科玛嘉显色培养基鉴别酵母样真菌的临床价值

糖类的颜色反应

糖类的性质实验（一）糖类的颜色反应一、目的 1．了解糖类某些颜色反应的原理。 2．学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。二、颜色反应（一）α-萘酚反应（Molisch反应）。 1．原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 2．器材（1）试管及试管架（2）滴管 3．试剂（1）莫氏（ Molisch）试剂： 5％α-萘酚的酒精溶液1500mL称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100mL，贮于棕色瓶内。用前配制。（2）1％葡萄糖溶液 100mL （3）1％果糖溶液 100mL （4）1％蔗糖溶液 100mL （5）1％淀粉溶液 100mL （6）0.1％糠醛溶液 100mL （7）浓硫酸 500mL 4．操作

取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、 1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、 0.1％糠醛溶液各 1mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。斜执试管，沿管壁慢慢加入浓硫酸约1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。浓硫酸在试液下形成两层。在二液分界处有紫红色环出现。观察、记录各管颜色。（二）间苯二酚反应（Seliwanoff反应） 1．原理在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。 2．器材（1）试管及试管架（2）滴管（3）水浴锅 3．试剂（1）塞氏（Seliwanoff）试剂 0.05％间苯二酚-盐酸溶液 1000 mL 称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100 mL （2）1％葡萄糖溶液 100mL （3）1％果糖溶液 100mL （4）1％蔗糖溶液 100mL 4．操作取3支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5 mL。再向各管分别加入塞氏试剂 5 mL，混匀。将3支试管同时放入沸水浴中，注意观察、记录各管颜色的变化及变化时间。思考题 1．可用何种颜色反应鉴别酮糖的存在？

3种酵母样真菌鉴定方法的比较

1　进修生收稿日期:2001-04-103种酵母样真菌鉴定方法的比较农生洲　韦柳宏1　陈松峰 (广西壮族自治区人民医院检验科　南宁　530021) 为综合评价目前我国实验室常规手工发酵鉴定法(常规法)、生物梅里埃A T B Fug us卡鉴定法(仪器法)和近年国内开始应用的科玛嘉(CHRo M ag ar)酵母样真菌显色培养基鉴定法(显色法)等3种酵母样真菌鉴定方法的优劣。我们同时用这3种方法对实验室保存的122株酵母样真菌标准菌株进行了鉴定比较,报道如下。 1　材料与方法 1.1　菌株来源:122株实验菌为实验室历年保存的标准菌株,其中白假丝酵母菌53株,热带假丝酵母菌31株,光滑球假丝酵母菌18株,近平滑假丝酵母菌11株,克柔氏假丝酵母菌3株,季也蒙假丝酵母菌、葡萄牙假丝酵母菌各2株,粘红假丝酵母菌、酿酒假丝酵母菌各1株。 1.2　试剂:沙氏培养基和各种手工用发酵管均购自杭州天和微生物试剂公司;Fug us卡及其配套仪器A T B Ex pressio n 为法国生物梅里埃公司产品;显色培养基则购自郑州搏赛科技有限责任公司。 1.3　鉴定方法:常规法鉴定按卫生部医政司颁发的《全国临床检验操作规程》进行;Fug us卡法按配套的操作手册取菌制成悬液,加样后置37℃培养24h后上机鉴定;显色法则取F ugus卡法剩余的悬液直接接种于显色培养基制成的平板上,置37℃培养,每隔24h观察一次结果,据菌落颜色进行判定;翠绿色为白假丝酵母菌,兰灰色为热带假丝酵母菌,紫红色边缘模糊有微毛为克柔氏假丝酵母菌菌,整个菌落湿润且紫红色为光滑球假丝酵母菌,白色为其它假丝酵母菌。 2　结　果 2.1　培养鉴定耗时:常规法和仪器法需预先用沙氏培养基培养出真菌,平均耗时大约72h,再加上鉴定耗时又分别平均约需72h和24h,常规法培养鉴定总共平均约需6d,仪器法约需4d;显色法集培养与鉴定于一体,耗时平均约需4 d。 2.2　鉴定结果:122株酵母样真菌的鉴定中,三法对53株白假丝酵母菌鉴定全部正确。其它69株菌中,常规法有11株无法鉴定到种,占总株数9.0%(11/122)。此外有5株热带假丝酵母菌鉴定错误,3株错定为光滑球假丝酵母菌,2株错定为近平滑假丝酵母菌。有3株光滑球假丝酵母菌鉴定错误,1株误定为热带假丝酵母菌,2株误定为近平滑假丝酵母菌。有2株近平滑假丝酵母菌鉴定错误,1株误为热带假丝酵母菌,1株误为光滑球假丝酵母菌。除无法鉴定到种的11株菌后,鉴定错误率仍有9.0%(10/111);显色法对白假丝酵母菌等该法能鉴定的6种酵母样真菌鉴定准确率达100%,其它菌株却无法鉴定到种,占总株数4.1%(5/122); F ugus卡法全部菌株均可鉴定到种,且准确率达100%。详见表1。表1　122株酵母菌样真菌3种方法鉴定结果比较(株) 菌名菌株数常规法显色法仪器法白假丝酵母菌　53　53　53　53 热带假丝酵母菌31273131 光滑球假丝酵母菌18171818 近平滑假丝酵母菌11111111 克柔氏假丝酵母菌3133 粘红假丝酵母菌1111 季也蒙假丝酵母菌2102 葡萄牙假丝酵母菌2002 酿酒假丝酵母菌1001 2.3　成本核算:常规法鉴定每一株菌平均约需10元,仪器法平均约需50元,显色法平均约需15元。 3　讨　论当前酵母样真菌引起的临床感染正呈逐步增加之势,临床医师急需实验室准确快速地检出病原体以协助诊治[1]。纵观本试验结果,加上预先真菌培养时间常规法鉴定耗时总共需要至少6d左右,且操作繁琐,生化结果判定较困难,即使是标准菌株,结果仍极易出错。而如F ugus卡等仪器测试卡法,虽然鉴定耗时较短,操作也简便,鉴定结果准确率又高且可配套进行体外药敏试验,但因仪器和试卡均为进口产品,价格昂贵,只适合在有大量标本的大型综合性医院应用。从本研究可看出,显色法培养加鉴定耗时平均仅需48h,与应用仪器法耗时基本相等,且培养基制备方便,价格适中,结果判定简便快速准确,虽然有一部分菌株无法鉴定到种,但已能鉴定出目前临床感染95%以上的3～4种酵母样真菌感染[2],故不失为一种替代常规法在中小医院普及开展的酵母样真菌检验方法。参　考　文　献 1　周贵民,谢　灵.国内酵母菌感染和实验室诊断的现状及建议.中华医学检验杂志,1996,19(5):301-303. 2Pfaller M A,Housto n A,Co ffman S.A pplicatio n of CHR OM ag ar Ca ndida for r apid scr eening o f clinical specimens for Candida A lbicans,Candida tro picalis, Candida K rusei,and Candida(T or ulopsis)glabrata.J Clin M icr o bilo l,1996,34(1):58-61. ? 764?广西医科大学学报 JOURNA L OF GU ANGXI M EDICAL UNIVERSIT Y 　2002Oct;19(5)

细菌真菌放线菌培养基配方

。细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的一．培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。肉膏蛋白胨培养基 1.药品比例：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL， PH7.4～7.6 2.实验器材：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡

萄糖、孟加拉红、链霉素、 1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO、NaCl、K HPO·3HO、MgSO·7HO、222434 FeSO·7HO、4.5mL 无菌水6 管，10%酚液，49.5mL 无菌水( 带玻璃珠)124 瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台 . 3.配置方法（1）称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。（2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至．

所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。（3）调pH：检测培养基的pH，若pH 偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH 范围。若偏碱，则用lmol/L HCl 进行调节。pH 的调节通常放在加琼脂之前。应注意 pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。（4）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4 层纱布趁热过滤，以利培养的观察。但是供一般

沙门氏菌快速检测方法

沙门氏菌快速检测方法 1试剂与仪器 1.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针 1.2仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 1.3所用试剂和培养基 1.3.1缓冲蛋白胨水（BPW）培养基称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15min，冷至常温。 1.3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。 2、操作步骤 2.1配制BPW培养基（第一天） 2.2培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min 后使用。（第一天） 2.3预增菌（第一天）称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。 2.4配制TTB增菌液（第一天） 2.5增菌（第二天） 2.5.1接种和培养轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于9mLTTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。 2.5.2培养现象菌名菌号生长状况 TTB培养特征静置后浑浊CMCC(B)50071 伤寒沙门氏菌良好静置后浑浊良好鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115 静置后清亮不生长大肠埃希氏菌 ATCC25922

显色培养基在几种食源性致病菌快速检测中的应用

显色培养基在几种食源性致病菌快速检测中的应用显色培养基是一种鉴定微生物的快速检测技术，它的原理是通过在培养基中加入微生物自身代谢生产的酶，根据相应显色底物反应的颜色对菌种进行判断与鉴定。显色培养基较传统培养基具有灵敏度高、特异性大的优点，是一种新型的分离培养。大肠杆菌显色培养基、沙门氏菌培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、弧菌显色培养基、李斯特菌显色培养基等这几种食源性致病菌已经有效、广泛应用于食品、环境卫生、医药等领域，取得了一定的成效。但显色培养基尚还存在一些假阳（阴）等问题，这就影响了检测的结果，因此还需要进一步的研究。标签：显色培养基；食源性致病菌；快速检测；应用随着人们生活水平逐渐的提高和近年来一系列食品安全问题的出现，食品的安全问题越来越受到人们的重视。食品安全问题与微生物密切相关，微生物可造成食品环境的污染，因此，微生物的检测技术已经成为检测食品安全问题的重要工具。微生物传统的检测方法耗时长，操作步骤繁琐，已经不能满足当今食品、环境卫生、医药等领域检测的需要。研究各种新型微生物的检测技术，提高检测的效率是有效预防和控制各种微生物感染的有效措施[1]。本文就显色培养基在大肠杆菌显色培养基、沙门氏菌培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、弧菌显色培养基、李斯特菌显色培养基等食源性致病菌快速检测中的应用进行研究总结。显色培养基的原理是通过在培养基上加入微生物自身代谢产生的酶的底物，底物是由发色基团和微生物可代谢物质组成，为无色，但在特异性酶作用下游离出发色基团并显示一定颜色，直接观察菌落颜色，对菌种做出鉴定，减少了对菌株进行纯培养和进一步生化鉴定的步骤[2]。 1 几种食源性致病菌应用显色培养基快速检测的近况 1.1 显色培养基在大肠杆菌应用的研究研究表明，绝大多数的大肠杆菌具有β-D-葡萄糖苷酸酶（β-D-Gud），利用β-葡萄糖醛酸酶分解底物，使色源游离出来显色而区分大肠杆菌和其它的细菌。沙门菌、志贺氏菌和耶尔森氏菌不能产生β-D-Gud，因此可以利用β-D-Gud底物有效检测大肠杆菌。底物被β-D-Gud 水解后产生显色物质使菌落呈现特殊的蓝色或黄色。显色酶的底物通常是苯酚的衍生物，如有o （p）-硝基酚、p-硝基苯酚、羟基吲哚、5-溴- 4-氯- 3-吲哚、5-溴-6-氯-3-吲哚、6-氯-3-吲哚、N-甲基吲哚、5-碘-3-吲哚等的化合物[3]。 1.2 显色培养基在沙门氏菌应用的研究沙门氏菌是一类重要的食源性致病菌，它能够产生辛酯酶，除沙雷氏菌属外，其它各属细菌不具备这一功能，因此可以鉴别沙门氏菌属和其它肠菌科细菌。根据这一原理，以丙烯乙二醇和5-溴-4-氯-3-吲哚-B-D半乳糖吡喃糖苷酸（X-GAL）为底物来检测沙门氏菌，沙门氏菌能水解乙二醇产酸，但不能水解X-GAL，在培养基上产生特殊的红色菌落。这种显色方法具有敏感性高、特异性高的特点，操作步骤较为简单、检测效率高[4]。 1.3 显色培养基在金黄色葡萄球菌应用的研究金黄色葡萄球菌是食源性致

沙门氏菌的检验

沙门氏菌的检验食品学院14食品质量与安全1班刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 2 2 2 2 摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定前言沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1仪器设备均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头

电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂 1.1.2试剂药品鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI 生化鉴定卡 1.1.3培养基蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基 1.2 实验方法 1.2.1培养基的制备 1.2.1.1培养基的配制步骤蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调节 pH，高压灭菌 121 ℃，15 min。分装10瓶，每瓶90ml 四硫磺酸钠煌绿（TTB）：高压灭菌 121 ℃，15 min灭菌冷却后至30℃，每100ml 基础培养液加碘液2ml，煌绿液1ml 1.2.1.2配制培养基的注意事项（1)按照说明书上的用量进行换算，称取准确分量的合成培养基粉末；（2）加热煮沸溶解培养基时，留意锅内水位的变化，水位下降可再添加适量的水，以免水分蒸发过多，导致后面分装不够量；（3）往试管中放小导管时，注意处理气泡。 1.2.2 沙门氏菌群检测 1.2.2.1沙门氏菌检测程序

常用细菌培养基配方

常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。常用培养基 LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml

弧菌显色培养基

品种名称：弧菌显色培养基英文名称：Chromogenic Vibrio Agar 品种编号：CRM008 培养基用途：用于水产品及食物中毒样品中弧菌特别是副溶血性弧菌的分离和鉴定。弧菌显色培养基使用原理：蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;蔗糖为可发酵的糖类;抑菌剂抑制大部分非弧菌细菌，氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;混合色素与副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌所对应的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上产生品红色菌落(副溶血性弧菌)和绿-蓝绿色的菌落(霍乱弧菌和创伤弧菌)。图册: 弧菌显色培养基配方(每升)：蛋白胨19.8g 酵母膏粉5g 蔗糖20g

氯化钠10g 抑菌剂1.5g 琼脂13g 混合色素3g 最终pH 9.0±0.2 弧菌显色培养基使用方法 1、取瓶内干粉培养基72.3克，用100ml蒸馏水或纯水溶解，可按比例扩增或缩小。搅拌加热煮沸至完全溶解，不需高压灭菌，冷至约50℃，倾注灭菌平皿。 2、以无菌操作取检样25 g(mL)，加入3%氯化钠碱性蛋白胨水225 mL，用旋转刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min，或拍击式均质器拍击2 min，或用Pulsifier脉冲式样品处理器均质30秒，制备成1:10的均匀稀释液。如无均质器，则将样品放入无菌乳钵中磨碎，然后放在500 mL的灭菌容器内，加225 mL3%氯化钠碱性蛋白胨水，并充分振荡。 3、增菌：将1:10稀释液于36 ±1 ℃培养8～18h。 4、分离：在增菌液中用接种环取一环，于弧菌显色平板上划线分离，于36 ±1 ℃培养18～24 h。 5、通过验证试验进一步确认假定性副溶血性弧菌和其他弧菌，如氧化酶、革兰氏染色、生化鉴定等。弧菌显色培养基质量控制：本品倾注平皿后呈淡黄色，下列菌株接种后36±1℃培养18-24小时生长情况如下表：质控菌株生长情况菌落色泽副溶血性弧菌ATCC17802 良好品红色霍乱弧菌VBO非01 良好绿-蓝绿色溶藻弧菌ATCC33787 良好无色大肠埃希氏菌ATCC25922 不长- 注：最后的鉴定须做补充试验。

科玛嘉改良大肠杆菌O157显色培养基使用说明书

法国科玛嘉改良大肠杆菌O157显色培养基使用说明书此培养基用于大肠杆菌O157的分离和鉴定。一、组分琼脂15.0g/L 蛋白胨、酵母粉13.0g/L 色素 1.2g/L 添加剂A 1瓶添加剂B 1瓶 pH 7.0±0.2 二、操作 1.称取瓶内干粉，用1000ml蒸馏水或纯水溶解，可按29.2g/L的比例扩大或缩小。 2.上述干粉缓慢倒入蒸馏水中，充分搅拌溶解。 3.加热至100℃,并按常规不断搅拌。如果用高压灭菌锅，不要加压，加热不能超过100℃，混合物也可以在微波炉内加热，使用微波炉加热时，煮沸后立即移出微波炉并不断搅拌，而后移入微波炉再加热，直至完全溶解（大气泡代替泡沫产生，大约需要2分钟）。 4.冷却至45-50℃，待用。 5.在添加剂A中加入1ml无菌水和在添加剂B中加入1ml95％乙醇，放置在37℃水浴加热10分钟，轻轻摇动待内容物全部溶解方可使用。然后以无菌手续分别加入到培养基中，轻轻混匀。（添加剂A和B各1ml，可用于1000ml培养基，可按比例放大或缩小，剩余的添加剂可以保存在－20℃冰箱中，有效期半年），然后把混匀的培养基倾入培养皿或试管。三、贮存 1.添加剂A和B，4℃保存，有效期一年。 2.干粉保存在15-30℃环境下。倾注好的培养基在室温可保存1天，4℃冰箱中可贮存两星期。四、结果划线接种（如果培养基刚从冰箱中取出，要恢复至室温后才能使用），37℃培养24小时。初筛微生物菌落颜色大肠杆菌O157 浅红色至淡紫色，中心灰褐色大肠菌群铁蓝色 ★建议通过乳胶试验验证可疑菌落。 CHROM agar公司中国区特约经销商：北京赛为思生物技术开发中心

第五章微生物的营养和培养基习题整理

第五章微生物的营养和培养基一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于：（） A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于：（） A．光能自养 B. 光能异养C．化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是：（） A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A，B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是：（） A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有：（） A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于（）型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：（） A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是：（） A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是：（） A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量，后者需要能量 C. 前者不需要载体，后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是：（） A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B，C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：（） A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为：（） A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的：（） A. 10% B. 30% C. 50% D.70%

科玛嘉念珠菌显色培养基使用说明

念珠菌显色培养基使用说明书此培养基用于分离和鉴定主要的念珠菌。【组分】蛋白胨：10.2g/L 琼脂：15g/L 色素：22g/L 氯霉素：0.5g/L pH :6.1±0.2 【操作】 1、取瓶内干粉，用1000ml蒸馏水或纯水溶解，可按47.7g/L的比例扩大或缩小。 2、将上述干粉缓慢倒入蒸馏水或纯水中，搅拌溶解。 3、将混合好的培养基加热至100℃，并按常规不断搅拌。如果用高压灭菌器，不加压，加热不超过100℃。混合物也可以在微波炉内加热，用此法加热，煮沸后，混合物立即移出微波炉并轻轻搅拌，而后再移入微波炉加热，直至琼脂等完全溶解（大量大气泡代替泡沫产生，大约需要2分钟）。 4、加热后的培养基水浴冷却至45℃，轻轻地摇动均匀，倾入已灭菌的带盖的培养皿中 (90mm的15ml/皿，70mm的10ml/ 皿)，使其凝固。此培养基在室温可保存一天或冰箱内贮存数天（避光，2-8℃）。 5、划线或涂布接种（冰箱内保存的应回复至室温），在25-30℃培养48小时。【结果】初筛念珠菌属菌落色彩白色念珠菌热带念珠菌克柔氏见丝酵母菌光滑念珠菌其他念珠菌绿色、翠绿色（直径约2mm）蓝灰色、铁蓝色（直径约1.5mm）粉红色（模糊有微毛菌落较大）（直径约4~5mm）紫色（直径约2mm）白色【参考文献】 1、Odds,F.C.and R.Bernacts.J.Clin.Microbiol.1994;32:1923 2、Beighton.D.et al.J.Clin.microbiol.1995;33:3025 3、Pfalier,M.A.et al.J.Clin.microbiol.1996;34:58 4、E T S Houangg.et al.J.Clin.Pathol,1997;50:563 CHROM agar公司中国区特约经销商：北京赛为思生物技术开发中心

真菌培养常用培养基

[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，SDA] （一）组成葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0～15.0g 蒸馏水1000ml （二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。（三）目的是常用的分离或保存菌种的培养基。 [沙氏液基，SDB] （一）组成葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 蒸馏水1000ml （二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic] （一）组成葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0～15.0g

蒸馏水1000ml （二）制法上述混合后加入200mg氯霉素。250mg放线菌酮，121摄氏度10分钟灭菌后备用。[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA] （一）组成葡萄糖20.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0～15.0g 蒸馏水1000ml （二）制法上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。（三）目的保存菌种培养基。 [马铃薯葡萄糖琼脂，PDA] （一）组成马铃薯200.0g 葡萄糖20.0g 琼脂12.0～15.0g 蒸馏水1000ml （二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml，煮沸30分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤

液补足到1000ml，121摄氏度灭菌后备用。（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。 [玉米吐温80琼脂，CMA with T w80] （一）组成玉米粉40.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000ml 吐温80 10ml （二）制法先将玉米粉混于水中，65摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10分钟灭菌后备用。（三）用途用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此培养基产色素较好。 [米饭培养基rice grain medium] (一)组成大米300.0g 蒸馏水1000ml （二）制法将3g大米放入试管中，加入10ml蒸馏水，高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。

鉴别培养基

麦康凯琼脂麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment created by fermenting lactose. Organisms that do not ferment lactose do not cause a color change. 配方g/l 蛋白胨 20.0 乳糖 10.0 胆盐 5.0 氯化钠 5.0 中性红 0.075 琼脂 12.0 pH 7.4±0. 配制取52克CM7，加1升蒸馏水，加热至溶解完全，121℃灭菌15分钟。待琼脂表面变干方可接种。特点 CM7符合世界卫生组织（WHO）推荐的培养基。工业用于检测水、乳制品和生物标本的大肠菌群和肠道致病菌，临床用于分离肠细菌。此培养基可抑制革兰氏阳性菌，可区分乳糖发酵性和非发酵性菌。还可以区分耶尔森菌和巴斯德氏菌，巴斯德氏菌不能生长。以下是各菌种在麦康凯琼脂经35℃培养24小时后的菌落外观：菌种形态菌落颜色、大肠杆菌红色、非黏液样有胆盐沉淀环产气杆菌粉红色、黏液样肠球菌红色、微小、圆形链球菌苍白粉红色、不透明绿脓杆菌棕绿色、荧光绿乳糖发酵性菌红色乳糖非发酵性菌无色沙门氏菌无色大菌落使用按常规操作，将尿液、粪便、污水等标本接种至麦康凯琼脂，分离单菌落，35℃培养18-24小时。其实该菌最重要的用途还不只是在肠道细菌的鉴别上，对于非发酵菌的鉴定中就有一项是麦康凯生长，主要是观察细菌对胆盐的耐受性的，在这里是作为一项生化反应试验而应用的。另外，在实际工作中巧妙的利用不同细菌在各种不同的培养基上的生长特性就可以快速的对细菌进行初步分群和鉴定：例如：痰标本，直接接种标本后的第二天，如果在血琼脂上形成针尖状透明小菌落，在巧克力培养基上形成无色到灰色半透明，光滑闪光菌落，在麦康凯上不生长，直接涂片均为G-细小杆菌，或者细丝状杆菌的就多半是嗜血杆菌；而如果在CSF标本，血琼脂上生长良好，含万古霉素巧克力不生长，麦康凯上不生长，直接涂片是杆菌，氧化酶阴性，触酶阳性，动力阳性，哪怕染出来看起来是“G-杆菌”，我也不会考虑G-，而会毫不犹豫的判断为G+杆菌，李斯特菌！

颜色反应

颜色反应测试 1.鉴定还原糖所用的试剂是，条件，现象。 2.鉴定脂肪所用的试剂，现象。 3.观察细胞中的线粒体用染色，唯一的。 4.观察细胞中DNA和RNA，先用处理改变细胞膜的通透性，用给DNA着色，用 RNA染色，染色后细胞中红色比绿色的区域要。 5.观察有丝分裂实验，给细胞核、染色体、染色质染色用用。 6.提取DNA用，原理是不同，浓度的鉴定DNA用试剂，条件是，现象。 7.鉴定蛋白质用试剂，颜色是显现。 8.鉴定分解尿素的微生物用，培养基的现象由变。 9.鉴定分解纤维素的微生物用，现象。 10.提取叶绿体色素用，原理，用纸层析法分离色素，用，原理。 11.检测亚硝酸盐的含量，在酸化条件下，亚硝酸盐与发生重氮化反应后，与N-1-奈基乙二胺盐酸盐结合形成（）色。12.鉴定大肠杆菌用培养基，现象是并带有金属光泽。颜色反应测试 1.鉴定还原糖所用的试剂是斐林试剂、班氏试剂、本尼迪特，条件沸水浴加热，现象砖红色沉淀。 2.鉴定脂肪所用的试剂苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ，现象橘黄色或红色。 3.观察细胞中的线粒体用健那绿染色，唯一的活体染色。 4.观察细胞中DNA和RNA，先用盐酸处理改变细胞膜的通透性，用甲基绿给DNA 着色，用吡罗红（派洛宁）RNA染色，染色后细胞中红色比绿色的区域要大。 5.观察有丝分裂实验，给细胞核、染色体、染色质染色用用碱性染料、醋酸洋红或龙胆紫。 6.提取DNA用2mol/L的Nacl溶液，原理是DNA在不同浓度Nacl溶液中溶解度不同，浓度的鉴定DNA用二苯胺试剂，条件是水浴加热，现象变蓝。 7.鉴定蛋白质用双缩脲试剂，颜色是显现紫色。 8.鉴定分解尿素的微生物用酚红试剂，培养基的现象由黄变红。 9.鉴定分解纤维素的微生物用刚果红，现象出现透明圈。 10.提取叶绿体色素用无水乙醇或丙酮，原理色素溶于有机溶剂，用纸层析法分离色素，用层析液，原理不同种类的色素对层析液的溶解度不同。 11.检测亚硝酸盐的含量，在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-奈基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红（紫红）色。 12.鉴定大肠杆菌用伊红美蓝培养基，现象是紫黑色并带有金属光泽。

真菌的分离及常用培养基

真菌的分离及常用培养基关键词：真菌抗生素念珠菌白假丝酵母菌北纳创联北京标准物质网医学真菌形态学观察是认识真菌的第一步，但仅通过光学显微镜对其进行观察并不能直接鉴定为真菌，需要对疑似相关病变部位的标本进行采集及分离，然后在合适的培养基进行培养。一、病变部位标本的采集分离通常采集疑似病变部位的皮肤附属物、分泌物、血液、痰液、脑脊液等体液，注意标本的新鲜度、无菌性、充足性，而且要对所采集标本进行正确消毒，杀死其中混有的杂菌。标本为脑脊液时，需进行离心，收集沉淀物进行培养，标本为血液时，需要先行增菌培养后再分离，这样可增加阳性率，未增菌培养的阴性结果并不能排除阳性结果。二、真菌培养常用的培养基目前商品化的真菌培养基多为干燥脱水的形式，可以按照配制说明书进行配制，值得注意的是，使用后的装培养基的瓶盖须拧严，防止受潮，以各下次使用。 1.沙保弱培养基及含抗生素的沙保弱培养基沙保弱培养基是培养真菌最常用的培养基，绝大多数的真菌均可以在其上生长，沙保弱培养基还可以添加抗生素，从而抑制多数细菌和污染真菌的生长速度。含抗生素的沙保弱培养基多用于皮肤癣菌和绝大多数致病真菌的分离和培养，但值得注意的是含有抗生素的培养基会抑制念珠菌属、隐球菌和少量丝状真菌的生长。 2.玉米粉（厚膜孢子）培养基多用于鉴别念珠菌属，培养基中的吐温可以促进白假丝酵母菌产生厚膜孢子，同时可以加入1％葡萄糖促进红色毛霉菌生长，并抑制须毛霉菌的生长。 3.土豆葡萄糖培养基土豆培养基中需将土豆切成小于1cm。的小块，常用于诱导真菌形成孢子或产生色素。 4.脑-心浸液琼脂培养基是一类营养丰富的真菌培养基，人工配制过程较为烦琐，一般通过商品化的培养基按照说明书进行配制。BHI多用于室温培养致病真菌，也可用于35～37℃培养致病真菌的酵母相。

显色培养基在微生物检测中的优势

微生物检测显色培养基在应用中的优势显色培养基介绍：随着微生物学检验技术的不断发展，近年来在新产品开发方面加大了投入，通过与科研单位的广泛合作，国际和国内研发出了显色培养基产品，显色干粉培养基是近年来发展起来的一种新型培养基。在传统培养基制作基础上，添加了新型组合式特异性发色酶底物，当细菌生长代谢过程中产生的特异性酶分解特异性发色底物后，目标菌形成不同颜色的菌落，从而对目标菌得到快速的分离和鉴别，同时也可以进行计数。该项技术是将现代化学合成技术、细菌代谢组学与目前尚不可替代的传统方法相结合应用于细菌检验领域的一项新技术。与传统培养基相比，显色培养基克服了传统培养基在各种细菌分离、鉴别、计数等操作过程中比较复杂（需要有经验的技术人员）、敏感性低和特异性差的缺点。显色培养基在检测细菌时，培养24小时通过观察菌落颜色即能用肉眼对细菌进行定性或定量分析，既缩短了检测时间，又免除了后续生化鉴定的过程，极大提高了工作效率。常用的几个显色培养基如下： 1、念珠菌显色培养基可替代传统的沙保罗培养基；肉眼观察菌落颜色即可鉴定白色、热带、克柔氏及光滑念珠菌；对确定混合感染更为有效；培养基的配置简单，煮沸即可，无须高压灭菌；操作简便，划线接种，37oC培养，36-48小时出结果；是临床上诊断常见念珠菌感染的最好帮手。 2、沙门氏显色培养基可替代传统的SS培养基；肉眼观察菌落颜色，能初步鉴定包括伤寒杆菌、副伤寒杆菌在内的沙门氏菌，具有很高的特异性，可摒弃大量假阳性，减少漏检；对确定混合感染更为有效；培养基的配置简单，煮沸即可，无须高压灭菌；操作简便，划线接种，37oC培养，24小时出结果；对暴发性沙门氏菌感染引起的食物中毒尤为适用。 3、金黄色葡萄球菌显色培养基可替代传统的高盐甘露醇及血平板培养基，具有较高的特异性、灵敏度，可消除假阴性及假阳性；肉眼观察菌落颜色即可用于金葡菌的初步鉴定，在此培养基中添加妥布霉素或甲氧西林等抗生素，可筛选耐甲氧西林金葡菌（MRSA）；培养

表格-鉴别反应

鉴别反应药物鉴别方法原理化学反应方程式备注巴比妥类金属离子反应 -CONHCONHCO-结构可以和Ag +、Cu 2+等金属离子形成有色沉淀或有色络合物巴比妥类+Ag +（过量）→白色沉淀↓ 未过量时，生成的一银盐巴比妥类+Cu 2+ →紫堇色/紫色沉淀↓ 巴比妥类+Co 2++碱性溶液（异丙胺） → 蓝紫色巴比妥类+Hg 2+ → 白色沉淀沉淀可溶于氨试液香草醛反应丙二酰脲基团中的活泼氢可以缩合巴比妥类+香草醛 → 红棕色缩合物硫酸的存在下苯巴比妥亚硝酸钠-硫酸反应苯环亚硝化显橙黄色→橙红色甲醛-硫酸反应苯环的芳烃显色原理呈玫瑰红色硝化反应苯环硝基化苯巴比妥+2KNO 3+H 2SO 4 → 黄色硝基化产物司可巴比妥钠碘、溴、高锰酸钾反应丙烯基可发生氧化还原反应褪色硫喷妥钠铅沉淀硫元素硫喷妥钠+Pb 2+ ??→?OH a N 白色↓?→? ? 黑色↓ 阿司匹林水解反应酯键水解阿司匹林+Na 2CO 3?→?? +H 2SO 4 → 水杨酸（白色↓） + 乙酸（酸气↑）沉淀在乙酸铵试液中溶解水解后三氯化铁反应阿司匹林+NaOH ?→?? +三氯化铁试液→紫堇色对氨基水杨酸钠三氯化铁反应酚羟基对氨基水杨酸钠+三氯化铁试液→紫堇色重氮化-偶合反应芳伯氨基 +亚硝酸钠?→ ?l HC 重氮盐+碱性β-萘酚→橙黄~猩红↓ 丙磺舒三氯化铁反应苯甲酸钠和铁离子配位丙磺舒→钠盐→三氯化铁试液→米黄色↓ 分解产物反应硫元素丙磺舒???→?熔融 OH a N 亚硫酸盐?→ ?]O [硫酸盐用硫酸盐反应鉴别氯贝丁酯异羟肟酸铁反应酯结构 +KOH+盐酸羟胺?→ ??异羟肟酸盐+盐酸??→?3 l C e F 紫色酮洛芬缩合反应酮基 +二硝基苯肼?→? ? 偶氮化合物（橙色↓）卡托普利酰化反应巯基 +亚硝酸 →亚硝酰硫醇酯（红色）盐酸普鲁卡因重氮化-偶合反应芳伯氨基 +亚硝酸钠?→ ?l HC 重氮盐+碱性β-萘酚→橙黄~猩红↓

培养基的主要成分及其作用

培养基的主要成分及其作用培养基是用人工方法配制而成，适合微生物生长繁殖需要的混合营养基质。适宜的培养基不仅用于细菌的分离、纯化、传代及菌种保存等，还可用于研究细菌的生理、生化特性。因此，掌握培养基的制备技术及其原理，是进行细菌学检验的重要环节和必不可少的手段。细菌的生长繁殖除需要一定的营养物质，如含氮化合物、糖类、盐类、类脂质及水外，有的还需加入特殊营养物质，如维生素的辅助生长因子或某些其他特殊因子；有的则需加入指示剂或抑制剂，以利于细菌的分离和鉴定。 1．营养物质营养物质提供细菌生长繁殖所需的能量、合成菌体的原料以及激活细菌酶的活性和调节渗透压等作用。细菌需要的营养物质主要有氮源、碳源、无机盐及生长因子。 (1)蛋白胨：是由动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而产生的中间产物，是培养基中最常用的成分之一，主要供给细菌氮源，合成菌体蛋白质、酶类等，另外还具有缓冲作用。由于蛋白质的来源和消化程度不同，因而制得的蛋白胨质量相差很大。按照生产原料的性质，蛋白胨可分为植物胨和动物胨两类。蛋白胨经喷雾干燥成粉末，吸水性较强，保存时应干燥密封，防止潮解结块。 (2)肉浸液：系用新鲜牛肉(去掉脂肪、肌膜及肌腱等)浸泡煮沸制成的肉汤。肉浸液中包括含氮和非含氮两类浸出物，还有一些生长因子。作为细菌生长所需要的氨源和碳源，由丁加热后大部分蛋白质凝固，仅留少部分氨基酸和其他含氮物质，不能满足细菌生长需要，故在制作培养基时，一般需加1％～2％蛋白胨和％的NaCl。 (3)牛肉膏：又称牛肉浸膏，是肉浸液加热浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。其中不耐热的物质如糖类已被破坏，故其营养价值不及肉浸液，但因无糖，可作为肠道细菌鉴别培养基的基础成分。 (4)糖(醇)类：含有细菌所需的碳源。制备培养基所应用的糖(醇)类很多，常用的糖类有单糖(如葡萄糖、阿拉伯糖等)、双糖(如乳糖、蔗糖等)、多糖(如菊糖、淀粉等)：醇类有甘露醇、卫矛醇及侧金盏花醇等。在培养基中加入糖(醇)类物质，除提供细菌作为碳源和能源外，主要利用细菌对糖(醇)类利用能力的差异鉴别细菌。 (5)血液：血液除能增加培养基中蛋白质、多种氨基酸、糖类及无机盐等营养成分外，尚能提供辅酶、血红素等特殊生长因子。此外，还可以观察细菌的溶血现象。