23第二十三章 常见感染性真菌检验

四、二相性真菌
（四）微生物学检验
组织胞浆菌
1．直接显微镜检查 应涂片染色后检查。
• 痰液等标本：涂片后先用甲醇固定10min，再用姬姆萨 染色镜检
• 皮损、脓液等标本：用20%KOH涂片后镜检
2．抗原检测、药物敏感试验、抗体检测
3．分离培养与鉴定
①标本
含抗生素的沙保罗培养基
25℃培
养，生长缓慢，有时需4~6周才开始生长，逐渐形成白
卡氏包囊
临床微生物学检验技术
卡氏包囊和滋养体
三、卡氏肺孢菌
（四）微生物学检验：
• 直接显微镜检查 从患者痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中检查PC是 确诊本病的重要依据
• 抗原检测，核酸检测，抗体检测等。
（五）药敏试验的药物选择
抗真菌药物对卡氏肺孢菌无效
临床微生物学检验技术
四、二相性真菌
（一）分类
25℃和37℃孵育的可生长，而非病原性隐球菌在37℃时不生 长。培养2~5d后观察菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负 染色镜检
临床微生物学检验技术
一、酵母型真菌
（五）药敏试验的药物选择
1. 白念珠菌 两性霉素B及其脂质体、三唑类、棘白菌素类及 5-FC等药物敏感
2. 热带念珠菌 两性霉素B敏感，对唑类药物较敏感 3. 克柔念珠菌 两性霉素B敏感，对氟康唑天然耐药 4. 光滑念珠菌 两性霉素B敏感，对氟康唑等有较高的耐药性 5. 隐球菌属 两性霉素B及其脂质体、5-FC、氟康唑和伊曲康
（二）生物学特性
临床微生物学检验技术
曲霉结构图
二、丝状真菌
（三）微生物学检验
1.曲霉菌
• 直接显微镜检查 取痰液等被检材料涂于载玻片上，在镜 下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶 囊，顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢子
• 抗原检测、抗体检测、药敏试验、皮肤试验 • 分离培养与鉴定：标本接种沙保罗琼脂，室温培养后菌落
少见，是一些地方流行区少年儿童中头癣的常见原因
临床微生物学检验技术
三、生物学特性
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
（一）标本采集 （二）直接显微镜检查
– 皮屑+10%KOH液 – 指甲+25%KOH/25%NaOH含5%甘油处理 – 常用湿标本，不加染色，直接显微镜镜检
临床微生物学检验技术
四、微生物学检验
临床微生物学检验技术
一、酵母型真菌
（二）临床意义
1. 念珠菌属 白念珠菌：可侵犯人体多个部位，引起各种念珠菌病 热带念珠菌：可引起皮肤、黏膜和内脏念珠菌病 克柔念珠菌：可引起系统性念珠菌病
2. 隐球菌属 一般为外源性感染 新生隐球菌致病物质是荚膜
临床微生物学检验技术
一、酵母型真菌
（三）生物学特性
临床微生物学检验技术
白色念珠菌
一、酵母型真菌
（三）生物学特性
临床微生物学检验技术
一、酵母型真菌
（四）微生物学检验
1. 念珠菌属 ① 标本采集 根据感染部位的不同，采集不同的标本 采集标本时应避免病灶周围正常菌群污染
临床微生物学检验技术
一、酵母型真菌
② 标本直接检查 • 直接镜检 • G试验：也称螯试验，可测定1-3-β-D-葡聚糖，为深部 真菌感染的标志 • 抗原检测 • 抗体检测 • 核酸检测
相混淆，但前者孢子常有横隔，从不出芽
临床微生物学检验技术
形成快，呈毛状，一般为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特 征性的分子孢子头和足细胞。根据不同的曲霉的形态和菌 落特征确定菌种
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二、丝状真菌
（三）微生物学检验
2. 毛霉菌
• 直接镜检 临床标本 ＋ 20%KOH
湿片，直接镜检
可见折光性强的粗大菌丝，偶见孢子囊及孢子囊梗
• 分离培养 临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖培养
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二、丝状真菌
（四）药敏试验的药物选择
• 曲霉菌属对制霉菌素、两性霉素B及其脂质体、伏立康唑 、泊沙康唑、伊曲康唑、卡泊芬净、米卡芬净等敏感
• 毛霉目真菌对两性霉素B、伊曲康唑、特比奈芬等敏感
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三、卡氏肺孢菌
（一）分类：
核糖体RNA的核苷酸序列与真菌有更多的同源性；归 类于真菌
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一、酵母型真菌
③ 分离培养与鉴定
临床微生物学检验Байду номын сангаас术
一、酵母型真菌
（四）微生物学检验 2.隐球菌属
① 直接镜检 用患者脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜 炎最简便、快速之方法
② 抗原检测 检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原，以乳胶凝集试验 最为常用，此法简便、快速
③ 核酸检测、药物敏感试验、抗体检测 ④ 分离培养 将标本接种在沙保罗培养基上，病原性隐球菌在
唑等敏感
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二、丝状真菌
（一）分类及临床意义
1. 曲霉 呼吸系统曲霉病、全身性曲霉病、产生毒素引起机 体食物中毒、致癌作用
2. 毛霉 毛霉病 3. 镰刀菌属 眼内炎、角膜炎、溃疡、甲真菌病、皮肤感染、
脓皮病、关节炎、肺炎部感染、心内膜炎、脑脓肿和真菌 血症等
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二、丝状真菌
组织胞浆菌 马尔尼菲青霉菌
（二）临床意义
组织胞浆菌—传染性极大 马尔尼菲青霉菌—患者本身基础性疾病或应用免疫抑制剂等 可能是重要的易感因素
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四、二相性真菌
（三）生物学特征
组织胞浆菌：双相性，在25℃培养时呈典型菌丝体，在 37℃培养时为酵母型，位于细胞内或外
马尔尼菲青霉菌：双相性，在自然界中以菌丝形式存在， 在组织中则可形成小圆形到椭圆形细胞
第二十三章 常见感染性真菌检验
临床微生物学检验技术
第一节 皮肤黏膜感染真菌
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一、分类
• 临床上最多见的引起皮肤黏膜感染的真菌 为皮肤癣真菌，包括：毛癣菌属、表皮癣 菌属和小孢子菌属
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二、临床意义
（一）毛癣菌属
• 毛癣菌属易侵犯人体皮肤、指（趾）甲、毛发的角蛋白组 织并生长繁殖，能产生数种角质溶解酶致病，可引起头癣 、体癣、股癣、叠瓦廯、手癣、足癣及甲癣等
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二、临床意义
（二）表皮癣菌属
• 絮状表皮癣菌是表皮癣菌属内唯一的致病菌。絮状表皮 癣菌是一种常见的皮肤癣菌，可引起皮肤感染，如股癣 、足癣、体癣、手癣和甲癣
临床微生物学检验技术
二、临床意义
（三）小孢子属
• 小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感染指（趾）甲 • 铁锈色小孢子菌可引起头白癣，多见于儿童，成人极为
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第二节 侵袭性感染真菌
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一、酵母型真菌
（一）分类
1. 念珠菌属 念珠菌属（Candida）（假丝酵母菌）有150多个种， 常见致病的有11种 以白念珠菌为最常见的致病菌
2. 隐球菌属 包括17个种和8个变种，其中对人致病的最主要是新生 隐球菌（Cryptococcus neoformans）及其变种
（三）分离培养与鉴定
标本
70%乙醇或在青、链霉素混
合液内处理5min
生理盐水洗3次
接种沙保罗琼脂斜面25℃培养观察菌落特征
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五、药敏试验的药物选择
•皮肤黏膜感染真菌除对咪类药物敏感，如咪康唑、酮康唑、 联苯苄唑、克霉唑、益康唑、舍他康唑、布托康唑、芬替康 唑、噻康唑、特康唑、伊曲康唑、氟康唑及伏立康唑等，同 时对特比萘芬、阿莫洛芬、利拉萘酯及环吡酮胺等药物敏感 。临床治疗时常两种药物联合使用
色至棕色绒毛状菌落
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四、二相性真菌
（四）微生物学检验
马尔尼菲青霉菌
1. 标本直接检验 取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴结活体组织 瑞氏染色后镜检
2. 分离培养与鉴定 标本接种沙氏培养基上，在25℃培养为 青霉相；37℃酵母相
3. 抗原检测 4. 鉴别要点 马尼尔菲青霉的孢子易与荚膜组织胞浆菌孢子
基、马铃薯培养基及沙保罗琼脂培养基，25℃或37℃培养
• 抗体检测
• 鉴定 根据毛霉、根霉与梨头霉的形态特点
临床微生物学检验技术
二、丝状真菌
（三）微生物学检验 3．镰刀菌
• 标本直接检验：可见分支、分隔的菌丝，与曲霉的镜下特 征相似。
• 培养鉴定：常有培养基有燕麦培养基、马铃薯葡萄糖琼脂 、石竹叶琼脂、合成琼脂、KCl培养基和土壤琼脂。PDA 和OA可用以观察菌落形态和色泽，产孢有时较少。KCl培 养基可用以观察分生孢子链的形成。土壤培养基有利于快 速形成厚壁孢子。
（二）临床意义：
在宿主免疫力低下时，可导致间质性浆细胞肺炎，又 称卡氏肺孢菌性肺炎（PCP）。卡氏肺孢菌病是AIDS最常 见、最严重的机会感染性疾病，病死率高达70%~100%
临床微生物学检验技术
三、卡氏肺孢菌
（三）生物学特性：
• 卡氏肺孢菌生活史有包囊和滋养体两种形态。包囊为感染 型，滋养体为繁殖型，呈二分裂法繁殖