呼吸道病毒及检验

粘病毒（Orthomyxovirus）
是指对人或某些动物红细胞表面的粘 蛋白有亲和性的病毒。
正、副粘病毒的分别以其核酸是否分 节段为标准，分节段者为正粘病毒，不分 节段者为副粘病毒。
第一节 流行性感冒病毒
1918年
西班牙流感
6级
甲型H1N1流感 2009.4~5月全球发病人数：>2万人 截止2009.12，死亡人数>9000
为什么抗原变异与流行 密切相关？
甲型流感病毒在不同年代的抗原变化
流行年代 1918 ~
亚型 甲0 (原甲型)
表面抗原 HA NA H0 N1
代表毒株*
A/puerto Rico/8/34
1947 ~ 甲1 (亚甲型) H1 N1
A/FM/1/47
1957 ~ 甲2 (亚洲甲型) H2 N2 A/Singpore/1/57
其他试验：补体结合试验、中和试验、 酶免疫试验、固相放免等。
（三）快速诊断
（1）免疫荧光、免疫酶等方法检测感染 细胞或培养细胞中的病毒抗原。敏感、快 速。 （2）分子杂交测病毒RNA：甲型 （3）PCR法测病毒RNA （4）其他：免疫电镜
四、怎样防治流感？
1、一般性预防：
双手要勤洗；打嚏掩口鼻 居室常通风；无事少聚集 脏手勿触口；吐痰包纸里 感冒戴口罩；染疫要隔离
2、接种流感疫苗：（最有效的预防方法）
要求 制备的疫苗必须与流行型别相同
禁忌症 鸡蛋过敏史 免疫缺陷 患病期间
3、治疗：早期隔离治疗
（1）抗病毒治疗 （2）合并细菌感染：抗生素
小结
1、流感病毒的形态结构、变异与流行（掌握） 2、流感的传染源、传播途径（掌握） 3、流感病毒的微生物学检验（掌握） 4、流感的防治原则（熟悉） 思考题：请你对流感病毒的各种微生物学检验方 法在临床的应用价值分别做一评价。 课后：注意查阅流感病毒的相关研究进展及流行 情况
呼吸道病毒及检验
呼吸道病毒：是指主要以呼吸道为
侵入门户，引起呼吸道以及全身感染。临 床上的急性呼吸感染中有90～95%是由这 群毒引起的。
感染特点
主要种类
RNA病毒——
正粘病毒科：流感病毒 副粘病毒科：副流感病毒、呼吸道合胞病毒、
麻疹病毒、腮腺炎病毒； 其他病毒如：风疹病毒、冠状病毒、鼻病毒等
DNA病毒——腺病毒
截至2010年2月28日，全国31个省 份累计报告甲型H1N1流感确诊病例 12.7万例，死亡病例793例
（influenza virus）
流感病毒是一种什么样的病毒？为什么容易 引起流行? 流感如何传播、有何症状？ 如何进行微生物学检查？
怎样防治这种疾病？
一、生物学性状
（一）形态与结构
球形（80～120nm） 形态
参与病毒释放，促进病毒扩散 抗原性——非中和抗体 易变异（分亚型）
亚型（甲型流感病毒）
目前已发现HA有15种（H1-H15），NA有9种 （N1-N9），所有亚型均可从禽、鸟类中分离到， 但带有病毒的禽鸟未必会发病。
人类流行的亚型：
主要是由H1、H2、H3 和N1、N2几种抗原构成。
Fra Baidu bibliotek
流感病毒的传播路 线
观察CPE
红细胞吸附
阳性
血凝抑制试验 补体结合试验
阴性 盲传
3、检验方法
（1） 鸡胚培养
初次分离：接种于鸡胚羊膜腔内
传代：接种尿囊腔
2～4日后：取羊水、尿囊液做血凝试验，检查 有无病毒增殖。若试验为阴性，需在鸡胚中盲 目传代三次后再试验。若血凝试验为阳性，可 用已知流感病毒各型特异性抗体与新分离病毒 进行血凝抑制试验，鉴定型别。
丝状、杆状，长短不一
结构：
分三部分
核心 核蛋白（NP）——衣壳 包膜
1、核心：
含RNA及RNA多聚酶
特点 RNA分节段，7~8段
所以 易发生基因重组，导致基因编码的蛋白抗原发
生变异而出现新亚型。
2、衣壳：核蛋白（NP）
呈螺旋对称 其抗原性稳定，具有型特异性。
核蛋白
3、包膜
内层：基质蛋白（MP），分型依据。 据NP和MP分型：
1968 ~ 甲3(香港甲型) H3 N2
A/Hong Kong/1/68
1977 ~ 甲1
H1 N1 A/USSR/90/77
甲3
H3 N2
2009~ 甲型
H1 N1
*：型/分离地点/编号/分离年份
二、流感病毒的致病性
传染 源
传播途 径
流行季节
主要是病人、隐性感染者、病禽 飞沫（主要）、接触感染 多为冬春季
A型—甲型流感病毒 B型—乙型流感病毒 C型—丙型流感病毒
外层：脂质双层， 来源于宿主细胞膜
（1）血凝素(Hemagglutinin HA) ：（柱形） 凝集红细胞—血凝现象，用于鉴定病毒 吸附宿主细胞—与受体结合（侵入细胞的关键） 抗原性—相应抗体，有中和作用 易变异（分亚型）
（2）神经氨酸酶（Neuraminidase NA）：（蘑菇形）
（2） 细胞培养
原代人胚肾细胞、猴肾细胞、MDCK细胞， 观察CPE。做血凝试验或红细胞吸附试验鉴定。
（3） 动物分离培养
雪貂
（二）血清学试验
取病人急性期（发病3日内）和恢复期 （发病2～4周）双份血清，同样与已知各亚 型流感病毒进行血凝抑制试验或其他试验。 恢复期血清的抗体效价是急性期的4倍或4倍 以上，具有协助诊断意义。
（二）为什么流感病毒易引起流行？
原因
易变异 甲型的HA、NA抗原性最易变异 乙型和丙型流感病毒抗原性比较稳定
（1） 甲型流感病毒抗原变异的幅度小，属于量 变，可引起小规模流感的流行，称抗原漂移 （Antigenic drift）
（2） 若抗原变异幅度大，系质变，形成新的亚 型，可以引起大规模甚至世界性的流感流行，称抗 原转变(Antigenic shift)。
鼻腔洗液、鼻咽拭子、咽漱液、支气管分泌物 （接种前加入青霉素和链霉素）。
时间：发病后3天内（鼻咽分泌物病毒量达104107/ml）；尽快送检；低温保存。
2、检验程序
标本
9~11日龄鸡胚
33~35℃，3d
收获羊水和尿液
阳性
血凝抑制试验 补体结合试验
阴性 盲传3次
MDCK细胞
33~35℃， 7~10d
流感症状
发热、畏寒 咳嗽、咽痛 全身酸痛、疲乏无力 头痛 腹泻、呕吐（部分病人） 重者继发肺炎、呼吸衰竭、甚至死亡
免疫性
包括：体液免疫和细胞免疫 中和抗体(抗－HA) ：SlgA、IgG、IgM 血清中的抗体可维持10年，但仅对同型 病毒有免疫力。
三、微生物学检验
（一）分离培养与鉴定 1、标本采集和处理