5%葡萄糖注射液无菌方法验证方案

卷内目录

1. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证计划

2. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证小组名单

3. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证方案

4. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证检测记录

5. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证验证报告

6. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证验证合格证

5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证计划

应公司验证委员会要求，对我公司生产的各品种进行无菌检查方法验证。“5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证”项目验证工作计划

如下：

一．2008年11月1日至11月3日：制定验证方案，由注射剂无菌检查方法验证小组组长负责起草。

二．2008年11月4日至11月8日：验证方案讨论、修改、审批及培训。

三．2008年 11月9 日至11月23日：验证工作实施，主要工作内容是根据验证方案及要求完成资料准备与核查、样品准备、检验、

后期的培养、观察及相关记录的填写。

四.2008年11月24日至11月26日：根据验证情况与记录，书写验

证报告。

五．2008年11月27日至11月29日：验证报告审核批准，合格证书发放。

无菌检查方法验证小组

2008年11月1日

5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证小组名单

组长：XX

成员：XXX XXX XXX

1.概述

我公司主要生产大容量注射剂，属于最终灭菌的无菌制剂，按照《中华人民共和国药典》（2005版）等法规要求成品必须进行无菌检查。

无菌检查对操作环境、检测用器材（器具、试管、平皿、镊子等）、培养基、设备设施要求高，检测和处理过程必须严格控制才可能得到稳定、可靠、真实的结果。

根据样品特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行药品的无菌检查;若不符合，重新建立制定检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

2.验证目的

通过验证确认所采用的检验方法适合于5%葡萄糖注射液的无菌检查。

3. 验证依据

3.1《药品生产验证指南》（2003版）（国家食品药品监督管理局）

3.2《药品生产质量管理指南》（1998修订版）

3.3《中华人民共和国药典》（2005年版二部）

4.验证

4.1试验前的准备

a）检验环境的确认

无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部100级的单向流洁净区内进行。检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。我公司生测室空调净化系统已经验证，且在验证合格期内，检测环境符合检验要求。

b)检验用仪器

5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证方案

名称生产厂家型号校验情况

c)培养基

名称产地批号

d)检定菌信息

名称来源编码及传代次数（3代）

验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得冷冻干燥菌种为0代），并采用适用的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证方案

4.2验证用菌液制备

4.2.1金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌菌液制备

接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，在30～35℃培养条件下培养18～24 小时。取此培养液1ml加0.9%灭菌生理盐水9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，用营养琼脂培养基注皿计数，制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。

4.2.2白色念珠菌菌液制备

接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养条件下培养24～48小时，取此培养液1ml加0.9%灭菌生理盐水9ml采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，用玫瑰红钠琼脂培养基注皿计数，制成每1ml含菌落数小于100cfu的菌悬液。

4.2.3 生孢梭菌菌液制备

接种生孢梭菌的新鲜培养物至10ml硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养条件下培养18～24小时。取此培养液1ml加0.9%灭菌生理盐水9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-3～10-5，用营养琼脂培养基注皿计数，制成每1ml含菌落数小于100cfu的菌悬液。

4.2.4黑曲霉菌菌液制备

接种黑曲霉的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养条件下培养5天，取此培养液1ml加0.9%灭菌生理盐水9ml采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6，用玫瑰红钠琼脂培养基注皿计数，制成每1ml含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。

《菌悬液配制记录》见附表1

4.2.5选用检定菌说明

大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，生孢梭菌为厌氧菌，枯草芽孢杆菌为产芽孢杆菌，前述菌株作为细菌计数验证用菌株; 黑曲霉菌为霉菌，白色念珠菌为酵母菌，作为霉菌及酵母菌计数验证用菌株。

5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证方案

4.3培养基制备

4.3.1 营养琼脂培养基

取营养琼脂培养基干粉32g，加1000毫升蒸馏水，加热使溶解，分装，121℃高压灭菌15min。

4.3.2 玫瑰红钠琼脂培养基

取玫瑰红钠琼脂培养基干粉30.5g，加1000ml蒸馏水，加热使溶解，分装，121℃高压灭菌15min。

4.3.3 营养肉汤培养基

取营养肉汤培养基干粉18g，加1000ml蒸馏水，加热使溶解，分装，121℃高压灭菌15min。

4.3.4 硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养好氧菌、厌氧菌）

取硫乙醇酸盐流体培养基干粉29.25g，加1000ml蒸馏水，加热煮沸使完全溶解，摇匀。分装，121℃高压灭菌15min。

培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并应防止被污染。

4.3.5 改良马丁培养基（用于培养真菌）

取改良马丁培养基干粉28.5g，加1000ml蒸馏水，加热使溶解，分装，121℃高压灭菌15min。

无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的灵敏度检查和无菌性检查要求。

培养基灵敏度检查和培养基无菌性可同步操作。

《培养基配制发放记录》见附表2、《培养基灵敏度复核记录》见附表3、《培养基无菌性检查记录》见附表4。

4.4供试品管、对照品管的制备

4.4.1供试品管的制备（薄膜过滤法-半封闭过滤器）

取样品三批，每批70袋。用装有孔径为0.45 um，直径为50mm的滤膜的半封闭