疟原虫实验室检查

约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞寄生2 个环状体和一个环状体有2个核。
间日疟滋养体-大滋养体


经8～10小时，虫体增大，胞质增多，伸出 伪足。 出现黄褐色的疟色素。 红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量 较多，淡红色的小点，称薛氏小点
间日疟裂殖体
经40小时晚期滋养体发育成熟， 虫体变圆，空泡消失 核开始分裂又称裂殖体前期 未成熟裂殖体 （immature schizont） 色素聚集成团块
15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻 璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研钵 中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后 置室温下，每天摇动5分钟，3天后 即可使用。
瑞氏染色方法

厚、薄血膜间用蜡笔划一横线。薄血膜不用固 定，厚血膜需溶血。

在薄血膜上滴加瑞氏染液5－8滴，染色2分钟 后，再加与染液等量的水于薄血膜上，用吸管 将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血 膜上，使厚血膜再染色10分钟。用清水轻轻冲 去染液，晾干。
薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别
特征 大配子体（雌）
小配子体（雄）
鉴别要点
间日疟原虫 大于正常红细胞，圆形或 卵圆形，核小，致密，紫 红色，常偏于一边，疟色 素散在于胞浆中 圆形，胞浆淡兰或淡红 色，核大，疏松，浅红 色，常位于中央，疟色素 散在核周 红细胞胀大，薛氏点细 小，染色不好时可看不 见，在同一张血片上可看 到不同阶段的原虫；滋养 体呈活泼阿米巴样

生活史
抗疟原虫治疗


控制临床发作的药物：氯喹、青蒿素类 （青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、双氢青蒿 素）。 防止复发：伯氨喹啉 、磷酸哌喹
实验室检查
血片的制作
血片的染色
疟原虫的镜检
血片制作



载玻片：无油迹、无灰尘，无划痕、清洁 推片：边缘光滑无缺口 采血部位：耳垂、手指、足跟 血液量：薄血膜1-1.5mm3，厚血膜4-5mm3 推片与载玻片的角度：25-30度 大小：薄血膜宽1.5-2cm，厚血膜直径0.8-1cm
大滋养体
裂殖体前期
裂殖体
较大，阿米巴样，空泡明 通常在外周血中看不到。中等大 显，核较大，疟色素细 小，很少呈阿米巴样，疟色素细 小，黄褐色，短杆状 小或块状，金黄色或黑褐色 通常在外周血中看不到。核分裂 较大，核分裂为2个以上， 为2个以上，疟色素结成团块， 疟色素分布不均匀 黑褐色 通常在外周血中看不到。小于正 大于正常红细胞，裂殖子 常红细胞，裂殖子8-36个，疟色 12-24个，疟色素成1或2堆 素成团块状，黑褐色

疟色素分散
间日疟（P. vivax ）鉴定要点
1. 2. 红细胞通 常涨大 薛氏点明 显
3.
4.
成熟环状 体粗大
滋养体有 阿米巴样 伪足 可见不同 发育期的 原虫
5.
恶性疟原虫--环状体



环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大 可见数粒，大小不一，红色粗大的茂氏点 核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫 虫体常位于红细胞的边缘 ，呈“飞鸟状” 不带色素
恶性疟的发育特性

恶性疟原虫由于在发作间歇期，绝大部分 疟原虫要进入内脏毛细血管发育，周围血 液内仅能发现环状体和配子体。 恶性疟在发作期为最适宜的查血时间。

三日疟（P.malariae）诊断要点
1. 环状体可 呈方形
2.
3.
带状形是 特点
成熟裂殖 体呈菊花 状,内含6 ～12个裂 殖子 红细胞不 涨大，略 缩小 有时有西 门氏点
疟原虫抗原检测
鉴别诊断
其他血液寄生虫病（丝虫病、锥虫病、巴贝 西虫病、附红体病等）
谢谢！
恶性疟原虫—大滋养体



一般不出现在外周血 虫体小结实，圆形， 不活动 疟色素集中一团，黑 褐色 原虫此时开始集中在 内脏毛细血管
恶性疟成熟裂殖体


裂殖子8～36个，通常 18～24个，排列不规则 疟色素集中成一团 虫体占红细胞体积的2/3 至3/4
恶性疟原虫雌配子体



新月形，两端较尖 核致密，深红色，常 位于中央 疟色素黑褐色，分布 于核周围

血片的制作—采血
玻片的执持
厚血膜的位置：第2第3格中央
推片边缘沾取少量血液至玻片中部
玻片和推片之间角度25-30度
呈舌状样的薄血膜（2㎝宽）
血片的染色
染色前的处理
薄血膜用甲醇固定
厚血膜进行溶血
薄血膜用甲醇固定
厚血膜必须当天溶血，一般不宜超过 24 小时
经甲醇固定、溶血处理后的血片
血片制作

位置：通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方 法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编 号用；厚血膜在第2、第3格的交界处，薄血膜在 第3格中央至第6格中部。作为标本的血片每张玻 片涂厚、薄血膜各1个。 或将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号 用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前 缘至第6格中部。
疟原虫实验室检查
上海交通大学医学院附属瑞金医院 王剑飚 64370045-600612
背景

疟疾在我国古代称为瘴气，国外称malaria， 为意大利文mala（不良）与aria（空气）二 字合成。本病是由雌按蚊叮咬人体，将其 体内寄生的疟原虫传入人体而引起的。疟 疾是以周期性冷热发作为最主要特征，脾 肿大、贫血以及脑、肝、肾、心、肠、胃 等受损引起的各种综合征
大滋养体 裂殖体 配子体 疟色素 鉴别要点

疟原虫鉴别提示
1. 一般提倡查厚血膜，薄血膜作为原虫虫种的 鉴定。 2. 根据疟原虫的三要素来鉴别 (核 胞浆 疟色 素 ) 。多数情况只要具备疟原虫三要素中的两 个就能加以断定，如只看到疟色素也能断定。 (薄血膜镜检以血膜尾部为主)
3. 世界卫生组织建议，门诊血片至少厚血膜镜 检 100 个视野，薄血膜 300 个视野。
分类

寄生于人体的疟原虫有4种，即间日疟、恶 性疟、三日疟和卵形疟
发病机制

疟原虫在红细胞中增殖成裂殖子，使红细胞胀大 破裂时，大量的裂殖子和疟原虫代谢产物进入血 流，引起异性蛋白反应，机体肌肉收缩产热，网 状内皮系统吞噬细胞功能增强，故可引起肝、脾 肿大，多次发作可致贫血等。
疟原虫在红细胞内增殖成熟所需时间不同，间日 疟和卵形疟为48小时，三日疟为72小时，恶性疟 为24～48小时，故临床上出现周期性发作
4.
5.
三日疟原虫
三日疟原虫
6-12个裂殖 子，排列较 规则，呈菊 花状，疟色 素在虫体中 央，寄生的 红细胞无变 化
卵形疟（P. ovale）诊断要点
1. 红细胞略涨 大或不变大
2. 红细胞边缘 呈车轮状
3. 环状体有时 呈现鱼眼状 4. 薛氏点明显 5. 成熟裂殖体 类似三日疟 原虫,但更粗 大 6. 原虫呈卵圆 形
薄血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别
特征 被寄生的红细胞 外周血涂片 环状体 间日疟原虫 胀大，薛氏点细小数多 各期都有 较大，红细胞直径的1/3， 环粗大，核1个，多虫感染 不多见 恶性疟原虫 正常，3-5个茂氏点粗大 通常只有环状体和配子体 红细胞直径的1/6，环纤细，核12个，多虫感染较常见
恶性疟原虫雄配子体
腊肠形，两端钝圆 胞质色蓝而略带红 核疏松，淡红色，位于 中央 疟色素黑褐色，小杆状， 在核周围较多




恶性疟（P.falciparum）鉴定 要点
1. 环状体纤细, 红细 胞不涨大 2. 一个红细胞内可有 几个环状体 3. 环状体内可有2个 核 4. 环状体可贴在红细 胞边缘 5. 血片中没有其他发 育期，通常只有环 状体和配子体 6. 配子体呈新月形或 腊肠形 7. 可出现茂氏点
下、自左而右逐个视野顺序检查）
显微镜质量
自动化染片
镜检

疟原虫三要素 核---鲜红色 胞浆---蓝色 疟色素---黄褐色或黑褐色，
薄血膜中常见的血液成分
人类四种疟原虫的基本特征
间日疟原虫 恶性疟原虫 三日疟原虫 卵形疟原虫
环状体 滋养体 裂殖体 配子体
疟原虫图谱
间日疟
三日疟
恶性疟
卵形疟
间日疟早期滋养体--环状体
吉氏染色方法

成批染色： 3 ％的吉氏稀释液滴加(或在 染色缸内染色亦可），→ 30 分钟→用水 冲干净，凉干。 单片染色：1毫升蒸馏水加1滴吉氏原液， 染色 30-40 分钟； (或 10%吉氏稀释液， 染色 10-15 分钟) 。其他同上。

瑞氏染液配制
将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入
恶性疟原虫 新月形，核小，致密，深红色， 位于中央；胞浆深兰色，疟色素 密集于核周 腊肠形，两端钝圆；核大，疏 松，淡红色；胞浆浅兰或浅红 色，疟色素松散分布于核周 红细胞不胀大；除重症感染外， 在外周血中只见环状体和配子 体；环状体纤细，常数目甚多； 配子体半月形
厚薄血膜的优缺点
薄血膜
优点
厚血膜
适用 范围
厚血膜中间日疟原虫与恶性疟原虫形态鉴别
特征 环状体 间日疟原虫 恶性疟原虫 核较粗大，核1个；环较 核较小，2个核较常见；环纤 厚，有时缩成伪足状，蓝 细，或缩成哑铃状或丫状，蓝色 色较深 较浅 核1个；虫体较大，胞浆常 通常在外周血中看不到。虫体呈 断裂成数块，其内可见黄 不整圆形，内有巨大的黑褐色疟 褐色疟色素 色素团块 通常在外周血中看不到。裂殖子 8-36个 裂殖子12-24个 圆形，如薄片中所见，稍 大配子体新月形，小配子体卵圆 缩小 形 散在细粒呈金黄色，集成团块后 呈黑褐色 黄褐色，短杆状 在同一张血片上可看到不 同阶段的原虫；可见到有 薛氏点的含虫红细胞轮廓 在外周血中只见环状体和配子体
染液（原液）配方
吉氏染液: •吉氏（ Giemsa ）染剂粉 0.5 克
•甘油
•甲醇
25 毫升
25 毫升
瑞氏染液:
•瑞氏染剂粉 0.2 克
•甲醇
•甘油
100 毫升
3 毫升
（染液配制好后要过滤）
吉氏染液配制

ห้องสมุดไป่ตู้
吉氏染剂粉→研钵→甘油→研磨→甲 醇洗去甘油溶液→有色玻璃瓶中→每 日用力摇动5min，室温 一月后应用。 （此染液为原液）
厚薄血膜的标准

厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 薄血膜平整，无皱折和空泡，红细胞单层排列
血片的制作、染色、镜检中应注意的事项



血量 血膜的厚薄 血膜的固定 染液（原液）质量、陈旧 染液浓度、气温及染色时间 稀释液配制时间 稀释用水的酸碱度 镜检技能（滴加镜油，100倍油镜头检查；自上而


2.1

成熟裂殖体约有12－24个 细胞核 胞浆也随之分裂 受染RBC 胀大、颜色苍白、虫体几 乎充满红细胞
间日疟原虫雄配子体

间日疟原虫雌配子体

虫体较小，占满胀大的红细胞 胞质浅蓝 核大疏松，淡红色，多位于虫体 的中央。 疟色素分散
虫体较大，占满胀大的红细胞 胞质致密，色深蓝 核小致密，深红色，多位于虫 体一侧
用血量少，红细 用血量较多，镜检范围小， 阳性检出率比薄血膜高15胞及其内疟原虫 的形态保持完整， 25倍 易识别
缺点
耗时多，检出率 相对较低。不适 用大规模调查
用于原虫虫种鉴 定
溶血后原虫形态变化大（皱 缩、断裂）；原虫侧影、重 叠；不能借助被寄生红细胞 的变化来帮助鉴别。
推荐使用，特别是疟原虫数 量少、密度低的情况下；适 用大规模调查