RP—HPLC法同时测定胆石消胶囊中四种蒽醌类成分的含量

RP—HPLC法同时测定胆石消胶囊中四种蒽醌类成分的含量

目的建立以RP-HPLC法同时测定胆石消胶囊中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量测定方法。方法采用Waters SunFire C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-0.1%磷酸（85∶15）为流动相，流速：1.0 ml/min，柱温：28℃，检测波长：254 nm。结果大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚进样量分别在0.132 08～0.792 48 μg、0.087 52～0.525 12 μg、0.111 84～0.671 04 μg、0.080 16～0.480 96 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0.9998、0.9996、0.9994、0.9997，平均加样回收率分别为99.32%、98.80%、99.05%、99.14%，RSD分别为0.76%（n=9）、1.31%（n=9）、1.41%（n=9）、0.94%（n=9）。结论本方法简便易行，专属性强，准确度高，重现性好，可作为胆石消胶囊质量控制方法。

[Abstract]Objective To establish the content determination method of rhein，emodin，chrysophanol and physcion in Danshixiao capsules via RP-HPLC method.Methods Waters SunFire C18 column （250 mm×4.6 mm，5 μm）was adopted，and methanol-0.1% phosphate （85∶15）was selected as mobile phase，with flow rate：1.0 ml/min，column temperature：28℃，and determination wavelength：254 nm.Results Sample size of rhein，emodin，chrysophanol and physcion was within the range of 0.132 08-0.792 48 μg，0.087 52-0.525 12 μg，0.111 84-0.671 04 μg，and 0.080 16-0.480 96 μg respectively，which showed favorable linear relations with peak areas.The correlation coefficient was 0.9998，0.9996，0.9994 and 0.9997 respectively，the average recovery rate was 99.32%，98.80%，99.05%，99.14% respectively，and RSD was 0.76% （n=9），1.31% （n=9），1.41% （n =90），0.94% （n =9）respectively.Conclusion The method is easy to operate，with high specificity，high accuracy and good reproducibility，which is able to be taken as the quality control method of Danshixiao capsules.

[Key words]Reversed phase high-performance liquid chromatography；Danshixiao capsules；Rhein；Emodin；Chrysophanol；Physcion

胆石消胶囊为医院制剂，处方中含有大黄、茵陈、金钱草、黄芩等中药材，具有清热利湿、利胆排石的功效，临床用于胆道结石、胆道感染以及胆囊炎等，疗效显著。大黄是本方中君药，具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经、利湿退黄的功效。大黄的主要化学成分为蒽醌类化合物，现代药理研究表明，大黄作用的物质基础也主要是蒽醌类化合物，大黄中的蒽醌类成分能够疏通毛细胆管，促进胆汁分泌，改善胆小管内胆汁淤积，增加胆红素排出；大黄还能促进胆囊收缩，松弛奥狄氏扩约肌，增加胆汁排出量。体外实验表明，大黄中含有的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素对多种致病菌均有抑制作用。此外，大黄还有一定的抗炎作用[1]。本文参考《中国药典》2015年版一部及有关文献资料[2-13]，建立了同时测定胆石消胶囊中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚四种蒽醌类化合物含量的RP-HPLC法，为提高胆石消胶囊的质量标准提供研究基础，为其他含大黄制剂中蒽醌类成分的含量测定提供参考。

1材料与方法

1.1主要仪器

Waters2695高效液相色谱仪，2998 PDA检测器，Empower 3色谱工作站；CBL9960A超声波清洗器（上海科导超声仪有限公司）。

1.2主要试剂

对照品：大黄酸（批号：110757-201306）、大黄素（批号：110757-2013110）、大黄酚（批号：110796-20135）、大黄素甲醚（批号；110758-201310），均购自中国药品生物制品检定所；胆石消胶囊（批号为150214、150215、150216）；阴性样品系按胆石消胶囊处方工艺制备不含大黄的供试品；磷酸、甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.3实验方法

1.3.1色谱条件色谱柱：Waters SunFire C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（85∶15）；流速：1.0 ml/min；柱温：28℃；检测波长：254 nm；进样量：10 μl。理论塔板数以大黄素峰计算应不低于4000。

1.3.2溶液制备

1.3.

2.1对照品溶液的制备精密称取大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚四种对照品分别为16.51、10.94、1

3.98、10.02 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇，超声处理10 min（功率200 W，频率40 kHz）使之溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得每1毫升含大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别为0.3302、0.2188、0.2796、0.2004 mg的混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液1.00 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得每1毫升含大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别为0.066 04、0.043 76、0.055 92、0.040 08 mg的混合对照品溶液。

1.3.

2.2供试品溶液的制备取胆石消胶囊内容物粉末约4.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸（10∶1）混合溶液25 ml，85℃加热回流1 h 后放冷，转移至50 ml量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗涤液并入50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即制得供试品溶液。

1.3.

2.3阴性对照溶液的制备按胆石消胶囊处方工艺，取除大黄以外的其他中药饮片，按“1.

3.2.2”项下方法操作，制得不含大黄的阴性对照溶液。

1.3.3方法学考察

1.3.3.1系统适用性考察分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按“

2.1”项下色谱条件进样测定分析。