(精选)ABO血型正、反定型

ABO血型正、反定型操作规程

[ 目的]

保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。

[ 适用范围]

XXX 医院输血科

[ 职责]

具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。

[ 相关文件]

试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序紧急用血管理程序

[ 相关记录]

仪器设备的采购、使用和维护记录

仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录

试剂采购、使用记录标本交接和报废记录紧急用血记录

[ 实验原理]

ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B 凝集原与抗B 凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。

[ 仪器器械] 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。

[ 试剂]

抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、0型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。

[ 标本收集与处理]

1受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。

2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％

红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。

3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。

[ 实验方法与步骤]

1. ABO血型的正定型（试管法）：

⑴、取2支试管，分别标上抗A 和抗B ;

⑵、制备待测标本2~5%勺红细胞悬液（取1支试管，加入2ml 生理盐水，再加 入1滴

待测标本红细胞，混匀备用）；

⑶、在抗A 管中加入2滴抗A 标准血清，在抗B 管中加入2滴抗B 标准血清；

⑷、在抗A 和抗B 管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%£细胞悬液；

⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟，或室温静置1 小时，

再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内 眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强 度，此有助于A 、B 亚型、类B 或

cisAB 的发现。

⑺凝集强度判断标准

4十 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3十 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2十 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞

1十 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多

游离红细胞。

MF 混合凝集外观（mixed field ）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细

胞仍呈分散分布。

一 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

2. ABO 血型的反定型（试管法）：

⑴、取3支试管，分别标上A B 和0;

⑵、在3支试管中分别加入2滴待测标本的血清；

⑶、将ABO 标准红细胞轻轻地充分混匀后， 在A 管中加入1滴A 型标准红细胞， 在

B 管中加入1滴B 型标准红细胞，在O 管中加入1滴O 型标准红细胞；

⑷、混匀后，对称放入离心机中进行 1000r/min 离心1分钟（或3400 r/min 离 心15

秒）；

⑸、取出后，先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染） ，再轻

轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察；

⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度，此有助于 A 、B 亚型、类B 或cisAB 的发现。

ABO 血 型 A 型标准红细胞 B 型标准红细胞 O 型标准红细胞

A 型 一 + 一

B 型 + 一 一

O 型 + +

一 AB 型 一 一 一

ABO 血 型 抗A 标准血清 抗B 标准血清

A 型

+ 一 B 型

一 + O 型

一 一 AB 型

+ +

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⑺凝集强度判断标准（同ABC血型的试管法正定型）

［质量控制和注意事项］

1、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有

效期内使用。试剂开封后必须贴上注有开封日期和开封人的标签，使用后应及时置于

2~8C专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂开封后有效期为一周。

2、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，

且在有效期内使用；自制分型标准红细胞试剂必须以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1~3次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原，再制成2~5%勺

红细胞悬液备用。试剂开封或制备后必须贴上注有开封或制备日期和开封人或制备人的标签，使用后应及时置于2~8°C专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂开封或制备后有效期为一周。

3、生理盐水启用后，有效期为二周。

4、所有试剂在使用时，必须检查是否有浑浊、变色、凝集等变质现象；凡可疑

者，必须更换新的试剂进行检测。若分型标准血清使用时间较长后，最好用已知的ABO 标准红细胞检查结果是否与已知的血型相符；若分型标准红细胞使用时间较长后，最

好用已知的分型标准血清检查结果是否与已知的血型相符，以防标准血清或红细胞制

品污染、变质失效而造成鉴定错误。

5、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

6操作方法应按规定进行，一般应先加血清，后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

7、IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4C为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20~24C）内进行试验，37C可使反应减弱。

8、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。用试管法进行ABO血型的正定型时不能测出亚型（如A x），需延长作用时间。

9、在反定型试验中，如果受检者的血清或血浆与O型标准红细胞产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO S统以外其它系统的抗体干扰，此时需做其它相关试验加以解决上述定型问题。

10、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在使用标准血清进行正定型时往往被误定为AB型，遇到此种情况，需用37C生理盐水洗涤受检者的红细胞2~3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。

11、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。

12、对于可能存在不完全抗原的时候，应在各反应中加入凝聚胺试剂，以检验不完全抗原的存在。

13、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。

14、2~5%1细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红细胞悬液的配制。

［临床应用］

用于检验人的ABO血型归属

[ 血型鉴定的影响因素及解决方法]