大蒜根尖染色体观察实验.
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大蒜根尖染色体实验报告
实验目的与实验要求
1、 掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。
握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。
3、 通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞有丝分 裂过程的理解。
4、 对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区别，认识 微核和植物细胞分裂期的各形态特征。
图1前期
图2后期
图3末期
图4核崩解
图5微核
图6双核
部分，滴加1滴Schiff氏试剂染色10分钟，然后盖上盖玻片，吸干染液，并 用镊子钝的一端在盖玻片上轻轻敲击，将细胞打散。(8将制备好的根尖放在显微 镜下观察，统计微核数目、以及有丝分裂间
期、前期、中期、后期、末期细胞数目并计算有丝分裂指数以及微核率。每组 浓度细胞计数400个。
实验结果与数据处理
1、制片观察情况
•甘狀直仙列斤亦通檢中班：謂晞，圧眾廉训泄
衙謀点行覩，除巴屮戟弁幵，ff邮裤休哼£|下《问無腕腐慣
诰色巾E转空施茸壬色应：践腹丽违.核仁Байду номын сангаас休：
$•趙脸-细胞换一细yy堂
4、实验步骤
（1将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25°C恒温
培养箱中2~3天，催化大蒜生根。
(2选择根长0.5~1cm且不定根生长情况差不多的大蒜分为10组。(3在大蒜生
(5在早上有丝分裂旺盛的时候，将处理过的大蒜根尖剪下，分别放入青
霉素小瓶中，加入卡诺氏固定液固定3个小时，然后放入4C冰箱内保存，以
备使用。
(6取出部分经过固定的根尖先用酒精和清水洗涤，加入1mol/L HCL覆
盖根尖，放入60摄氏度水浴锅内水浴加热7~10分钟，取出用清水洗涤3次， 每次5分钟。
(7取出解离后的根尖，放在载玻片上，用刀片切下根尖乳白色的分生区
各步骤的作用：固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。解离 可以破坏细胞的胞间层（果胶），使细胞之间的联系变松散，有利于压片和染色。 漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度
破坏细胞结构或影响染色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。
有丝分裂
完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后 期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合称间期，细胞完成DNA的 复制以及有丝分裂的准备，而M期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形 态观察的方便，本实验采用后一种分法。如表一。
表一植物有丝分裂各时期特点
MW®
Ct貼
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S删
DHA复制.一咋醐A并予览帕1渤凹个DMA轩于遹过若逹点渥#工1凰・崎蚩山帧^<!冷H独2金蛆Miifr色业划.
占H地
沁扎甘舉H）州准省f^^戚汝啟附K'NA种ihflMi）
牡色网转变虛坡色也制9斛瞅瞅洞注：肋戢呃体
5、 体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实验 知识的能力和撰写实验报告水平。
实验方案
1、 实验仪器
显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤 纸等2、 实验药品
新鲜、健康的洋葱鳞茎一个；0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染液、 卡诺氏固定液，碱性品红、乙酸，乙醇等。3、 实验原理(1洋葱的根尖
洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处 于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽
量剔除来保证观察效果。(2多倍体的诱导
多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝 分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两 级，于是染色体数目加倍。
根之后，先选取一些根尖放进卡诺式固定液中固定3个小时，
用Schiff氏试剂染色，镜检，观察染色体是否能染上色以及染色效果。若染色 效果不行，则重新配制Schiff氏试剂，直至染色效果良好，然后将其贮存于4°C冰
箱中准备使用。
(4将分好组的大蒜分别用清水、50mg/L Gr6+、100mg/L Gr6+、150mg/L
Gr6+、30mg/L1,2,4-三氯苯、40mg/L1,2,4-三氯苯、50mg/L1,2,4-三氯苯、浓度分别为50mg/L Gr6+和30mg/L1,2,4-三氯苯的混合液、100mg/L Gr6+和40mg/L1,2,4-三氯苯的混合液、150mg/L Gr6+和50mg/L1,2,4-三氯苯的混合液培养24小时。清水组为对照组。
实验目的与实验要求
1、 掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。
握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。
3、 通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞有丝分 裂过程的理解。
4、 对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区别，认识 微核和植物细胞分裂期的各形态特征。
图1前期
图2后期
图3末期
图4核崩解
图5微核
图6双核
部分，滴加1滴Schiff氏试剂染色10分钟，然后盖上盖玻片，吸干染液，并 用镊子钝的一端在盖玻片上轻轻敲击，将细胞打散。(8将制备好的根尖放在显微 镜下观察，统计微核数目、以及有丝分裂间
期、前期、中期、后期、末期细胞数目并计算有丝分裂指数以及微核率。每组 浓度细胞计数400个。
实验结果与数据处理
1、制片观察情况
•甘狀直仙列斤亦通檢中班：謂晞，圧眾廉训泄
衙謀点行覩，除巴屮戟弁幵，ff邮裤休哼£|下《问無腕腐慣
诰色巾E转空施茸壬色应：践腹丽违.核仁Байду номын сангаас休：
$•趙脸-细胞换一细yy堂
4、实验步骤
（1将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25°C恒温
培养箱中2~3天，催化大蒜生根。
(2选择根长0.5~1cm且不定根生长情况差不多的大蒜分为10组。(3在大蒜生
(5在早上有丝分裂旺盛的时候，将处理过的大蒜根尖剪下，分别放入青
霉素小瓶中，加入卡诺氏固定液固定3个小时，然后放入4C冰箱内保存，以
备使用。
(6取出部分经过固定的根尖先用酒精和清水洗涤，加入1mol/L HCL覆
盖根尖，放入60摄氏度水浴锅内水浴加热7~10分钟，取出用清水洗涤3次， 每次5分钟。
(7取出解离后的根尖，放在载玻片上，用刀片切下根尖乳白色的分生区
各步骤的作用：固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。解离 可以破坏细胞的胞间层（果胶），使细胞之间的联系变松散，有利于压片和染色。 漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度
破坏细胞结构或影响染色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。
有丝分裂
完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后 期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合称间期，细胞完成DNA的 复制以及有丝分裂的准备，而M期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形 态观察的方便，本实验采用后一种分法。如表一。
表一植物有丝分裂各时期特点
MW®
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转-址k眦FF]ma棚汗匪龙旺的第白喷，ND NA址制化"£各
S删
DHA复制.一咋醐A并予览帕1渤凹个DMA轩于遹过若逹点渥#工1凰・崎蚩山帧^<!冷H独2金蛆Miifr色业划.
占H地
沁扎甘舉H）州准省f^^戚汝啟附K'NA种ihflMi）
牡色网转变虛坡色也制9斛瞅瞅洞注：肋戢呃体
5、 体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实验 知识的能力和撰写实验报告水平。
实验方案
1、 实验仪器
显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤 纸等2、 实验药品
新鲜、健康的洋葱鳞茎一个；0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染液、 卡诺氏固定液，碱性品红、乙酸，乙醇等。3、 实验原理(1洋葱的根尖
洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处 于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽
量剔除来保证观察效果。(2多倍体的诱导
多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝 分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两 级，于是染色体数目加倍。
根之后，先选取一些根尖放进卡诺式固定液中固定3个小时，
用Schiff氏试剂染色，镜检，观察染色体是否能染上色以及染色效果。若染色 效果不行，则重新配制Schiff氏试剂，直至染色效果良好，然后将其贮存于4°C冰
箱中准备使用。
(4将分好组的大蒜分别用清水、50mg/L Gr6+、100mg/L Gr6+、150mg/L
Gr6+、30mg/L1,2,4-三氯苯、40mg/L1,2,4-三氯苯、50mg/L1,2,4-三氯苯、浓度分别为50mg/L Gr6+和30mg/L1,2,4-三氯苯的混合液、100mg/L Gr6+和40mg/L1,2,4-三氯苯的混合液、150mg/L Gr6+和50mg/L1,2,4-三氯苯的混合液培养24小时。清水组为对照组。