动物细胞工程高三一轮复习

微量元素 等 无机物：无机盐、 _________ 有机物：糖、氨基酸、促生长因子 (2)营养 动物血清、血浆 ：补充培养液中没有完全搞清 _______________ 楚的成分
(3)温度和
__________ 温度：36.5 ±0.5℃ pH ________ ～7.4 pH：7.2
遗传物质（核型） 的稳定性会降低。 (2)经过多次传代后，供体细胞中________________ 来源 因此，选材时必须关注传代次数。 卵母 (3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其 卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响 原因是________________________________________________ 。 (4)与克隆羊“多莉(利)”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了 __________________________________________________ 已经分化的动物体细胞核具有全能性 核移植技术
C
)
实验 甲 皮肤 乙 皮肤 丙 培养 丁 培养 ――→ ――→ ――→ ――→ 小鼠 组织 细胞 细胞1 细胞2
A．甲过程需要对实验小鼠进行消毒 B．乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
条件
C．丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型 D．丁过程得到的细胞具有异质性
培养过程过程中 细胞变化
阅读题目
圈出关键词
易错·清零
易错点1 动物细胞培养时，可使用胰蛋白酶或胃蛋白酶。
胃蛋白酶适宜pH约为1.8。
胰蛋白酶为7.2～7.8，而动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。
易 错点2 动物细胞培养液中加入 5%CO2的目的是维持气体平衡或用于呼
吸。 目的是“维持培养液的pH”。
易错点3 选择MⅡ末期的卵母细胞作核移植的受体细胞。
MⅡ中期的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中的物质能刺激融
合后重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎。
易错点4 混淆原代培养与传代培养
(1)原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养，没有分瓶前的细胞培养。 (2)传代培养：原代培养的细胞由于空间不足或细胞密度过大导致接触抑 制，需重新用胰蛋白酶处理，进行分瓶扩大培养，即传代培养。
(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的 腹水 中提取、纯化获得。 腹腔 中使其增殖，再从_____ ________ (3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSVⅠ蛋白，其原因是 灵敏度高 特异性强 该抗体具有________ 和________ 等特性。
单克隆抗体
分析考点
考点二、动物体细胞核移植技术 和克隆动物
1．动物核移植概念 (1)供体：动物一个细胞的细胞核 _______。 (2)受体：去掉细胞核的卵母细胞 __________。
结 果
(3)结果：形成重组胚胎，发育成动物个体 ________。
胚胎细胞核移植 2．类型 体细胞核移植 ______________
制备杂交瘤细胞，取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条) 与体外培养的骨髓瘤 细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入PEG诱导细胞融合，经筛选 培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。
(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则 小鼠最少需要经过______ 4 次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只 Y 小鼠， 免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是________ 融合 Y小鼠的抗体效价最高 理由是______________________________________________________ 。
提
将剪碎的组织分散成单个细胞 将贴壁细胞从瓶壁上分离下来 是___________________ ；第二次是_________________ ，目
的是避免动物细胞的接触抑制。 ④将动物细胞分散成单个细胞培养的原因： 保证细胞所需要的营养供应。
醒
保证细胞内有害代谢产物的及时排出。
（3） ．培养条件 (1)无菌、无毒的环境：①对培养液 _______和所有__________ 培养用具 进行无菌 处理。②加入抗生素。③定期更换培养液。
易 难
学生活动：课本P48图，完成学案填空
3．体细胞核移植的过程
选取10代以内的 细胞，因为： 一般能保持正常 _____________ 的二倍体核型 _____________ _。
重组细胞 重组胚胎
阅读题目
圈出关键词
分析考点
1.(2016· 全国课标卷Ⅱ，40)下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动
(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 ___________________________________________________，体系中出现多种类型 细胞的原因是_____________________________________________ 。 细胞融合是随机的，且融合率达不到100% 正常细胞不能无限增殖 (3)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_____________________ 。
物(二倍体)的流程。回答下列问题：
供体 性别
(1) 图中 A 表示 正常 细胞核 ，染 色体数 为 2n ，则其 性染 色体的 组成可 为 ________ XX或XY 。过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当 显微操作去核法 的方法。 选修三 P49 时期再进行，去核时常采用______________
(1)制备过程
杂交瘤细胞
妙学妙记
1、制备过程的 “122” 一融合，二筛选，二培养
能产生特异性抗体
2、单克隆抗体的优点 可、特、灵
(1)优点：特异性强、 灵敏度高 ，可大量制备。
问题强化：
1）、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，动物细胞融合和动物细胞培养原理 2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 继承了双亲细胞的遗传物质，能无限增殖又能分泌特异性抗体。
欢迎大家莅临指导
动物细胞工程
许玉娟 2018.1.10
考试大纲
考点
2016全国
2014全国
自主命题 地区
1.动物细胞 动物细胞培 培养与体细 养与体细胞 2016全国Ⅱ， 胞克隆。Ⅰ 克隆（15%） 40,15分 2.细胞融合 与 单克隆抗 体。Ⅱ 3.生物技术 2015江苏， 中的伦理问 动物细胞融 3,2分 题。 Ⅰ 合与单克隆 2014全国Ⅰ， 2014浙江， 3,6分 抗体的制备。 40,15分 （5%） 2013浙江， 6,6分
2.（海南高考）单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)可引起水泡性口唇炎。 利用杂交瘤技术制备出抗HSVⅠ的单克隆抗体可快速检测HSVⅠ。 回答下列问题：
(1)在制备抗HSVⅠ的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSVⅠ蛋白， HSVⅠ蛋白 一段时间后，若小鼠血清中抗___________ 的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产 脾脏 体液免疫 生了_______ 反应，再从小鼠的_______ 中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小 骨髓瘤 鼠的________ 细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞， 无限增殖且产生特异性抗体 该细胞具有的特点是_____________________ 。
一、过程
教材 P44-45
单个细胞
考点一.动物细胞培养
2次胰蛋白酶
细胞悬液
原代培养
胰蛋白酶等处理贴满瓶壁的细胞， ①先用_________ 50代后 再分瓶继续培养 细胞癌变 10～50 传代培养 传代培养 ② _______代左右时，细胞增殖缓慢，甚至停止 核型 发生改变，获得不死性，能无 ③部分细胞______ 限增殖
细胞代谢 所必需的 O2：__________ (4)气体环境 培养液的pH CO2：维持______________
1.分析命题热图，明确答题要点
阅读题目
圈出关键词
分析考点
如图，为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表 示经筛选、分装后继续培养。据图分析：
(1)原代培养和传代培养的分界点是哪个？
供体核
考点三、动物细胞融合与单克隆抗体的制备
1.动物细胞融合
(1)原理：细胞膜的流动性 __
。
(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒 ___ 、电激等。 (3)意义：突破了有性杂交方法的局限，使 远缘杂交成 为 可 能 ，
单克隆抗体开辟了新途径。 也为制造__________
抗 体
2.单克隆抗体
小结
动物细胞培养
动物体细胞核移植技术 动物细胞工程
胚胎工程
动物细胞融合
单克Biblioteka Baidu抗体的制备
谢谢大家
特
细胞增殖 ①动物细胞培养原理：____________ 。其过程所用培养基一般 液体 培养基。 是_____
别
②动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养，因
分化程度低，增殖能力强，更易于培养。 为_________________________. 胰蛋白酶 ③动物细胞培养过程中两次用到____________ ，第一次的作用
B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。
(2)AB段和DE段繁殖速度缓慢的原因是什么？
发生了接触抑制。
癌细胞
(3)E点后细胞大多数具有异倍体核型，这样的细胞有什么特点？
E点后的细胞属于细胞系，能无限增殖。
[例1]
(浙江高考)实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基 (
本过程如下图所示。下列叙述错误的是
3）、两次筛选目的是什么？
第1次-----杂交瘤细胞（多种）。 第2次-----能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 4）、为什么细胞融合过程中使用病毒需要灭活？不灭活行吗？ 灭活的病毒能使细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
1.(2014·课标卷Ⅰ，40) 研究者用抗原(A)分别免疫3只小鼠(X、Y和Z)，每只 小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原 抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。