表达绿色荧光蛋白重组狂犬病病毒Flury—LEP的构建及其用于中和抗体检测的研究

增 结果均 为 阴性 。应 用该方 法对 临床 病科 的检 测 结果 与培 养鉴 定 结果 的符合 率为 １ ０ ０ ％。表 明该 方 法具 有
良好 的特异 性和敏 感性， 可以应 用 于临床检 测
猪 肺炎 支原体 、 多杀性 巴氏杆 菌和猪 胸 膜肺 炎放 线杆 菌 三重 Ｐ Ｒ检 测方 法 的建 立 Ｃ
Ｅｊ＠ －ｘｓ ｍｚ１ 、ｇ． ａｓｏ ＾ｘ６ ｎｙｍ ｉｍ ＾ｚ ｌ ：ｃ ２ ｒ ｍ
．
ｃｏｍ
科沿 ｜ 技 ｜ 前‘
表达 绿色 荧光 蛋 白重组 狂犬 病病 毒 Ｆｕｙ— Ｌ Ｐ的构 建 及其 用 于 中和抗体 检 测 的研 究 ｌｒ Ｅ
为确 定 狂 犬病 病毒 （ Ｖ Ｆｕｙ Ｌ Ｐ株 外 源基 因的插 入 住 点及 其 中和抗 体 快 速检 测 方 法． 研 究在 建 立 Ｒ ）ｌｒ— Ｅ 本
强的趋 势 。
牛 支原 体双 重 Ｐ Ｒ检测 方 法的建 立 Ｃ
为鉴 剐牛 支原体（ ｃｐａｍａｂ ｖ ） Ｍｙ ｏ ｌ ｏ ｉ － ｓ ｓ ￣丝状 支原 体 丝状 亚种 Ｓ （ ｍｙｏｄ ｓ ｕ ｓ． ｙ ｏ ｅ ｃ 。本 实验通 Ｃ Ｍ． ｃ ｉｅ ｂ ｐｍ ｃｉ ｓｓ ） ｓ ｄ
过 优 化 Ｍ ｏｉ 特 异 性 引 物 ｐ ８一／ ＭＢ １ ２ 和 Ｍｍ Ｃ 特 异 性 引 物 Ｓ １Ｓ ２的 退 火 温 度 ，建 立 了鉴 别 ｂｖｓ ＭＢ １ｌｐ ８ — ｓ ｍＳ Ｃ／ Ｃ
方 法分 别扩增 出 ｌ ６ｂ （ ）２ ３ｂ （Ｍ 和 ４ ３ｂ （ｐ ） 目的 片段 ， １ ｐＭｈ 、５ ｐＰ ） ７ ｐＡ ｐ的 其最 低检 出量为 ４个拷 贝 ： 而对 肺 炎双
球菌、 支气管败 血 波 氏杆 菌、 副猪 嗜 血杆 菌和链 球 菌 的 Ｐ Ｒ扩 增 则 结果 均 呈 阴性 。表 明该方 法 具有很 好 的 Ｃ
应 、 毒 以及 组 织 器官 中病毒 分 布进 行 了观 察 。 结果表 明 ， 源强毒 株 ＪＤ ８ ２和标 准强 毒株 Ｆ ８ ８对 鸭 排 鸭 Ｓ０１ ４Ｅ
具有 强 的致 病性 ， 染鸭 的发 病率 和死 亡 率 高达 １０ 病毒 广泛 分布 于感 染鸭 的 多种组 织 器 官 ｑ 鸽 源 强 感 ０ ％， －
测 ， ＪＰ Ｅ Ｆ ｒＥ — Ｇ Ｐ免 疫 犬血 清经 间接 免 疫 荧Ｌ（ Ａ 或 荧光 下 直接观 察 检 测 Ｒ 中和 抗 体 滴度 ， Ｉ Ｉ ） Ｆ ｖ 两种检 测 结果
显 示较好 的相 似性 （＞ ．５。本研 究 为研 制 以 Ｆｕｙ Ｌ Ｐ株 活栽体 多价 疫 苗奠 定 了基础 ， ｐ ００ ） ｌｒ— Ｅ 并为病 毒 中和抗 体
毒 株 Ｊ Ｐ ２ ４ 鸡 源强毒 株 ＪＣ ８ ４ 鹅 源强 毒株 Ｊ Ｇ ２０以及 疫 苗毒株 Ｍｕ ｔｓ ａ和 Ｌ ｏ Ｓ ００ 、 Ｓ００ 、 Ｓ ０１ ｋｅｗ ａＳｔ ａ对鸭 不 具 有致
病 性 ， 染鸭未 出现 临床 症状 ， 长发 育也 未 受到影 响 。它们在 鸭体 内存在 时 间也较 短 。所有 感 染鸭均 有排 感 生 毒现 象 ， 毒 时 间和排 毒途 径 因病毒 株毒 力 不 同而异 。 果表 明 Ｎ Ｖ在 进 化过 程 中对 鸭 的致病 性有 逐 渐增 排 结 Ｄ
为建 立 简便 、 速及 灵敏 度 高 的 同时 对猪 肺 炎 支原 体（ ｈ 、 杀性 巴氏杆 茵（Ｍ） 快 Ｍ ）多 Ｐ 和猪 传 染性 胸 膜肺 炎 放 线杆 菌（ ｐ ）－ Ｐ Ｒ 的检 测 方 法 ， Ａ ｐ－ ４ Ｃ Ｙ￣ 本研 究针 对 这 ３种病 原 的基 因分 别设 Βιβλιοθήκη Baidu ３对 特异 性 引 物 。通过 Ｐ Ｒ Ｃ
、
今 日畜牧兽医 ｏ １ ２ ０ ０年第 ９ 期
Ｌ ＰｗＬ Ｐ在 Ｎ 细胞 和 Ｂ Ｋ ２ 细胞 中的 生 长动 力 学及 对 小 鼠 的致 病 性 没 有 显 著差 异 。ｒＪＰ Ｅ Ｆ Ｅ （ｔＥ ） Ａ Ｈ 一ｌ Ｉ — Ｇ Ｐ在 Ｅ
Ｂ Ｋ ２ 细 胞 中连 续传代 ９次 。各代 次重 组病 毒 均稳 定表 达 Ｅ Ｆ 。重 组表 达 的 Ｅ Ｆ Ｈ 一ｌ ＧＰ Ｇ Ｐ可用 于 中和 抗体 检
敏 感性 和 特异性 。利用 该检 测方 法 对 某屠 宰场 ４ ２头猪 肺 组 织病 料进 行捡 测 其 结 果 显 示 ： 、 Ｍ 和 Ａｐ ７ Ｍｈ Ｐ ｐ
，
的 阳性 检 出率分 别 为 １ ． ％、．％和 ２ ５ ； Ｅ Ａ检 测 的 阳性检 出率分 别 为 １ ％ ５Ｏ ％和 １９ ９２ ７ ５ ５ ． ％ 而 ＵＳ ７ ８ ．８ ．％ 这 两 种 方 法对 阳性 的 样品检 测 的平 均符 合 率为 ９ ％ ； 外 ， ０ 此 多重 Ｐ Ｒ与病 原 分 离培养 方 法的符 合 率 为 １０ Ｃ ０ ％
的检 测 提 供 了更 为 快 捷 的 新 方 法
不 同禽 源和不 同毒 力新 城疫 病毒 对 鸭的 感染 性
为探 讨 不 同禽 源和 不 同毒 力 的新城 疫 病毒 （ Ｄ ） 对 鸭 的感 染性 、 病 性 以及 鸭 在 家禽 新 城 疫 （ Ｄ ｉ Ｎ Ｖ株 致 Ｎ ） Ｅ
行 中的 意 义 ， 研 究选 用 ７个 Ｎ Ｖ 株进 行 了雏 野 鸭 的人 工感 染试 验 ， 感 染 鸭 的 临床 症 状 、 重 、 体反 本 Ｄ 对 增 抗
Ｍ・ｏ ｉ 和 Ｍｍ Ｃ的双 重 Ｐ Ｒ检 测 方法 。该 方 法能 够 分别 由 Ｍ． ｖｓ ＭｍｍＳ ｂ ｖｓ ｍＳ Ｃ ｂ ｉ和 ｏ Ｃ扩 增得 到 ５ ８ｂ ２ Ｄ和 ２ ０ ７
ｂ ｐ片段 。敏 感性 试 验 结 果 显 示 该 方 法检 测 Ｍ．ｏｉ Ｍｍｍ Ｃ培 养 物 的 最 低 浓 度 分 别 为 １６ ｃ ／ ｂｖ ｓ和 Ｓ ０ ｆ ｍＬ和 ｕ
１ ５ｆ／ 。特 异性 试验 结果 显 示 ， 方 法对 无乳 支原体 代表 株 Ｐ ２ 丝状 支原体 丝状 亚种 Ｌ ０ ｃｕ ｍＬ 该 Ｇ、 Ｃ型代表 株 Ｙ — ｇ ａ、 ｏｔ 山羊支原 体 山羊肺 炎亚种 Ｍｃｐ 绵 羊 支原体 Ｙ ９ 、 鼻 支原体 Ｂ Ｔ ７ 巴氏杆 茵 以及 结核 分枝 杆 菌扩 ｃ、 一８猪 Ｓ一、
了 Ｒ Ｆ ｕｙ Ｌ Ｐ株反 向遗传操 作 系统 的基 础上 ， 建 了表达 增 强型 绿 色 荧光蛋 白ｆＧ Ｐ的 重组 Ｌ Ｐ基 因 ｖ ｌ ｒ— Ｅ 构 Ｅ Ｆ） Ｅ 组 ｃ Ｎ 克 隆 Ｐ ＩＬ Ｐ Ｅ Ｆ 。并成功 拯救 出重组 病毒（ Ｅ Ｅ Ｆ ） Ｌ Ｐ Ｅ Ｆ ＤＡ ｃ— Ｅ — Ｇ Ｐ ｒ Ｐ— Ｇ Ｐ 。ｒＥ — Ｇ Ｐ的 生物 学特性 和 野生 型 Ｌ