【医学超级全之病生机能实验】实验七、DIC
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实验七
弥散性血管内凝血
一、目的
1. 学习DIC动物模型复制方法； 2. 学习血液学指标（PT、KPTT）的测定； 了解急性DIC的诊断标准和实验室检查方法
3. 讨论DIC的发病机制；锻炼动手操作能力
二、器材、药品
手术器械、托盘天平、离心机、水浴箱、试管、移液枪、秒表
1.5%戊巴比妥钠、4%兔脑粉、P试液、K试液、3.8%枸橼酸钠
0.025mol/L CaCl2溶液
三、方法、步骤
1. 称重→麻醉（1.5%戊巴比妥钠，2 mL/kg）→分离颈总动 活结 脉→插入插管→取血于抗凝管中至 4 mL，混匀。血1
A
远心端 近心端 2. 头皮针扎入耳缘静脉，注射4%兔脑粉稀释液30 mL， ①
注射方式与速度为：
② ③
1 mL/min × 5 min 2 mL/min × 5 min 3 mL/min × 5 min
血清：血液凝固之后的淡黄色液体。
6. KPTT测定：
取0.2mL血浆，加K试剂0.2mL 区别：血浆存在凝血因子，而血清没有。 观察方法同上，记录凝血时间。
37℃ 水浴2 血浆：血液抗凝后，除去血细胞后的淡黄色液体。min
加入CaCl2 0.2 mL，
四、实验结果
表一
组别 注射前 注射后 注射后30min
（2）白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）测定原理：
0.2 mL血浆，加K试剂0.2 mL (水浴2min)，加CaCl2 0.2 mL。 （K试液：白陶土+磷脂，其中白陶土可以硅藻土、鞣花酸代替）
KPTT是内在凝血途径的筛选试验。除因子Ⅶ和XIII外，任何一个凝血因子缺乏 都可使KPTT延长。正常35~45 秒，超过正常对照10秒以上有意义。DIC的高凝期 KPTT缩短，在消耗性低凝血期KPTT延长。
7. 插管及其他器械均要洗净、擦干、回收，家兔处死。
8. 三根插管、动脉夹、眼科镊放入小塑料杯中。
（1）凝血酶原时间（prothrombin time，PT）测定原理： 0.1 mL血浆(水浴1 min)，加 P试剂0.2 mL，开始计时。 （P试液：兔脑粉+Ca2+）
PT是外在凝血途径的筛选试验。DIC时因因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ等均减少，故 PT延长。正常12秒，超过正常对照3秒或呈动态变化以上有意义。它反映肝脏合成 功能、储备功能、病变严重程度及预后的一个非常重要的指标。
注射结束后，立即取血至4 mL ，混匀。
Байду номын сангаас
血2
3. 间隔30 min后，再次取血至4 mL ，混匀。ml 4 血3 4. 取血样本平衡后，以 2500 rpm离心10 0.4 ml 3.8%枸橼酸钠 min，取上清液
①
① ①
测定PT、KPTT。 1
组别
管号
2
3
5. PT测定：
37℃ 水浴1 min
取0.1mL血浆 加入P试剂0.2mL ，开始计时， 侧动试管，直至液体停止流动（呈胶冻状）或出现白色粗颗粒 时，即为凝固终点→计时停止，记录凝血时间。
静脉注射兔脑粉对家兔血液学指标的影响
PT (S) 第4组 第2组 第3组 KPTT(S) 第6组 第1组 第5组
五、分析讨论
1、在家兔实验性DIC实验中，影响实验成败的最重要因素是什么？
2、家兔实验性DIC的致病原因是什么？ 3、PT、KPTT测定的原理是什么？
4、在实验性DIC实验中，PT和KPTT明显延长的原因是什么？
六、注意事项
1. 戊巴比妥钠毒性大，勿麻醉过量； 2. 动脉插管固定线，打活结，以便解开； 3. 放血速度中等，不宜过快或过慢；量要把握好，不宜过多或过少； 4. 取血后，立即以大拇指堵住管口，颠倒混匀6-7次； 5. 每次取血后，立即更换插管，并及时清洗换下的插管； 6. 抗凝管每次取一支，用到哪支取哪支，禁止全部拿到实验台；
弥散性血管内凝血
一、目的
1. 学习DIC动物模型复制方法； 2. 学习血液学指标（PT、KPTT）的测定； 了解急性DIC的诊断标准和实验室检查方法
3. 讨论DIC的发病机制；锻炼动手操作能力
二、器材、药品
手术器械、托盘天平、离心机、水浴箱、试管、移液枪、秒表
1.5%戊巴比妥钠、4%兔脑粉、P试液、K试液、3.8%枸橼酸钠
0.025mol/L CaCl2溶液
三、方法、步骤
1. 称重→麻醉（1.5%戊巴比妥钠，2 mL/kg）→分离颈总动 活结 脉→插入插管→取血于抗凝管中至 4 mL，混匀。血1
A
远心端 近心端 2. 头皮针扎入耳缘静脉，注射4%兔脑粉稀释液30 mL， ①
注射方式与速度为：
② ③
1 mL/min × 5 min 2 mL/min × 5 min 3 mL/min × 5 min
血清：血液凝固之后的淡黄色液体。
6. KPTT测定：
取0.2mL血浆，加K试剂0.2mL 区别：血浆存在凝血因子，而血清没有。 观察方法同上，记录凝血时间。
37℃ 水浴2 血浆：血液抗凝后，除去血细胞后的淡黄色液体。min
加入CaCl2 0.2 mL，
四、实验结果
表一
组别 注射前 注射后 注射后30min
（2）白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）测定原理：
0.2 mL血浆，加K试剂0.2 mL (水浴2min)，加CaCl2 0.2 mL。 （K试液：白陶土+磷脂，其中白陶土可以硅藻土、鞣花酸代替）
KPTT是内在凝血途径的筛选试验。除因子Ⅶ和XIII外，任何一个凝血因子缺乏 都可使KPTT延长。正常35~45 秒，超过正常对照10秒以上有意义。DIC的高凝期 KPTT缩短，在消耗性低凝血期KPTT延长。
7. 插管及其他器械均要洗净、擦干、回收，家兔处死。
8. 三根插管、动脉夹、眼科镊放入小塑料杯中。
（1）凝血酶原时间（prothrombin time，PT）测定原理： 0.1 mL血浆(水浴1 min)，加 P试剂0.2 mL，开始计时。 （P试液：兔脑粉+Ca2+）
PT是外在凝血途径的筛选试验。DIC时因因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ等均减少，故 PT延长。正常12秒，超过正常对照3秒或呈动态变化以上有意义。它反映肝脏合成 功能、储备功能、病变严重程度及预后的一个非常重要的指标。
注射结束后，立即取血至4 mL ，混匀。
Байду номын сангаас
血2
3. 间隔30 min后，再次取血至4 mL ，混匀。ml 4 血3 4. 取血样本平衡后，以 2500 rpm离心10 0.4 ml 3.8%枸橼酸钠 min，取上清液
①
① ①
测定PT、KPTT。 1
组别
管号
2
3
5. PT测定：
37℃ 水浴1 min
取0.1mL血浆 加入P试剂0.2mL ，开始计时， 侧动试管，直至液体停止流动（呈胶冻状）或出现白色粗颗粒 时，即为凝固终点→计时停止，记录凝血时间。
静脉注射兔脑粉对家兔血液学指标的影响
PT (S) 第4组 第2组 第3组 KPTT(S) 第6组 第1组 第5组
五、分析讨论
1、在家兔实验性DIC实验中，影响实验成败的最重要因素是什么？
2、家兔实验性DIC的致病原因是什么？ 3、PT、KPTT测定的原理是什么？
4、在实验性DIC实验中，PT和KPTT明显延长的原因是什么？
六、注意事项
1. 戊巴比妥钠毒性大，勿麻醉过量； 2. 动脉插管固定线，打活结，以便解开； 3. 放血速度中等，不宜过快或过慢；量要把握好，不宜过多或过少； 4. 取血后，立即以大拇指堵住管口，颠倒混匀6-7次； 5. 每次取血后，立即更换插管，并及时清洗换下的插管； 6. 抗凝管每次取一支，用到哪支取哪支，禁止全部拿到实验台；