糖化酶活力测定实验报告

华南农业大学

综合实验报告

实验项目名称：糖化酶活力测定

实验项目性质：综合实验

计划学时：2学时

所属课程名称：食品与发酵工业分析

班级：10级生物工程1班

姓名：肖佩

学号：************

指导老师：沈玉栋徐振林

一．实验原理

采用可溶性淀粉为底物，在一定的pH值与温度下，使之水解为葡萄糖(还原糖)，以直接滴定法测定。

二．试剂及仪器

（1）碱性酒石酸铜甲溶液（使用时等体积混合甲、乙溶液）：甲液：称取15.693g硫酸铜(Cu2SO4·5H2O)，0.05g次甲基蓝，用水溶解并稀释定容至1000mL；乙液：称取50g酒石酸钠钾，54g氢氧化钠，4g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释定容至1000mL

（2）0.1%标准葡萄糖溶液：准确称取1g无水葡萄糖（预先在100-1050C 烘干），用水溶解，加5mL浓盐酸，用水定容至1000mL。

（3）pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲溶液：

0.2mol/L乙酸溶液：量取11.8mL冰乙酸，用水稀释至1000mL；

0.2mol/L 乙酸钠溶液：称取27.2g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），用水定容至1000mL；

pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲液：取0.2mol/L的乙酸溶液和0.2mol/L的乙酸钠溶液等体积混合。

（4）0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，用水溶解并定容至1000mL。

（5）2%可溶性淀粉溶液：准确称取2g可溶性淀粉（预先于10-105 0C烘干），加少量水调匀，倾入80mL沸水中，继续煮沸至透明，冷却后用水定容至100mL。

（6）固体曲

（7）滴定管、电子天平、烧杯、恒温水浴锅、脱脂棉、容量瓶、移液管、三角瓶

三．测定步骤

（1）5%固体曲浸出液制备：称取5.0g固体曲（以绝干曲计），置于250mL 烧杯中，加90mL水和10mL pH4.6乙酸－乙酸钠缓冲溶液，搅匀，于30℃水浴

中保温浸1小时，每隔15min 搅拌一次。用脱脂棉过滤，滤液为5％固体曲浸出液。

（2）固体曲糖化液的制备：吸取25mL 2％可溶性淀粉溶液，置于50mL 容量瓶中，于30℃水浴预热10min 。准确加入5mL 5％固体曲浸出液，摇匀，立即记下时间。于30℃水浴准确保温糖化1小时。迅速加入15mL 0.1mol/L 氢氧化钠溶液，终止酶解反应。冷却至室温，用水定容至刻度。

同时作一空白液：吸取25mL 2％可溶性淀粉溶液，置于50mL 容量瓶中，先加入15mL 0.1mol/L 氢氧化钠溶液，然后准确加入5mL 5％固体曲浸出液，用水定容至刻度。

（3）定糖

空白液测定：吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5mL ，置于100-150mL 三角瓶中，准确加入5mL 空白液，并用滴定管预先加入适量的0.1%标准葡萄糖溶液，使滴定时消耗的0.1%标准葡萄糖溶液在1mL 以内，摇匀。于电炉上加热至沸腾，立即用0.1%标准葡萄糖溶液滴定至蓝色消失，此滴定操作需在1min 内完成。

糖化液测定：准确吸取5mL 糖化液代替5mL 空白液，其余操作同上。

四．计算

固体曲糖化酶活力定义：1g 绝干固体曲，在30℃、pH4.6、1小时内水解可溶性淀粉为葡萄糖的毫克数。

10001

51005500-0⨯⨯⨯⨯

⨯=W

C V V ）（糖化酶活力 式中：V 0——5mL 空白液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积（mL ）

V ——5mL 糖化液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积（mL ） C ——标准葡萄糖溶液浓度（g/mL ）

50/0.5——0.5mL 糖化液换算成50mL 糖化液中的糖量（g ） 100/5——5mL 浸出液换算成100mL 浸出液中的糖量（g ） W ——绝干曲称取量（5.0g ） 1000——g 换算成mg

五．数据处理与分析

4.1.1数据处理

表1 糖化酶活力测定实验滴定所用滴定液体积

六．数据处理

空白液：Vo=9.80mL

样品液：V=6.30mL。

代入公式可得，糖化酶活力=1400mg

七．结果讨论

实验结果表明试样糖化酶活力为1400mg，根据查找的资料可知本实验所测酶活力偏低。原因如下：

1.实验人员的在吸取、滴定等操作存在误差，导致实验结果有所偏差。

2.制备5%固体曲浸出液时，糖化酶没有完全浸出，造成分解淀粉量减少，滴定所用标准葡萄糖溶液增多，计算所得酶活力减少。

3.进行滴定时，在糖化液滴定过程中，起初由于糖化液浓度较大，滴定时间过短无法统计，后作10倍稀释测定，可能影响实验结果的测定。