菌产品各工序 关键操作环境应为B级背景下的A级。 （2）无菌检查的洁净环境应与生产关键区的洁净 环境一致！ （3）与USP/EP/BP的无菌检查法环境要求一致， 仅作原则性要求，由相关指导原则给予推荐性标 准指导。
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2010 版
1.接种金黄色葡萄球菌、铜绿 假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜 培养物 ----至营养肉汤培养基或营养 肉 汤琼脂培养基上 2.接种生孢梭菌的新鲜培养物 ----至硫乙醇酸盐流体培养基 中 3.接种白色念珠菌的新鲜培养 物 ----至改良马丁培养基中或改 良马丁琼脂培养基上 4.接种黑曲霉的新鲜培养物 ----至改良马丁琼脂斜面培养 基上
（1）纠正了我国在微生物检验系统中长期存在的对微生物 分类培养的概念。从按营养和培养条件；微生物的需气、 厌气分类；广谱的培养条件出发，更严谨、正确地提高污 染微生物的检出可能。
（2）与先进国家药典所用培养基一致，为实现结果互认打 下重要的基础。
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“硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用 于需氧菌的培养；” “胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。”
13
采用全封闭式 的集菌过滤设 备及与之匹配 的一次性无菌 耗材
无菌操 作隔离 系统
或
无菌操 作洁净 区域
有效的监控、监测
无菌检 查条件 环境
采取降低污染的相应措施以及 进行必要的动态环境监控，保 证无菌检验结果的准确性。
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所有有菌操作均不得在供试品检验用的实验 室或隔离系统中进行。 阳性对照试验、培养基适用性试验、验证试 验、以及可疑检出菌的转种再培养、分离纯化等 操作，均应在专门的阳性实验室内的100级超净 台、II级生物安全柜内进行。
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定义
用于检查要求无菌的药品、 生物制品、医疗器具、原 料、辅料及其他要求无菌 的 品种是否感染菌的方法。
性质
是有关药品安全性的一种 定性试验，但过程控制的 一些因素均能直接影响无 菌检查的结果。
影响因素
环境、人员、用品无菌性、 检验数量、检验量、培养 基的适用性、方法的验证、 培养条件、结果判断、重 试规定等。
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逐版发展提高的主要部分：
实验环境、设施的无菌保证 培养基品种及适用性检查要求 检验数量、检验量的增加 检验方法和仪器发展 验证试验要求 培养时间保证受损微生物的生长 结果判断规定 取消复试、及重试的规定
发展宗旨：加强检验的过程控制、提高方法的检出率、 保证检验结果的可靠性。
均培养14天， 转种后细菌培养2天、真菌培养3 天
培养基灵敏度 检查与方法验 证用菌株 检验方法
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色 念珠菌、黑曲霉 大肠埃希菌
只要供试品性状允许，应采用 薄膜过滤法 性状允许的样品采用薄 膜过滤，利于抗菌影响 去除 采用薄膜过滤，利于抗 菌影响去除
2015版
1.接种金黄色葡萄球菌、铜绿 假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜 培养物 ----至胰酪大豆胨液体培养基 中或 胰酪大豆胨琼脂培养基上 2.接种生孢梭菌的新鲜培养物 ----至.硫乙醇酸盐流体培养基 中 3.接种白色念珠菌的新鲜培养 物 ----至沙氏葡萄糖培养基中或 沙氏葡萄糖琼脂培养基上 4.接种黑曲霉的新鲜培养物 ----至沙氏葡萄糖琼脂斜面培 养基上
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1.将药典2010年版三部无菌检查法和二部的整 合修订情况说明 2.2015版无菌检查方法文字具体增、修订情况 说明
26
1.焦点 2010年版三部无菌检查法中规定取与二部同样数量的样 品检验，但样品接种硫乙醇酸盐流体培养基必须分成双份，分 别置30~35℃、20~25℃两个温度下培养。而且阳性对照品 用量不增加，是在培养14天后在一份硫乙醇酸盐流体培养基 总加入阳性对照菌做阳性对照试验。 2.国际上，包括美国FDA和欧盟均早已接受无菌检查法适用于 生物技术产品及生物制品，USP/EP/BP/JP及ICH的无菌检查 法中均没有对生物制品做出特殊规定。
方法适用性试验中 的修订
——两种培养基接 入试验菌的调整
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2010年版
2015年版
1.硫乙醇酸盐流体培养基 ——金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌 （4种菌）→（9支） 2.改良马丁培养基 ——白色念珠菌、黑曲霉 （2种菌）→（5支）
1.硫乙醇酸盐流体培养基 ——金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、生孢梭菌 （3种菌）→（7支） 2.胰酪大豆胨液体培养基 ——枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、 黑曲霉 （3种菌）→（7支）
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1925年 1932年 1936年 1950年
直接接种法首先使用在英国。 英国药典推荐使用直接接种法无菌测试。 美国药典第十一章首先引用单个培养基的直接接种法。 美国药典第十六章推荐使用FTG和SB两种培养基分别培养需、厌 气菌和真菌。 1957年 美国FDA和MILLIPORE公司介绍膜过滤法用于抗生素无菌测试。 1963年 英国药典63版收载薄膜过滤法无菌测试。 1965年 美国药典引用薄膜过滤法用于非抑菌性药品的无菌测试。 1971年 欧洲药典第二版公布参照薄膜过滤法无菌测试。 1978年 欧洲药典修订版发行公布推荐使用薄膜过滤法无菌测试。 1988年 美国FDA规定假如第一次无菌检查不符合规定的样品不再复试， 这一批次的药品应报废。排除了药品无菌阳性后再测试的机会。 1998年 英国药典1998版规定无菌检查以一次检出为准，取消复试。 2000年 美国药典24版规定无菌测试以一次检出为准，取消复试。 2005年 通过ICH/PCG的协调各国药典已于2005年完成统一，保持一致。
——即某种污染了需氧菌的供试品，无论被接种在硫乙醇酸 盐流体培养基中还是被接种在胰酪大豆胨液体培养基中均 可被检出。
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培养基修订 ——由TSB替代MM
——由TSA替代营养 肉汤
——由沙氏葡萄糖琼 脂代替MM琼脂
培养基灵敏度检查 的修订
菌液制备用培养基 的修订 ——各菌接种的培 养基调整
——两种培养基供 试用菌的调整
1
2
无菌检查的起源 无菌检查的发展历史 无菌检查法的发展宗旨
3
与静脉输液的起源和应用有关
——1665年，欧洲勃兰登堡候国御医约翰▪西吉斯 蒙德▪埃尔斯霍尔茨发表了《新灌药法及其方式方 法》 ——1831年，西欧霍乱肆虐，为了拯救在死亡线 上挣扎的病人，苏格兰医生赖特大胆启用静脉输 液疗法，他将大量煮沸过的食盐水静脉输注给霍 乱病人使大部分病人得救。 ——赖特在实践中观察到了输液产生的“注射热” ——随着显微镜的发明和微生物的发现，人们开始 了输液无菌检查的研究。
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2010版
2015版
硫乙醇酸盐流体培养基接入 小于100cfu的 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 4种菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 改良马丁培养基接入小于 100cfu的 白色念珠 2种菌 黑曲霉
硫乙醇酸盐流体培养基接入 小于100cfu的 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 3种菌 生孢梭菌
胰酪大豆胨液体培养基接入 小于100cfu的 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 3种菌 黑曲霉
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1953版
1963版 1977版 1985版 1990版 1995版 2000版
2005版
2010版
实验环境仅要求为无菌操作箱以防尘；用一种培养基的直接接种 法，取样量2支/瓶。 仅收载直接接种法；用三种培养基分别培养细菌和霉菌。 开始收载简单装置的薄膜过滤法限于抗生素样品。用两种培养基 指明分别培养细菌和霉菌。 要求实验环境为紫外线灭菌的无菌室；薄膜过滤法限于抗生素 样品；开始收载需、厌气菌培养基（FTG）及霉菌培养基。 与85年版相同，无发展。 增加对培养基进行灵敏度检查的要求。 规定实验环境为100级洁净度。要求全过程防止微生物污染，检 验量从2支/瓶增加为6~11支/瓶；增加50ml以上大容量液体也 应采用薄膜过滤法检查。首次收载全封闭无菌测试技术。 实验环境增收隔离系统，强调环境洁净度的验证，增加培养基 适用性检查，增加稀释液冲洗液品种；规定优先采用薄膜过滤法； 规定检验方法的验证试验；延长培养时间为14天、取消复试。 在2005版基础上强调检验的过程控制，保证检验结果的准确性。
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃；20~25℃ 改良马丁培养基23~28℃
经培训和认可
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃ 胰酪大豆胨液体培养基 20~25℃
均培养不少于14天 转种后培养均不少于4天
经培训和认可
硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃ 胰酪大豆胨液体培养基 20~25℃
均培养不少于14天 转种后培养均不少于7天
局限性
微生物污染可以发生在生 产、储存、运输、货架、 使用等环节 任何时段， 产品中微生物的污染可以 是不均匀的。
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比较项目
实验环境要求
2010
总体1000级、局部100级
USP35
应在无菌条件下进行
EP7.0
应在无菌条件下进行
人员要求
培养基、培养 条件与时间
具备微生物专业知识，并经过 无菌技术培训
一次检出结果为准（设备及环境不符合要求、实验过程有可能引起 污染的因素、阴性对照有菌生长、分离微生物可明确归因于实验过 程中所用的材料或技术错误造成的，单倍量重试。）
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培养基体系的差异是导致中国药典无菌检查与国外药典 无菌检查的系统性差异，从而带来结果之间的不确定性 及不可比性。这是我国药典无菌检查法必须关注的问题！
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2010年版 1.硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃；20~25℃ （三部） 2.改良马丁培养基 置23~28℃培养 3.选择性培养基 4.0.5%葡萄糖肉汤培养基 5.营养琼脂培养基 6.营养肉汤培养 7.改良马丁琼脂培养基
2015年版 1.硫乙醇酸盐流体培养基 30~35℃；20~25℃ 2.胰酪大豆胨液体培养基 （TSB） 置20~25℃培养 3.中和或灭菌用培养基 4.0.5%葡萄糖肉汤培养基 5.胰酪大豆胨琼脂培养基 （TSA） 6.沙氏葡萄糖液体培养基 7.沙氏葡萄糖琼脂培养基
稀释剂与薄膜 过滤冲洗液
1.0.1%蛋白胨水溶液 2.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 3.其他经验证过的溶液
1.0.1%蛋白胨水溶液 2.A+1ml吐温80 3.动物组织消化液+牛肉 浸膏+吐温80
1.0.1%蛋白胨水溶液 2.A+0.1%（聚乙氧基乙 醇、0.1%吐温-80） 3.十四烷酸异丙酯
结果判断与复 试规定
药典 分类依据 质控分类
检验体系 评价
USP/EP/JP 按营养和培养条件分 需气、厌气菌
与广谱的培养条件对应 严谨、正确
中国药典2010及之前版本 按微生物类别分 细菌、真菌
人为地选择培养 易误导结果判断或造成漏检
பைடு நூலகம்
10
1.实验环境的重大修订
2.培养系统的重大修订
3.对2010年版三部无菌检查法的整合、修订
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（1）修订原因：在我国长期的微生物分类培养观念下，认为改良马丁 培养基更适合于真菌检查。但无菌检查是一个定性试验，根据检查方 法，要求所用培养基具有广谱的促菌生长能力，而不是、也不可能是 一开始就对可能污染的微生物进行分类培养。为此，各国药典无菌检 查用培养基都有一个不断改进至基本确定的发展过程。 （2）国外药典中的情况 ——1950年美国药典第十六章已确定使用硫乙醇酸盐流体培养基 （FTG）和胰酪胨大豆液体培养基（TSB） ——现行USP、BP、EP、JP及ICH均规定使用硫乙醇酸盐流体培养基 （FTG）和胰酪胨大豆液体培养基（TSB） （3）确立科研课题进行对比试验 通过科研课题的建立及大量实验，以国际品牌培养基为对照，考察 了我国药典微生物限度检查法、无菌检查法中国产培养基与 USP/BP/JP中规定的培养基的促菌生长能力的比较。通过大量实验数 据和统计分析，为2015版无菌检查法培养基的修订提供依据。
3.以国际发展趋势为主导，遵照2015年版药典编制大纲要求， 最终以二部为基础，在检验数量、检验量、阳性对照样品量、 阳性对照试验方法、培养温度等方面互相兼顾，作原则性要求 而不作具体细则规定。致力于今后逐步统一完善。
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2010年版
无菌检查： 应在10000级背景下的100 级单向流空气区域内或隔离 系统进行
2015年版
无菌检查： 应在无菌条件下进行，试验 环境必须达到无菌检查的要 求
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（1）2010版GMP中附录一《无菌药品》和附录三 《生物制品》中均规定，非最终灭菌产品各工序 关键操作环境应为B级背景下的A级。 （2）无菌检查的洁净环境应与生产关键区的洁净 环境一致！ （3）与USP/EP/BP的无菌检查法环境要求一致， 仅作原则性要求，由相关指导原则给予推荐性标 准指导。
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2010 版
1.接种金黄色葡萄球菌、铜绿 假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜 培养物 ----至营养肉汤培养基或营养 肉 汤琼脂培养基上 2.接种生孢梭菌的新鲜培养物 ----至硫乙醇酸盐流体培养基 中 3.接种白色念珠菌的新鲜培养 物 ----至改良马丁培养基中或改 良马丁琼脂培养基上 4.接种黑曲霉的新鲜培养物 ----至改良马丁琼脂斜面培养 基上