红外分光光度法标准操作规程

1.目的：

规范红外分光光度法检验操作，保证检验的质量。

2.范围：

适于本公司红外分光光度法的操作。

3.责任：

质量管理科、中心化验室、检验员。

4.检验依据：

《中国药典》2015年版四部红外分光光度法操作方法。

5.内容

5.1 简述

◆化合物受红外辐射后，使分子的振动和转动运动由较低能级向较高能级跃迁，从而导致对特定频率红外辐射的选择性吸收，形成特征性很强的红外吸收光谱，红外光谱又称振—转光谱。

◆红外光谱是鉴别物质和分析物质化学结构的有效手段，已被广泛应用于物质的写性鉴别、物相分析和定量测定，并用于研究分子间和分子内部的相互作用。

5.2 红外光谱测定操作方法

◆红外光谱测定技术分两类。一类是指检测方法，加透射、衰减全反射、漫反射、光声及红外发射等；另一类是指制样技术。在药物分析中，通常测定的都是透射光谱，采用的制样技术主要有压片法、糊法、膜法和溶液法等。

●压片法：取供试品约1—1.5mg，置玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉约200—300mg（与供试品的比约为200:1）作为分散剂，充分研磨混匀，置于直径为13mm的压片模具中，使铺布均匀，抽真空约2分钟，加压至（0.8±106）kPa，保持压力2分钟，撤去压力并放气后取出制成的供试片，目视检测，片子应呈透明状，其中样品分布应均匀，并无明显的颗粒状样品。亦可采用其它直径的压模制片，样品与分散剂的用量需相应调整以制得浓度合适的片子。

●糊法：取供试品约5mg ,置玛瑙研钵中，粉碎研细后，滴加少量液状石蜡或其它适宜的糊剂，研成均匀的糊状物，取适量糊状物夹于两个窗片或空白溴化钾片（I每片约150mg）之间，作为供试片，另以溴化钾约300mg制成空白片作为补偿。亦可用专用装置夹持糊状物。制备时应注尽量使糊状样品在窗片间分布均匀。

●膜法：参照上述糊法所述的方法，将能开成薄膜的液体样品铺展开适宜的盐片中，形成薄膜后测定。若为高分子聚合物，可先制成适宜厚度的高分子薄膜，直接置于样品光路中测定。熔点较低的固体样品可采用熔融成腊的方法制样。

●溶液法：将供试品溶于适宜的溶剂中，制成1—10%浓度的溶液，灌入适宜厚度的液体池中测定。常用溶剂有四氯化碳、三氯甲烷、二硫化碳、乙烷、环已烷及二氯乙烷等。选用溶液应在被测定区域中透明或仅有中—弱的吸收，且与样品间的相互作用应尽可能小。

试样制备方法除另有规定外，用作鉴别时应按照药典委员会编订的《药品红外光谱集》（2000年版）收载的各光谱图所规定的制备方法制备。具体操作技术可参见《药品红外光谱集》的说明。

●用作晶型、异构体限度检查或含量测定时，试样制备和具体测定方法均按药典各品种项下有关规定操作。

5.3 测量操作注意事项

◆环境条件：红外实验室的室温应控制在15—30℃，相对湿度应小于65%，适当通风换气，以避免积聚过量的二氧化碳和有机溶剂蒸汽。

◆供电电压和接地电阻应符合仪器说明书要求。

◆背景补偿或空白校正记录供试品光谱时，双光束仪器的参比光路中应置相应的空白对照物（空白盐片、溶剂或糊剂等）；单光束仪器（常见的傅里叶变换红外仪）应先进行空白背景扫描，扫描供试品后扣除背景吸收，即得供试品光谱。

◆采用压片法时，以溴化钾最常用。若供试品为盐酸盐，可比较氯化钾压片和溴化钾压片法的光谱，若二者没有区别，则可使用溴化钾。

◆所使用的溴化钾或氯化钾在中红外区应无明显的干扰吸收；预先庆研细，过200目筛，并在120℃干燥4小时后分装并在干燥器中保存备用。若发现结块，则须重新干燥。

◆供试品研磨应适度，通常以粒度2—5um为宜。供试品过度研磨有时会导致晶格结构的破坏或晶型的转化。粒度不够细则易引起光散射能量损失，使整个光谱基红倾斜，甚至严重变形。该现象在4000—2000cm-1高频端最为明显。压片法及糊法中最易发生这种现象。

◆压片法制成的片厚在0.5mm以下时，常可在光谱上观察到干涉条纹，对供试品光谱产生干扰。一般可将片厚调节至0.5mm以上即可避免。也可用金相砂纸将片稍微打毛以去除干扰。

◆测定样品时的扫描速度应与波长校正时的条件一致（快速扫描将使波长滞后）。制成图谱的最强吸收峰透光率应在10%以下，图谱的质量应符合《药品红外图谱集》的要求。

◆使用预先负责制标尺记录纸的色散型仪器，在制图时应注意记录笔在纸上纵横坐标的位置与仪器示值是否相符，以避免因图纸对准不良而引起的误差。

◆压片模具及液体吸收池等红外附件，使用完后应及时擦拭干净，必要时清洗，保存在干燥器中，以免锈蚀。

5.4 结果判定

◆红外光谱在药品分析中，主要用于定性鉴别和物相分析。定性鉴别时，主要着眼于供试品光谱全谱谱形的比较，即首先是谱带的有与无，然后是各谱带的相对强弱。若供试吕的光谱图与对照光谱一致，通常可判定两化合物为同一物质（只有少数例外，如有些光学异构体或大分子同系物等）。若两光谱图不同，则可判定两化合物不同。但下此结论时，须考虑供试品是否存在多晶现象，纯度如何，以及其他外界因素的干扰。多晶现象一般可按照《药品红外光谱集》中所载重结晶处理法排除。其它影响常可通过修改制样技术而解决。由于各种型号的仪器性能不同，试样制备时研磨程度的差异或吸水程度不同等原因，均会影响光谱的形状。因此，进行光谱对比时，应考虑各种因素可能造成的影响。

5.5 常见的外界干扰因素

◆大气吸收

●二氧化碳2350cm-1，667cm-1

●水气3900—3300cm-1 ，1800—1500cm-1

●溶剂蒸汽

◆干涉条纹规律性的正弦形曲线叠加在光谱图上。

◆仪器分辨率的不同和不同研磨条件的影响。

6.文件变更历史：