大承气汤煎煮过程去厚朴、枳实药渣与否其汤剂中蒽醌类成分含量的研究

大承气汤煎煮过程去厚朴、枳实药渣与否其汤剂中蒽醌类成分含量的

研究

目的：《伤寒论》中大承气汤的煎煮古法“以水一斗，先煮二物（厚朴、枳实），取五升，去滓，纳大黄，更煮取二升，去滓，纳芒硝，更上微火一两沸”，其中厚朴、枳实先煎后需去渣，该文旨在研究蒽醌类成分的含量，以考察去厚朴、枳实二物药渣的科学性。方法：采用传统煎煮方法煎煮大承气汤，A汤剂（原法）去厚朴、枳实药渣，B汤剂不去厚朴、枳实药渣，采用HPLC测定2份汤剂及药渣中大黄结合蒽醌、游离蒽醌的含量。结果：A汤剂中结合蒽醌、游离蒽醌均较B汤剂含量高，A药渣总蒽醌含量低于B药渣。结论：大承气汤古法煎煮方式去厚朴、枳实药渣的科学性，就在于提高了有效成分的溶出率，为其药效物质基础提供了理论依据。

标签：大承气汤；药渣；结合蒽醌；游离蒽醌；总蒽醌；含量测定

大承气汤出自《伤寒论》，由大黄、厚朴、枳实、芒硝组成，具有峻下热结的功能[1]，为泻法的代表方剂之一[2]。大承气汤煎煮古法为“以水一斗，先煮二物，取五升，去滓，纳大黄，更煮取二升，去滓，纳芒硝，更上微火一两沸”，其中需滤去厚朴、枳实药渣后再加大黄。大黄作为中药中的重要泻下药，作用确切，蒽醌类衍生物是大黄的重要药效成分，是大黄及其制剂质量监控的重要指标成分[3]。课题组前期对“大黄后下”的科学性进行了研究[4]，本文以大黄结合蒽醌、游离蒽醌含量为指标，探讨去厚朴、枳实二物药渣科学内涵的化学机制。

1材料

Waters高效液相色谱仪（Waters 2695分离单元，Waters 2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站）；Millipore-Q纯水器（美国Millipore公司）；KDM 型2 000 mL调温电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）；HH-4型数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）。芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚对照品均购自中国食品药品检定研究院；大黄、厚朴、枳实、芒硝饮片购于北京市双桥燕京饮片厂，经江西中医学院付晓梅教授鉴定；甲醇为色谱纯，氯仿、硫酸、磷酸为分析纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1大承气汤的制备方法

传统煎煮方式（A汤剂）：称取厚朴饮片40.5 g，枳实饮片40.5 g，加8倍量水，称重，浸泡30 min，煮沸后用文火继续煎30 min，补重，去渣，加入大黄54.0 g，再称重，文火继续煎煮20 min，补重，去渣，纳芒硝20.3 g，微沸即可。冷却，得到A汤剂970 mL（大黄药渣烘干，称重，粉碎，过五号筛，得A药渣41.5 g）。

不去厚朴、枳实药渣（B汤剂）：称取厚朴饮片40.5 g，枳实饮片40.5 g，加8倍量水，称重，浸泡30 min，煮沸后用文火继续煎30 min，加入大黄54.0 g，文火继续煎煮20 min，补重，去渣，纳芒硝20.3 g，微沸即可。冷却，得到B汤剂990 mL（大黄、厚朴、枳实药渣烘干，称重，粉碎，过5号筛，得B药渣117 g）。

2.2供试品溶液的制备方法

2.2.1大承气汤供试品溶液的制备游离蒽醌供试品溶液的制备：精密量取大承气汤10 mL于圆底烧瓶中，加入氯仿10 mL，加热回流1 h，冷却，移至分液漏斗中分取氯仿层，水层用氯仿提取3次，每次约10 mL，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

结合蒽醌供试品溶液的制备：精密量取大承气汤10 mL于圆底烧瓶中，加入2.5 mol·L-1的硫酸溶液10 mL，氯仿10 mL，加热回流1 h，冷却，移至分液漏斗中分取氯仿层，酸水层用氯仿提取3次，每次约10 mL，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得总蒽醌供试品溶液，结合蒽醌的含量=总蒽醌的含量-游离蒽醌的含量。

2.2.2药渣供试品溶液的制备游离蒽醌供试品溶液的制备：精密称取A药渣0.5 g，B药渣1 g，至具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，加热回流1 h，冷却，过滤，取续滤液5 mL，置烧瓶中挥去溶剂，加水10 mL，超声2 min，加三氯甲烷10 mL，加热回流1 h，至分液漏斗中，三氯甲烷萃取3次，每次10 mL，取有机相，蒸干，加甲醇，定容至10 mL量瓶，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

结合蒽醌供试品溶液的制备：精密称取A药渣0.5 g，B药渣1 g，至具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，加热回流1 h，冷却，过滤，取续滤液5 mL，置烧瓶中挥去溶剂，加8%盐酸10 mL，超声2 min，加三氯甲烷10 mL，加热回流1 h，至分液漏斗中，三氯甲烷萃取3次，每次10 mL，取有机相，蒸干，加甲醇，定容至10 mL量瓶，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得总蒽醌供试品溶液，结合蒽醌的含量=总蒽醌的含量-游离蒽醌的含量。

2.3色谱条件

Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温25 ℃；流速1 mL·min-1；检测波长294 nm；以甲醇（A）- 0.1%磷酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱，0～15 min，67%A，15～33 min，67%～75%A，33～47 min，75%～90%A，47～55 min，90%A，进样体积20 μL。对照品、供试品色谱图见图1。

2.4对照品溶液的配制

精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，加甲醇分别制成每1 mL含芦荟大黄素0.088 mg，大黄酸0.081 2 mg，大黄素0.084 4 mg，大黄酚0.080 4 mg，大黄素甲醚0.048 4 mg的对照品溶液。分别精密吸取上述芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚对照品溶液各1 mL，置10 mL量瓶中，摇匀即得大黄蒽醌类成分的混合对照品溶液（芦荟大黄素0.008 80 g·L-1，大黄酸0.008 12 g·L-1，大黄素0.008 44 g·L-1，大黄酚0.008 04 g·L-1，大黄素甲醚0.004 84 g·L-1）。2.5线性关系考察

精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，加甲醇分别制成每1 mL含芦荟大黄素0.204 4 mg，大黄酸0.193 3 mg，大黄素0.184 5 mg，大黄酚0.329 8 mg，大黄素甲醚0.143 2 mg的对照品溶液。分别精密吸取上述芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚对照品溶液各2 mL，摇匀即得大黄蒽醌类成分的混合对照品溶液（芦荟大黄素0.040 88 g·L-1，大黄酸0.038 66 g·L-1，大黄素0.036 9 g·L-1，大黄酚0.065 96 g·L-1，大黄素甲醚0.028 64 g·L-1）。

精密吸取上述混合对照品溶液，进样1，5，10，20，30，40 μL，以峰面积（Y）对对照品质量（X）进行线性回归处理，结果见表1。

2.6精密度试验

精密吸取2.4项下混合对照品溶液20 μL，连续进样6次，测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚的峰面积，各峰面积的RSD分别为0.93%，1.2%，0.77%，1.4%，1.9%，表明仪器精密度良好。

2.7稳定性试验

取同一份大承气汤供试品溶液于0，2，4，8，12，24 h分别进样20 μL，测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚的峰面积，各峰面积的RSD分别为1.3%，1.8%，1.5%，1.7%，1.9%，表明供试品溶液在24 h稳定。

2.8重复性试验

取同一批大黄、厚朴、枳实、芒硝饮片各5份，按照大承气汤供试品溶液的制备方法平行制备供试品溶液，测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚的峰面积，各峰面积的RSD分别为1.4%，1.9%，1.4%，2.0%，2.1%，表明方法重复性良好。

2.9加样回收率试验

分别精密量取A汤剂供试品溶液各6份，每份5 mL，精密量取2.4项下芦荟大黄素对照品母液1 mL，大黄酸对照品母液3 mL，大黄素对照品母液1 mL，大黄酚对照品母液0.8 mL，大黄素甲醚对照品母液0.5 mL，摇匀，分别加入6