293细胞

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293细胞比较容易转染,是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。293细胞的一个衍生株:293T/17的转染效率更高,成为广大研究者研究基因功能的一个强大工具。293细胞的缺陷是生长过程中贴壁强度比较小。所以在实验过程中容易流失,从而影响实验结果。如果一个实验室新得到的293细胞是邮寄得到的并且细胞在培养瓶中,就需要让细胞沉降几天时间,因为大量细胞会漂浮在培养液里。

293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞,表达转染的腺病毒5的基因。

293细胞的缺陷是生长过程中贴壁强度比较小。所以在实验过程中容易流失,从而影响实验结果。如果一个实验室新得到的293细胞是邮寄得到的并且细胞在培养瓶中,就需要让细胞沉降几天时间,因为大量细胞会漂浮在培养液里。

来源:人体肾脏形态:上皮细胞生长特性:贴壁注释:该细胞含腺病毒5 DNA 。

培养液:MEM(含 2 mM L-谷氨酰胺和Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠),10% 马血清(热灭活)。

传代:吸去培养液。用0.25% (w/) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清会抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培养箱内约5分钟,直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液,用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。(以1:2到1:4为宜,传代期间培养液2-3天更换1次)

冻存:95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

293A比较有意思了,是293中后来又建的细胞亚株,这个A是adhere的意思,就是说293倾向于形成单层细胞(monolayer),它比293好的地方是在做计算病毒数量的空斑试验(plaque assay)293A是均匀的一层,没有细胞重叠和细胞空隙(hole),就这个意思,这个A 所对的是293S(suspension).

293T细胞表达E1A蛋白,S40大T抗原,含有S40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。

293FT细胞能制造高滴度的慢病毒。293A细胞来源于人肾纤维母细胞,组成性表达E1A 和E1B 蛋白。

HEK293是人胚肾细胞转化5型腺病毒DNA得到的细胞株,293A细胞是293来源的细胞,含有腺病毒E1早期基因,而我们使用的腺病毒载体为了提供克隆的空间,即装载外源基因空间,缺失了E1的早期区,因此当我们转然E1缺失的病毒载体到293A时,由于293A 能提供E1早期蛋白,才能形成有感染力的腺病毒颗粒。腺病毒的包装使用的是293A细胞,有些文献上没有表明是293A,而笼统的写成293细胞,比如包装逆转录病毒用的293T细胞,有些文献上也只写293细胞。

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