极性C18亲水作用色谱强极性化合物分离专题

强极性小分子分析解决方案
中性或酸性极 性小分子化合物
XAqua 系列 ★解决
碱性极性小 分子化合物
质谱不兼容
XAqua 系列
0.5
一般解 0.4
流动相中加入 决办法 0.3
Au
离子对试剂
0.2
0.1
0.0 0
拖尾
5
10
15
20
Retention Time/min
强极性小分子分析解决方案
碱性化合物拖尾的原因，残余硅醇基与碱性化合物作用造成拖尾
分离度差 XAqua C18 乙腈甲酸水 主峰纯度
96.55%
保留适中分 离度良好 S-Click XIon
乙腈甲酸水 主峰纯度
84.91%
强极性小分子分析解决方案
样品3
样品为某 CRO公司 提供合成中 间体小分子 化合物
分离度差
XAqua C18 100%甲酸水 主峰纯度 96.55%
保留适中 分离度良
强极性小分子分析解决方案
样品1
拖尾
XAqua C18 100%甲酸水
样品为某 CRO公司 提供合成中 间体小分子 化合物
不保留 XCharge C18 100%甲酸水
保留好， 分离好
S-Click XIon 乙腈甲酸铵体系
Fra Baidu bibliotek放大图
强极性小分子分析解决方案
样品2
样品为某 CRO公司 提供合成中 间体小分子 化合物
乙腈
等度：A/B = 30:70
流速：1.0 mL/min
柱温：35 oC
强极性小分子分析解决方案
未知极性小 分子化合物
拖 尾
XAqua C18 XCharge C18
不 保 留
XAmide
拖 尾
S-Click XIon
方案特点
反相模式
亲水模式
1.该方案基本适用于所有极性小分子化合物，普试性好。 2.该方案所有流动相都可应用于质谱，质谱兼容性好。 3.采用两种模式，增加了样品的选择性。
强极性小分子分析解决方案
增加保留 与反相不同保留机理正交性 更好的溶解度和质谱兼容性
强极性小分子分析解决方案
甘露醇
LSU
15.168 16.850
100.00
山梨醇
80.00
60.00
40.00
20.00
色谱柱：XAmino，250 mm ×4.6 mm，
5 mm
流动相：A:乙腈
B：水
等度：A/B = 85:15
好
AU
保留弱
1.00
分离度差
0.80
0.60
0.40
XCharge C18 100%甲酸水 主峰纯度
96.55%
0.20
0.00
5.00
10.00
15.00 分钟
20.00
25.00
30.00
专题讲座
亲水作用色谱与中药中强极性化合 物的分离
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主要内容
亲水作用色谱保留机理及特点 亲水作用色谱影响因素及应用 中药中强极性化合物的分离
部分化合物在 纯水条件下反 相模式解决
问题：疏水塌陷
在反相上无保 留，正相不溶
解，难点
问题：不保留，不溶解
强极性小分子分析解决方案
C18 甲醇中
C18 水中
强极性小分子分析解决方案
避免疏水塌陷的几个策略
选用亲水性和极性很强的封尾试剂封尾 对烷基链固定相进行极性基团嵌入的改造
选用短链烷基键合相且不对硅醇基封尾 选用链长更长的烷基固定相 选用大孔硅胶
针对碱性化合物，研发出专用碱性化合物的分离分析的色谱柱 XCharge 系列
设计理念：合理控制电荷密度， 形成恰当的电荷屏蔽层，消除硅 醇基的拖尾影响，实现载样量的 提升。
强极性小分子分析解决方案
羟氨苄青霉素
色谱条件： 色谱柱：XCharge C18； 流动相：A 0.1%甲酸水，B0.1%甲酸甲醇； 梯度：0~20 min，5%B~95%B
强极性小分子分析难点
1.我的样品是两性极性小分子化合物，反相柱不保留，怎样选择合适 的色谱柱分析。 关键词：不保留 2.我的样品分析条件比较特殊，必须要进行质谱检测，要选择可以进 质谱的分析条件。 关键词：质谱兼容
强极性小分子分析难点
一般极性化合物
中强极性化合物
强极性化合物
普通反相模式 C18/C8可解决
极性包埋
极性封尾
强极性小分子分析解决方案
停流实验
强极性小分子分析解决方案
➢ 原儿茶醛
色谱条件： 色谱柱：XAqua C18(150 × 4.6 mm， 5mm) 流动相：乙腈：1%醋酸水溶液=5:95； 柱温：30°C; 流速:1.0 mL/min;
强极性小分子分析解决方案
小分子酸
色谱条件： 色谱柱：XAqua C18； 流动相：100%（0.1%三氟乙酸水）
强极性小分子分析解决方案
利用极性共聚技术研发出耐水的XAqua 系列色谱柱
➢一步法反应 ➢较好保持了烷基链的疏水性
➢可调的极性基团种类和数量 ➢增加了材料的稳定性
破坏了烷基 链的疏水性
两步反应，极性 基团数量不可控
Polar-copolymerized 极性共聚
Polar-embeded Polar-endcapped
研究方向
反相色谱
亲水作用色谱机理及特点
强极性化合物的分离
亲水作用色谱 HILIC
正相色谱
溶解度 与质谱联用
A.J. Alpert, J. Chromatogr., 499 (1990) 177.
亲水作用色谱
亲水作用色谱法的分离原理与正相色谱法相近的极性固定 相、以高比例极性有机溶剂和低比例水的混合溶液为流动相， 主要用于极性化合物的分离。被分析物质在色谱柱中的保留和 其自身的极性成正比，和流动相的极性成反比。被分析物质的 极性越强，在色谱柱中保留越强。增加流动相中水的比例，使 流动相极性增强，则分析物保留减弱。
流速：1.0 mL/min
柱温：35 oC
选择性：1.12 分离度：3.08
0.00
0.00
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
16.00
18.00
20.00
22.00
分钟
强极性小分子分析解决方案
左旋肉碱
色谱柱：XAmide，250 mm ×
4.6 mm，5 mm
流动相：A: 磷酸盐缓冲液 B：
磺胺类碱 性小分子
强极性小分子分析解决方案
色谱条件： 色谱柱：XCharge C18； 流动相：A 0.1%甲酸水， B乙腈； 梯度：0~30 min， 5%B~95%B
强极性小分子分析解决方案
超强极性怎么办，反 相纯水条件下不保留
XAqua C18 流动相：100%水
HILIC 模式
XAmide 流动相：85%乙腈水
亲水色谱固定相
( 1) 传统的正相色谱固定相，包括纯硅胶固定相、氨基键合相 、二醇基键合相、氰基固定相。该类固定相对糖、有机酸、 核苷等强极性化合物表现出良好的分离选择性;