葡萄的组织培养

问题探究
组培中为什么会出现玻璃化现象？如何解 决？
玻璃化的含义
当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些 培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍 状，这种现象通常称为玻璃化。发生玻璃 化的试管苗称为玻璃化苗。
玻璃化苗的症状表现
1.试管苗矮小肿胀，失绿，茎叶表皮无蜡 质层，无功能性气孔，叶、嫩梢呈水晶透 明或半透明； 2.叶片皱缩并纵向卷曲，脆弱易碎； 3.组织发育不全或畸形；体内含水量高， 干物质等含量低； 4.试管苗生长缓慢，分化能力下降，难以 诱导生根，移栽成活率极低，因而繁殖系 数低。
葡萄为多年生果树，以嫁接、扦插等无性 方式繁殖，但长期无性繁殖导致多种病毒 的积累。 在葡萄上已鉴定的病毒已达55种以上，其 中以扇叶病、卷叶病、茎痘病和栓皮病的 放生最为广泛。
葡萄的品种
红葡萄品种 白葡萄品种
赤霞珠/解百纳
蛇龙珠/源自文库百纳
莎当妮/霞多丽
雷司令
葡萄的组织培养的步骤
（一）选材、外植体的消毒及接种
葡萄的组织培养
本节课主要内容
葡萄的简介 葡萄的品种 葡萄的组织培养 问题探究
葡萄为葡萄科（vitaceae）葡萄属（vitis） 落叶木质藤本浆果果树。葡萄科共有14个 属968种植物，葡萄属植物中具有经济价值 的约有20余种。 成熟浆果中含有15%~25%的葡萄糖和果糖 以及多种对人体有益的矿物质和维生素。
将大树或扦插苗长出5—7片叶的嫩梢，取5—10 厘米长，去掉幼叶。用自来水冲洗3—5分钟，在 70％酒精中浸泡30—40秒钟，用蒸馏水冲洗2— 3次，再放入0.5％氯化汞溶液中消毒7一10分钟， 最后用无菌水冲洗5—6次。在无菌条件下分离出 约2mm长的茎尖，接种到培养基上。
（二）培养基的配制
葡萄茎尖分化培养基以MS培养基（无机盐减半 为好），再添加BA1～2，NAA0．01，LH100， 蔗糖2%，琼脂0．6%，而B5培养基愈伤组织化 严重，茎尖生长不好。
（三）茎尖的分化
接种成活的茎尖一个月左右开始分化幼叶和侧芽， 两个月左右，由于侧芽的不断增生，形成芽丛。 由于不同品种对BA和NAA的反应不同，故生长有 明显区别，巨峰、大粒白香蕉、赤霞珠等品种， 由于顶端优势强，侧芽生长势弱，故增殖率低， 但成苗率高；白羽、白雅、白谢希、贵人香等大 多数品种侧芽分生能力强，可在幼茎上多次分枝， 故成苗率低；2号大白粒等个别品种，则幼茎短 缩膨大呈球形，很难成苗。
（四）茎尖苗的生长
在茎尖分化培养中产生的成苗率低和成苗困难， 密集生长的芽丛，可将分化培养基中的BA浓度减 低至0．5，同时添加GA30．2，则经一个月的培 养，就可长成2～3cm高的幼茎。此外黑暗处理 对幼茎的伸成，提高成苗率，也有明显的效果。
（五）炼苗移栽
试管苗长成后移到温室或塑料大绷里，在自然光 照下炼苗。要求温度在20—25℃，经两周后将试 管塞揭开，使之接受自然光照、温度、湿度锻炼 4—5天。用镊子夹叶柄将小苗从培养基中取出， 洗去培养基残留物，直接栽入温室或大棚中的小 拱棚里的砂壤土或粗砂里，浇透底水。棚内湿度 保持在90％左右。10厘米下的地温应稳定在15℃ 左右，光照为4000—5000勒。15—20天后见幼 叶变绿时，即可移植到大田，成活率达80％以上。 如棚内温度过高，要通风和盖苇帘遮荫降温，喷 洒凉水，提高棚内空气湿度和土壤湿度，以保持 炼壮苗的适宜条件。
玻璃化的防治解决措施
1.适当控制培养机中无机营养成分 2.适当提高培养机中蔗糖和琼脂的浓度 3.适当降低细胞分裂素和赤霉素的浓度， 增加生长素的比例。 4.增加自然光照，控制光照时间 5.控制好温度
谢谢大家！