人结肠癌HCT-116细胞传代培养的简易方法
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震荡传代法可以替代胰酶消化法作为 ＨＣＴ－１１６细胞的简易传代方法。 关 键 词 ：ＨＣＴ－１１６ 细 胞 ；传 代 培 养 ；水 平 震 荡 法 中 图 分 类 号 ：Ｒ３２９．２＋８ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１６７３－２１９７（２０１３）０２－００３５－０２
ＨＣＴ－１１６细胞进行传代培养。结果：利用水平震荡方 法 传 代 后 的 细 胞 在 新 瓶 中 可 以 正 常 贴 壁。２４ｈ和 ４８ｈ观察到胰酶消化法传代的细胞生长 情 况 与 水 平 震 荡 法 传 代 的 细 胞 未 见 明 显 差 异。 结 论：该 方 法 无 需使用胰蛋白酶，避免了胰酶对细胞的损伤作用，而 且 操 作 简 便，降 低 了 实 验 成 本 和 污 染 的 风 险。 水 平
按无菌操作，将 ＨＣＴ－１１６细胞接种到含 有 １０％的新生 牛血清、１００Ｕ／ｍＬ 青 霉 素 和 链 霉 素 的 ＰＲＭＩ－１６４０ 培 养 基 （Ｔ２５型培养瓶），置 恒 温 ３７℃、５％ＣＯ２、饱 和 湿 度 的 二 氧 化
胞
收 稿 日 期 ：２０１２－１１－１０ 作 者 简 介 ：王 倩 （１９７７－ ），女 ，医 学 硕 士 ，湖 北 中 医 药 大 学 基 础 医 学 院 讲 师 。 通 讯 作 者 ：赵 刚 （１９５９－ ），男 ，理 学 博 士 ，湖 北 中 医 药 大 学 基 础 医 学 院 教 授 ，硕 士 生 导 师 。
１ 材 料 与 方 法
１．１ 细 胞 株 人结肠癌 ＨＣＴ－１１６ 细 胞 株 购 自 武 汉 大 学 生 命 科 学 学
院中国典型培养物保藏中心。
１．２ 试 剂 ＰＲＭＩ－１６４０培养基（美国 ＨｙＣｌｏｎｅ公司）、新生牛血清（武
汉三利生物技术有限公司）、青霉素与链霉素（华北制药股份有 限公司）、０．２５％胰蛋白酶消化液（美国 ＨｙＣｌｏｎｅ公司）。 １．３ 器 材
电动震荡仪（浙江金坛仪器 厂），倒置显微镜（ＣＫ４０型， 日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ公 司），超 净 工 作 台 （ＹＪ－８７５ 型，苏 州 净 化 设 备有限公司），ＣＯ２ 培养箱（ＭＣＯ－１５ＡＣ 型，日 本 ＳＡＮＹＯ 公 司），５ｍＬ 可调移液 器 （上 海 大 龙 医 疗 设 备 有 限 公 司）；数 显 恒温水浴 锅 （ＨＨ－４ 型，国 华 电 器 公 司 ），小 型 台 式 离 心 机 （８００型，国 华 电 器 公 司）；一 次 性 塑 料 培 养 瓶 （Ｔ２５ 型，日 本 ＩＷＡＫＩ公 司 ）。 １．４ 细 胞 培 养
Ａ Ｓｉｍｐｌｅ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨＣＴ－１１６Ｃｅｌｌｓ Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ
Ｗａｎｇ Ｑｉａｎ１，Ｘｕ Ｙｕｎｄａｎ１，Ｚｈａｏ Ｇａｎｇ１，２＊ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｗｕｈａｎ ４３００６５，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，
ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ｖｉｂｒａｔｉｏｎ，ｏｆ ｃｅｌｌ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｗａｓ ｅｓｔａｂａｌｉｓｈｅｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｕｓｉｎｇ ｔｒｙｐｓｉｎ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ａｖｏｉｄ ｔｈｅ ｄａｍａｇｅ ｔｏ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｒｙｐｓｉｎ，ａｎｄ ｉｓ ｅａｓｙ ｔｏ ｏｐｅｒａｔｅ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｃｏｓｔ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：ＨＣＴ－１１６Ｃｅｌｌｓ；Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ；Ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ Ｖｉｂｒａｔｉｏｎ
人结肠 癌 ＨＣＴ－１１６细胞是 Ｂｒａｔｔａｉｎ 等 人 在 １９７９ 年 从 一例男性结肠癌患者的癌组织中培养建立起来的低分化型 腺癌细胞株［１］，广泛应用 于 恶 性 肿 瘤 细 胞 的 生 物 学 特 性、抗 肿瘤药物作用机理和抗癌药物的筛选等领域的研究 。 ［２－５］ 近 年的研究表明，大多数 ＨＣＴ－１１６细 胞 具 有 肿 瘤 干 细 胞 的 特 性，可作为肿 瘤 干 细 胞 研 究 的 理 想 对 象 。 ［６］ 在 体 外 培 养 条 件下，ＨＣＴ－１１６细胞一般呈梭形或多角形贴壁生长，传代 培 养时通常采用胰蛋白酶消化法进行。但经典的胰酶消化法 传代对细胞可 能 产 生 一 定 的 损 伤，且 操 作 相 对 繁 琐。 我 们 在实验时发现，ＨＣＴ－１１６ 细 胞 在 体 外 培 养 中 常 出 现 部 分 细 胞聚团堆积生 长 的 现 象，且 部 分 细 胞 相 对 容 易 脱 落。 为 了 简化 ＨＣＴ－１１６细胞传代培养的 操 作，避 免 胰 酶 对 细 胞 的 损 伤，我们针对该细胞容易聚团 并 易 脱 壁 的 特 点，建 立 了 简 单 高效 的 水 平 震 荡 方 法 替 代 胰 酶 消 化 法 对 ＨＣＴ－１１６ 细 胞 进 行 传 代 培 养 ，收 到 良 好 的 实 验 效 果 。
人结肠癌 ＨＣＴ－１１６细胞传代培养的简易方法
王 倩１，徐 云 丹１，赵 刚１，２＊
（１．湖北中医药大学 基础医学院，湖北 武汉 ４３００６５； ２．湖北中医药大学 中药资源与复方教育部重点实验室，湖北 武汉 ４３００６５）
摘 要：目的：针对人结肠癌 ＨＣＴ－１１６细胞在体外培养时常出现部分细胞聚团生长的特性，建立一种 简 易的细胞传 代 培 养 方 法———水 平 震 荡 法。 方 法：采 用 简 单 高 效 的 水 平 震 荡 方 法 替 代 胰 酶 消 化 法 对
Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＴＣＭ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｗｕｈａｎ ４３００６５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨＣＴ－１１６ｃｅｌｌｓ ｏｆｔｅｎ ｓｈｏｗ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆ ｐａｒｔｌｙ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ，
ＨＣＴ－１１６细胞进行传代培养。结果：利用水平震荡方 法 传 代 后 的 细 胞 在 新 瓶 中 可 以 正 常 贴 壁。２４ｈ和 ４８ｈ观察到胰酶消化法传代的细胞生长 情 况 与 水 平 震 荡 法 传 代 的 细 胞 未 见 明 显 差 异。 结 论：该 方 法 无 需使用胰蛋白酶，避免了胰酶对细胞的损伤作用，而 且 操 作 简 便，降 低 了 实 验 成 本 和 污 染 的 风 险。 水 平
按无菌操作，将 ＨＣＴ－１１６细胞接种到含 有 １０％的新生 牛血清、１００Ｕ／ｍＬ 青 霉 素 和 链 霉 素 的 ＰＲＭＩ－１６４０ 培 养 基 （Ｔ２５型培养瓶），置 恒 温 ３７℃、５％ＣＯ２、饱 和 湿 度 的 二 氧 化
胞
收 稿 日 期 ：２０１２－１１－１０ 作 者 简 介 ：王 倩 （１９７７－ ），女 ，医 学 硕 士 ，湖 北 中 医 药 大 学 基 础 医 学 院 讲 师 。 通 讯 作 者 ：赵 刚 （１９５９－ ），男 ，理 学 博 士 ，湖 北 中 医 药 大 学 基 础 医 学 院 教 授 ，硕 士 生 导 师 。
１ 材 料 与 方 法
１．１ 细 胞 株 人结肠癌 ＨＣＴ－１１６ 细 胞 株 购 自 武 汉 大 学 生 命 科 学 学
院中国典型培养物保藏中心。
１．２ 试 剂 ＰＲＭＩ－１６４０培养基（美国 ＨｙＣｌｏｎｅ公司）、新生牛血清（武
汉三利生物技术有限公司）、青霉素与链霉素（华北制药股份有 限公司）、０．２５％胰蛋白酶消化液（美国 ＨｙＣｌｏｎｅ公司）。 １．３ 器 材
电动震荡仪（浙江金坛仪器 厂），倒置显微镜（ＣＫ４０型， 日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ公 司），超 净 工 作 台 （ＹＪ－８７５ 型，苏 州 净 化 设 备有限公司），ＣＯ２ 培养箱（ＭＣＯ－１５ＡＣ 型，日 本 ＳＡＮＹＯ 公 司），５ｍＬ 可调移液 器 （上 海 大 龙 医 疗 设 备 有 限 公 司）；数 显 恒温水浴 锅 （ＨＨ－４ 型，国 华 电 器 公 司 ），小 型 台 式 离 心 机 （８００型，国 华 电 器 公 司）；一 次 性 塑 料 培 养 瓶 （Ｔ２５ 型，日 本 ＩＷＡＫＩ公 司 ）。 １．４ 细 胞 培 养
Ａ Ｓｉｍｐｌｅ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨＣＴ－１１６Ｃｅｌｌｓ Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ
Ｗａｎｇ Ｑｉａｎ１，Ｘｕ Ｙｕｎｄａｎ１，Ｚｈａｏ Ｇａｎｇ１，２＊ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｗｕｈａｎ ４３００６５，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，
ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ｖｉｂｒａｔｉｏｎ，ｏｆ ｃｅｌｌ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｗａｓ ｅｓｔａｂａｌｉｓｈｅｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｕｓｉｎｇ ｔｒｙｐｓｉｎ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ａｖｏｉｄ ｔｈｅ ｄａｍａｇｅ ｔｏ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｒｙｐｓｉｎ，ａｎｄ ｉｓ ｅａｓｙ ｔｏ ｏｐｅｒａｔｅ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｃｏｓｔ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：ＨＣＴ－１１６Ｃｅｌｌｓ；Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ；Ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ Ｖｉｂｒａｔｉｏｎ
人结肠 癌 ＨＣＴ－１１６细胞是 Ｂｒａｔｔａｉｎ 等 人 在 １９７９ 年 从 一例男性结肠癌患者的癌组织中培养建立起来的低分化型 腺癌细胞株［１］，广泛应用 于 恶 性 肿 瘤 细 胞 的 生 物 学 特 性、抗 肿瘤药物作用机理和抗癌药物的筛选等领域的研究 。 ［２－５］ 近 年的研究表明，大多数 ＨＣＴ－１１６细 胞 具 有 肿 瘤 干 细 胞 的 特 性，可作为肿 瘤 干 细 胞 研 究 的 理 想 对 象 。 ［６］ 在 体 外 培 养 条 件下，ＨＣＴ－１１６细胞一般呈梭形或多角形贴壁生长，传代 培 养时通常采用胰蛋白酶消化法进行。但经典的胰酶消化法 传代对细胞可 能 产 生 一 定 的 损 伤，且 操 作 相 对 繁 琐。 我 们 在实验时发现，ＨＣＴ－１１６ 细 胞 在 体 外 培 养 中 常 出 现 部 分 细 胞聚团堆积生 长 的 现 象，且 部 分 细 胞 相 对 容 易 脱 落。 为 了 简化 ＨＣＴ－１１６细胞传代培养的 操 作，避 免 胰 酶 对 细 胞 的 损 伤，我们针对该细胞容易聚团 并 易 脱 壁 的 特 点，建 立 了 简 单 高效 的 水 平 震 荡 方 法 替 代 胰 酶 消 化 法 对 ＨＣＴ－１１６ 细 胞 进 行 传 代 培 养 ，收 到 良 好 的 实 验 效 果 。
人结肠癌 ＨＣＴ－１１６细胞传代培养的简易方法
王 倩１，徐 云 丹１，赵 刚１，２＊
（１．湖北中医药大学 基础医学院，湖北 武汉 ４３００６５； ２．湖北中医药大学 中药资源与复方教育部重点实验室，湖北 武汉 ４３００６５）
摘 要：目的：针对人结肠癌 ＨＣＴ－１１６细胞在体外培养时常出现部分细胞聚团生长的特性，建立一种 简 易的细胞传 代 培 养 方 法———水 平 震 荡 法。 方 法：采 用 简 单 高 效 的 水 平 震 荡 方 法 替 代 胰 酶 消 化 法 对
Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＴＣＭ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｗｕｈａｎ ４３００６５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨＣＴ－１１６ｃｅｌｌｓ ｏｆｔｅｎ ｓｈｏｗ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆ ｐａｒｔｌｙ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ，