Coombs试验演示文稿
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抗人球蛋白试验
（ Coombs试验 ）
.
1
• Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为第二抗 体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体， 使红细胞凝集。
• 抗人球法是检测不完全抗体的经典方法，其方 法有两类。
• 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上有无 不完全抗体。
• 间接CoBiblioteka Baidumbs试验：是检查血清中游离的不完 全抗体
• 在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不完 全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
• 再加抗人球蛋白试剂，与红细胞上不完全抗体结合， 出现肉眼可见凝集。
• 这种通过体外将红细胞致敏后，再检测红细胞有无 不完全抗体或抗原的试验称为间接抗人球蛋白试验。
.
20
同种异型抗体
抗人免疫球蛋白
间接Coombs试验
• 因为RBC的密度远大于血清中的球蛋白，当 离心时，RBC的沉降速率远大于球蛋白，故 RBC首先和凝胶中的抗人球蛋白反应，而不
受 血清中的球蛋白干扰，从而可免除洗涤这一 步骤。
.
16
结果判断
• 先观察阴性和阳性对照管，阴性对照管无 凝集，阳性对照管出现+++—++++凝集， 说明检测管结果可信。
.
免疫血型抗体
不完全抗体 IgG
经抗原刺激后才产生 晚期 15万 250 7S
IgG球蛋白 大 能
37℃（温抗体） 不被中和
3
IgM抗体
• 免疫球蛋白中8%-10%是由IgM组成 • IgM抗体分子量大，约为90万，有十个
抗原结合位点，可直接致敏和凝集红细胞，
• 它的平均寿命为10天， • IgM抗原抗体反应中常激活补体，从而引
• 被检测管凝集，直接抗球蛋白试验阳性， 不凝集者为阴性。如果实验结果为阴性，
要加阳性细胞检测，结果为阳性，说明该 阴性结果可靠。
.
17
柱凝集判断标准
.
18
间接Coombs试验 （IAT）
.
19
原理
• 用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不完 全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上相应 的抗原。
.
21
手工法操作
• 取被检血清200ul 于试管中，加入等量5%已知抗 原红悬液（或被检5%红悬液加入等量已知抗体血 清），置37 ℃水浴1小时。如血清与红细胞存在相 应特异性抗原抗体，则会使红细胞致敏。
• 取出试管，用生理盐水洗涤后，参照直接Coombs 试验方法操作。
• 实验结果为阳性，说明受检者血清中有与已知红细 胞抗原相对应的不完全抗体（或被检者红细胞上有 与已知抗体相对应的抗原
次；尽可能弃净上清液；
4、 在阳、阴性试管中分别加入阳性和阴性对照红悬液 1滴；
5、 在各管中滴加多特异性抗球蛋白试剂1滴，混匀； 6、 同时以1000r/min离心1分钟，轻轻摇动，先用肉
眼观察管底红细胞的凝集，再用低倍镜观察
.
13
柱凝集卡式法操作
1、取出柱凝集Coombs卡、室温平衡并做好 标记（患者、阳性、阴性）。
.
2
天然抗体与免疫血型抗体比较
性质 Ig 抗原刺激 免疫发生的时间 分子量 分子长度 沉淀系数 电泳分析 对HDN的意义＊ 通过胎盘能力＊ 反应温度＊ 对血型物质＊
天然抗体
完全抗体 IgM
没有可察觉的抗原刺激 早期 90万 950 19S
IgM球蛋白 小 不能
4℃比37℃强（冷抗体） 能被血型物质中和
4、阴性对照细胞（取3份正常人O型红细胞等量混匀，经生 理盐水洗涤后，配成5%红细胞悬液；或直接取Rh（D）阴 性红细胞）；
5、受检者5%（1%）红细胞悬液；
6、0.9%生理盐水；
7、柱凝集卡式配血系统
8、滴管（加样枪）、蜡笔或记号笔、试管、显微镜、37℃ 水浴箱、细胞洗涤离心机等。
.
9
直接抗球蛋白试验 （DAT）
.
22
柱凝集卡式法操作
1、取出柱凝集Coombs卡、室温平衡并做好 标记（患者、阳性、阴性）。
2、在患者孔中加入被检血清和1%已知抗原 红悬液各50ul（或加入已知抗体血清和1% 待检抗原红悬液各50ul）
3、在阳性、阴性孔中加入相应1%红悬液 50ul
4、同时放入专用孵育器孵育
5、取出用专用离心机离心。
2、分别加入1%被检红悬、阳性红悬、阴性 红悬各50 ul。
3、不孵育，将卡放入专用离心机离心。 4、取出凝集Coombs卡，观察试验结果。
.
14
DAT操作表
反应物
检测管
被检红细胞悬液 1滴 阳性红细胞悬液
阴性红细胞悬液 抗人球蛋白试剂 1滴
阳性对照 阴性对照
1滴
1滴
1滴
1滴
.
15
微柱卡Coombs试验RBC可免洗涤
.
11
致敏RBC
可见凝集
抗人球蛋白
自身抗体
直接Coombs试验
.
12
手工法操作
1、 取患者抗凝全血适量于试管中，加生理盐水洗涤3 次，最后一次洗涤离心后，弃上清液，用生理盐水配 成5%红细胞悬液；
2、 取3支试管，作好标记（患者、阳性、阴性）； 3、 取患者5%红悬液1滴于试管中，加生理盐水洗涤一
6、实验结果同手工法
.
23
Coombs’试验临床意义
• 正常人Coombs试验直接与间接试验均为阴性
• 本试验是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要 依据，特别是IgG型引起的溶血性贫血，直接反应 常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性
起溶血反应。
.
4
IgM抗体在盐水介质中凝集红细胞示意图
.
5
IgG抗体
• IgG是体液免疫应答产生的主要抗体，在血 清中含量最高。约占免疫球蛋白的75%。
• IgG是唯一的能通过胎盘进入胎儿体内的免 疫球蛋白，同种IgG血型抗体通过胎盘，可 引起新生儿溶血病。
• 最常见的是ABO与Rh血型系统。
.
.
10
原理
• 患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗体 存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物。
• 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗原 抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。
• 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全抗 体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼可见 的凝集。
• 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红细 胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
6
IgG凝集红细胞示意图
IgG 在盐水介质中一般不产生凝集
.
7
抗球蛋白试验
抗球蛋白
.
8
试剂及器材
1、多特异性抗球蛋白试剂（lgG、C3d）；
2、柱凝集抗人球卡；
3、阳性对照细胞（取3份正常人O型Rh（D）阳性红细胞等 量混匀，经生理盐水洗涤后取少量压积红细胞，加抗D血 清，置37℃水浴致敏1小时，取出后用生理盐水洗涤3次， 配成5%红细胞悬液）；
（ Coombs试验 ）
.
1
• Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为第二抗 体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体， 使红细胞凝集。
• 抗人球法是检测不完全抗体的经典方法，其方 法有两类。
• 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上有无 不完全抗体。
• 间接CoBiblioteka Baidumbs试验：是检查血清中游离的不完 全抗体
• 在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不完 全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
• 再加抗人球蛋白试剂，与红细胞上不完全抗体结合， 出现肉眼可见凝集。
• 这种通过体外将红细胞致敏后，再检测红细胞有无 不完全抗体或抗原的试验称为间接抗人球蛋白试验。
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20
同种异型抗体
抗人免疫球蛋白
间接Coombs试验
• 因为RBC的密度远大于血清中的球蛋白，当 离心时，RBC的沉降速率远大于球蛋白，故 RBC首先和凝胶中的抗人球蛋白反应，而不
受 血清中的球蛋白干扰，从而可免除洗涤这一 步骤。
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结果判断
• 先观察阴性和阳性对照管，阴性对照管无 凝集，阳性对照管出现+++—++++凝集， 说明检测管结果可信。
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免疫血型抗体
不完全抗体 IgG
经抗原刺激后才产生 晚期 15万 250 7S
IgG球蛋白 大 能
37℃（温抗体） 不被中和
3
IgM抗体
• 免疫球蛋白中8%-10%是由IgM组成 • IgM抗体分子量大，约为90万，有十个
抗原结合位点，可直接致敏和凝集红细胞，
• 它的平均寿命为10天， • IgM抗原抗体反应中常激活补体，从而引
• 被检测管凝集，直接抗球蛋白试验阳性， 不凝集者为阴性。如果实验结果为阴性，
要加阳性细胞检测，结果为阳性，说明该 阴性结果可靠。
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17
柱凝集判断标准
.
18
间接Coombs试验 （IAT）
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19
原理
• 用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不完 全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上相应 的抗原。
.
21
手工法操作
• 取被检血清200ul 于试管中，加入等量5%已知抗 原红悬液（或被检5%红悬液加入等量已知抗体血 清），置37 ℃水浴1小时。如血清与红细胞存在相 应特异性抗原抗体，则会使红细胞致敏。
• 取出试管，用生理盐水洗涤后，参照直接Coombs 试验方法操作。
• 实验结果为阳性，说明受检者血清中有与已知红细 胞抗原相对应的不完全抗体（或被检者红细胞上有 与已知抗体相对应的抗原
次；尽可能弃净上清液；
4、 在阳、阴性试管中分别加入阳性和阴性对照红悬液 1滴；
5、 在各管中滴加多特异性抗球蛋白试剂1滴，混匀； 6、 同时以1000r/min离心1分钟，轻轻摇动，先用肉
眼观察管底红细胞的凝集，再用低倍镜观察
.
13
柱凝集卡式法操作
1、取出柱凝集Coombs卡、室温平衡并做好 标记（患者、阳性、阴性）。
.
2
天然抗体与免疫血型抗体比较
性质 Ig 抗原刺激 免疫发生的时间 分子量 分子长度 沉淀系数 电泳分析 对HDN的意义＊ 通过胎盘能力＊ 反应温度＊ 对血型物质＊
天然抗体
完全抗体 IgM
没有可察觉的抗原刺激 早期 90万 950 19S
IgM球蛋白 小 不能
4℃比37℃强（冷抗体） 能被血型物质中和
4、阴性对照细胞（取3份正常人O型红细胞等量混匀，经生 理盐水洗涤后，配成5%红细胞悬液；或直接取Rh（D）阴 性红细胞）；
5、受检者5%（1%）红细胞悬液；
6、0.9%生理盐水；
7、柱凝集卡式配血系统
8、滴管（加样枪）、蜡笔或记号笔、试管、显微镜、37℃ 水浴箱、细胞洗涤离心机等。
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9
直接抗球蛋白试验 （DAT）
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22
柱凝集卡式法操作
1、取出柱凝集Coombs卡、室温平衡并做好 标记（患者、阳性、阴性）。
2、在患者孔中加入被检血清和1%已知抗原 红悬液各50ul（或加入已知抗体血清和1% 待检抗原红悬液各50ul）
3、在阳性、阴性孔中加入相应1%红悬液 50ul
4、同时放入专用孵育器孵育
5、取出用专用离心机离心。
2、分别加入1%被检红悬、阳性红悬、阴性 红悬各50 ul。
3、不孵育，将卡放入专用离心机离心。 4、取出凝集Coombs卡，观察试验结果。
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14
DAT操作表
反应物
检测管
被检红细胞悬液 1滴 阳性红细胞悬液
阴性红细胞悬液 抗人球蛋白试剂 1滴
阳性对照 阴性对照
1滴
1滴
1滴
1滴
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微柱卡Coombs试验RBC可免洗涤
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11
致敏RBC
可见凝集
抗人球蛋白
自身抗体
直接Coombs试验
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12
手工法操作
1、 取患者抗凝全血适量于试管中，加生理盐水洗涤3 次，最后一次洗涤离心后，弃上清液，用生理盐水配 成5%红细胞悬液；
2、 取3支试管，作好标记（患者、阳性、阴性）； 3、 取患者5%红悬液1滴于试管中，加生理盐水洗涤一
6、实验结果同手工法
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23
Coombs’试验临床意义
• 正常人Coombs试验直接与间接试验均为阴性
• 本试验是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要 依据，特别是IgG型引起的溶血性贫血，直接反应 常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性
起溶血反应。
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4
IgM抗体在盐水介质中凝集红细胞示意图
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5
IgG抗体
• IgG是体液免疫应答产生的主要抗体，在血 清中含量最高。约占免疫球蛋白的75%。
• IgG是唯一的能通过胎盘进入胎儿体内的免 疫球蛋白，同种IgG血型抗体通过胎盘，可 引起新生儿溶血病。
• 最常见的是ABO与Rh血型系统。
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10
原理
• 患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗体 存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物。
• 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗原 抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。
• 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全抗 体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼可见 的凝集。
• 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红细 胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
6
IgG凝集红细胞示意图
IgG 在盐水介质中一般不产生凝集
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抗球蛋白试验
抗球蛋白
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8
试剂及器材
1、多特异性抗球蛋白试剂（lgG、C3d）；
2、柱凝集抗人球卡；
3、阳性对照细胞（取3份正常人O型Rh（D）阳性红细胞等 量混匀，经生理盐水洗涤后取少量压积红细胞，加抗D血 清，置37℃水浴致敏1小时，取出后用生理盐水洗涤3次， 配成5%红细胞悬液）；