HPLC法测定兰索拉唑片在人体内药动学研究论文

HPLC法测定兰索拉唑片在人体内的药动学研究

【摘要】目的采用hplc法测定和研究人体血浆中兰索拉唑的浓度和药动学。方法采用c18柱色谱柱、流动相甲醇-乙腈-水流速为2ml·min-1、进样量20ul、内标物奥美拉唑进行检测。结果兰索拉唑与峰面积比值的线性关系良好（r=0.9998），提取回收率为95.63%。结论 hplc法可适用于兰索拉唑片人体血药浓度的检测，稳定性较高，检测结果理想。

【关键词】 hplc检测法；高效液相色谱法；药物动力学

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.06.564 文章编号：1004-7484（2013）-06-3319-01

兰索拉唑作为一种新型的质子泵抑制剂类的抗胃酸分泌药物，药物通过血液进入患细胞壁之后，在酸性条件之下，药物被活化，同时与质子泵h+-k+-atp酶的巯基相结合[1]，具有高度选择性的阻滞催化胃酸分泌过程的h+-k+-atp酶，由多种化学介质造成的胃酸分泌进行抑制，兰索拉唑在临床上主要用于治疗十二指肠溃疡、胃溃疡和反流性食管炎等疾病，其疗效甚佳，同时对幽门螺旋杆菌的抑制效果甚佳，还能保护和促进胃黏膜的有效愈合。根据药物学分析，兰索拉唑疗效持续时间较长、不良反应较少、治疗夜间的反酸效果甚好，已经广泛使用于临床治疗[2]。本文以hplc测定法对兰索拉唑片人体内的血药浓度进行研究分析，现将其报道如下。

1 仪器和试药

1.1 仪器高效液相色谱仪（agilent 1100）。

1.2 试药选择沈阳药大药业有限责任公司生产的兰索拉唑片，批号为200904114，规格为15mg/片；参比制剂：选择天津武田药品有限公司生产的兰索拉唑口崩片，批号为0406，分装批号为080402，规格为15mg/片。由沈阳药大药业有限责任公司生产提供的兰索拉唑对照品，批号为100708—200602，检测的纯度为99.0%以上；由沈阳圣元药业有限公司生产并提供的奥美拉唑对照品，批号为100456—200602，检测的纯度为99.0%以上。色谱纯：甲醇和乙腈；分析纯：乙醚、二氯甲烷和无水碳酸钠；水：自制的重蒸水。

2 方法和结果

2.1 色谱条件选用由大连中汇达提供的ods c18柱为色谱柱，型号为152mm×4.7mm，5um；以甲醇-乙腈-水为流动相，之比例为16：27：54；规定的流速为2ml·min-1；规定色谱柱的温度为（38-40）℃；检测的波长为286mm；进样量规定为20ul。

2.2 溶液的制备第一，标准系列溶液。称取适量的兰索拉唑对照品，采用甲醇进行溶解，将标准系列溶液制备成为浓度为0.1、0.25、1、5、10和20ug·ml-1的兰索拉唑标准系列溶液。第二，制备内标溶液。称取适量的奥美拉唑对照品，仍然采用甲醇进行溶解，将内标溶液的浓度配置成为5ug·ml-1。

2.3 血浆样品预处理取10ml塞玻璃试管，精确称取100ul内标溶液，于40℃空气流下，将溶剂吹干，再依次加入500ul血浆样品，200ul碱化试剂，萃取3ml乙醚-二氯甲烷，比例为3：2，混合3min 之后，以4000r·min-1的速度离心5min，取出上层有机相，于40℃

空气流下将有机相吹干，再加入100ul流动相，超声2min之后，混匀1min，再将液体转移至eppendorf 试管内，以15000r·min-1的速度离心5min，取出20ul上清液并进样。

2.4 介质效应试验精密称取适量的兰索拉唑标准溶液，置于

10ml的具塞试管内，将其制备成为浓度分别为0.1、0.5和

1.0ug·ml-1的兰索拉唑溶液，于溶液内加入30%的乙腈，促使其总体的面积成为300ul，称取出20ul进样分析。再称取1ml空白血浆放置于10ml具塞试管内，在试管内分别加入标准液，将其浓度制备为0.1、0.5和1.0ug·ml-1的兰索拉唑，按照“

2.3”的步骤进行处理，并取出20ul行进样分析。其结果显示，色谱条件不仅能保证样品与内源性物质和代谢物的完全分离，还能有效研究兰索拉唑的药动学以及对临床使用的检测[4]。在此条件下，观察其色谱峰的峰型显示最好，且血浆中杂志的不干扰测定方法具有较强的专属性。最终得出兰索拉唑的保留时间为15.7min，且内标物的保留时间为7.7min。

2.5 标准曲线及其最低监测限称取1ml的空白血浆，分别加入适量的兰索拉唑标准液，将其浓度制备成为0.05、0.1、0.2、0.4、0.8和1.6ug·ml-1的系列对照品溶液，分别加入20ul的内标液，之内步骤均按照“2.3”的方法处理，然后取出20ul行进样分析。以兰索拉唑与内标峰面积之比为纵坐标、浓度为横坐标，根据其制作成为标准曲线，从而得出回归方程式，y=-7.55×10-4x+0.126（r=0.9998）。其结果显示，0.05-1.62ug·ml-1兰索拉唑与峰面积

比值的线性关系显示良好，定量下限为52mg·ml-1。

2.6 回收率及其紧密度试验按照“2.5”血浆样品的处理方法，将血浆样品分别制备成为0.1、0.5、1.0ug·ml-1各5份，再按照“2.1”色谱条件进样检测，并详细记录好峰面积。根据其标准曲线详细计算出血浆中兰索拉唑的浓度，检测出的精密度和回收率，见表1。

2.7 血浆样品的稳定性试验分别称取“2.5”项下3中浓度的标准血浆样品各7份，分别将其放置于室温下6h、12h、24h，将温度控制于-20℃，然后放置3、5、7、30d，然后考擦其稳定性。其结果显示，于室温和冻融的条件下，血浆样品的浓度无任何影响（rsd<10.83%）。经反复的冻融处理，含量保留的平均值为92.55%，这就证明了反复的冻融对血浆样品的浓度没有任何的影响。

2.8 药物动力学研究给20位正常身体者并自愿参加药学研究者，首先禁食12h，早晨空腹温开水服药，进药4h后再进同一的食谱。研究者于服药前后0.75、1、1.5、2、2.5、3、

3.5、4、5、6、8、10、12h，分别采集4ml静脉血液，并将血浆放置于无菌试管内，将试管放置于温度为-20℃下保存。各个样品在解冻之后按照“2.3”的方法检测血药的浓度。所得到的数据按照das2.1.1药动学程序进行拟合，从而求出药动学的参数：cmax=855.62±249.89ng·ml-1；tmax=2.94±0.72h；t1/2=2.36±0.45h；auc0-12=3.7976±

1.1832mg·ml-1·h-1；auc0-∞=4.0835±1.1823mg·ml-1·h-1。

3 讨论