1.生物学实验常用技术

生物学实验常用技术一、分子方面

1、基因工程

1）PCR

（Polymerase Chain Reaction）

(二楼PCR仪器全部会用) 2）RT-PCR；Q-PCR

3）琼脂糖凝胶电泳；胶回收

4）酶切/链接

5）转化

6）固体/液体LB培养基配制（高压蒸汽灭菌锅使用方法）7）质粒大/小抽原理及步骤

（手提、溶液I、II、III作用）8）基因组DNA抽提

9）RNA提取；2、蛋白质工程

1）蛋白收集

（蛋白裂解液+PMSF；

1×Loading 裂解（推荐））2）SDS-PAGE（电泳胶的配制）2）考马斯亮蓝染色，银染

3）Western blot

4）蛋白定量常用的方法及原理，以及熟练操作Bradford法蛋

白定量

（TRIZOL法原理、注意事项及步骤）

二、细胞方面

1）细胞培养、传代

2）细胞冻存与复苏

冻存液配制：（1）DMSO:血清=1:9（推荐）

（2）DMSO：培养基：血清=1:3:6 均可

DMSO为细胞专用型；现用现配，效果最好；冻存时细胞在-80℃中不要超过一周，最好在24-48h内放入液氮罐中保存。

3）细胞培养基配制（过滤除菌）、胰酶配制（过滤除菌），PBS配制（灭菌）；（不同培养基的区别；谷氨酰胺（提供氮源），2周补充一次）

4）转染

5）MTT原理及操作（检测细胞存活率或死亡率）

6）碱性磷酸酶实验（ALP，检测细胞分化）

（5、6 需学会SPSS软件及graphpad prism5软件使用）

7）Hoechst染色

8）结晶紫染色（不推荐）

9）苏木精/伊红染色

（9可以替代8，以后实验推荐使用9，图片漂亮）

10）荧光显微镜的使用

11）激光共聚焦显微镜样品制备（细胞固定，染色，洗脱）

（7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据）

12）流式细胞仪样品制备（包括：转染效率和细胞凋亡染色标记）以及仪器操作（需学会FlowJo软件分析流式结果）

三、动物实验

1）小鼠的定制：

常见的小鼠：

ICR小鼠（正常），9元/只

BalB/C小鼠（正常），30元/只

SD大鼠（正常），30元/只

裸鼠（免疫缺陷小鼠），80元/只

NOD SCID小鼠（免疫三缺陷），250元/只

其中前四种是常用的，最后一种以后可能会用到。

浙江中医药大学：小鼠品系齐全，可提供以上小鼠静脉注射，提供体内原位成瘤手术；杭州师范大学：NOD SCID品系小鼠没有，不提供裸鼠静脉注射，不提供体内原位成瘤手术。

2）小鼠成瘤（熟练皮下成瘤操作）；

3）肿瘤测量（游标卡尺测量；IVIS测量（推荐，前体要构建Luc细胞系））

4）慢病毒转染构建稳转Luc癌细胞系

5）小鼠的腹腔注射、瘤内注射以及ICR小鼠的尾静脉注射

6）小鼠尾部和眼球取血

7）小动物活体成像仪的原理及使用方法

8）小鼠解剖及组织固定

电镜样品：2.5%戊二醛固定；

免疫组化：10%的福尔马林或4%的多聚甲醛固定

9）组织电镜样品的制备及TEM的使用

（每个样品400，额外每张TEM照片5元）

10）免疫组织切片样品的制备

（蜡块制备25元；HE染色15元/片；TUNEL：200元/片；免疫组化：45元/片(抗体自备)）

11）免疫组织切片的观察（荧光显微镜和正置光学显微镜使用切换）