脱乙酰度测定

虾壳中总钙含量的测定

准确称取10g粉状虾壳，加入1moL／LHCl溶液100mL，搅拌10h以上，以充分脱钙，过滤，用水充分洗涤滤渣，将洗涤液与滤液合并，用水定容至250.00mL。从中移

取25.00mL，加入水50mL、NH

3-NH

4

Cl缓冲溶液20mL和4～5滴K-B指示剂后，用

O.02moL／L的EDTA标准溶液滴定。因该方法脱钙已被认可，故测定的钙含量可作为监测EDTA一步法处理虾壳脱钙率的参考标准。

(1)甲壳素含量：样品烘干，称重。脱除矿物质、蛋白质、脂类后，烘干后称重(％)。甲壳素含量=(W1／W2)x100％

（2）脱乙酰度的测定：因壳聚糖的自由基呈碱性，因此采用酸碱滴定法测定脱乙酰度，反应过程中与定量酸形成壳聚糖的胶体溶液，未反应的酸可用碱来进行反滴定，就可以推算出壳聚糖自由基结合酸的量，计算出壳聚糖中氨自由基的含量多少。准确称取定量壳聚糖样品，置于250mL三角瓶中，加入0．1mol／L标准盐酸溶液，在20-25℃下搅拌至完全溶解．加入2～3滴甲基橙指示剂．用0．1moL／L标准氢氧化钠溶液滴定游离的盐酸。另取一份样品置于105℃烘干至衡重，测定水分。每个样品各测3次，按下式计算脱乙酰度：

理论氨基含量=16／161×100％=9.94％

其中：16----氨基的摩尔质量(g／mol)

161----壳聚糖单元的摩尔质量(g／mol)

(3)蛋白质含量的测定：凯氏定氮法。

(4)脂肪含量的测定：索氏抽提法。

(5)灰分含量的测定：灰化法。

药典：附录ⅥF0一乙酰基测定法

试剂(1)2mol／L盐酸羟胺溶液称取盐酸羟胺13．9g，加水溶解并稀释至lOO

ml，冷处保存。

(2)3．5mol／L氢氧化钠溶液称取氢氧化钠14．Og，加水使溶解并稀释至100ml。

(3)4mol／L盐酸溶液量取盐酸33．3ml，加水稀释至lOOml的溶液。

(4)0．37mol／L三氯化铁一盐酸溶液称取三氯化铁(FeCl3·6H20)10．Og，加

O．1mol／L盐酸溶液溶解并稀释至100ml。

(5)碱性羟胺溶液取等体积的盐酸羟胺溶液(2mol／L)与氢氧化钠溶液

(3．5mol／L)混合。3小时内使用。

对照品溶液的制备精密称取已干燥至恒重的氯化乙酰胆碱22．7mg(或溴化乙

酰胆碱28．3mg)，置50ml量瓶中，加0．001mol／L醋酸钠溶液(pH4．5)溶解并稀释

至刻度，摇匀。

供试品溶液的制备取供试品，用水稀释成O-乙酰基浓度为O．5～2．5mmol／L

的溶液。

测定法精密量取氯化乙酰胆碱(或溴化乙酰胆碱)对照品溶液O．2ml、0．4ml、

O．6ml、O．8ml、1_Oml，分别置试管中，补加水至lml，加新鲜配制的碱性羟胺

溶液2ml，摇匀，于室温放置4分钟，加4mol／L盐酸lml，调pH值至1．2±O．2，摇匀，加O．37mol／L三氯化铁一盐酸溶液lml，摇匀，照紫外一可见分光光度法(附

录ⅡA)，在波长540nm处测定吸光度。另精密量取上述相应的系列对照品溶液，

自“补加水至lml※’起，除加酸与加碱性羟胺的次序颠倒外，同法操作，用作对应

的空白对照。

精密量取供试品溶液Iml置试管中，自“加新鲜配制的碱性羟胺溶液2ml※’起，同

法操作。并取供试品溶液Iml，同法操作，用作供试品的空白对照。

将标准管各吸光度分别减去相应的空白对照管的吸光度，以标准管中所含的

对照品溶液的体积与对应的吸光度作直线回归，将供试品的吸光度减去供试品

溶液空白吸光度代入直线回归方程，计算出每Iml供试品相当于对照品溶液的体

积(E，m1)。

供试品中O-乙酰基含量(mm01／L)=E×2．5式中2．5为对照品溶液中乙酰胆碱的

含量(mmol／L)。