【免费下载】蛋白含量Lowry法测定标准操作规程

2．2．4 待测样品蛋白质的测定，样品蛋白质浓度的测定过程同 4.2.1 项方法。
表2
样品批号
管号
OD650
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期，放 4℃冰箱备用。
2．2 具体操作步骤
2．2．1 摘下设备上的“备用”标志，挂上“运行”标志，设备的详细操作参
见设备标准操作规程。
2．2．2 取洁净干燥的试管若干，分成二组按下表进行操作。
表1
试管编号 处理 标准溶液（ml）
Dd H2O（ml）
蛋白质（mg/ml）
1．5 其它材料：试管架、吸球、硫酸纸、药勺、记号笔、玻璃比色杯。
1．6 仪器、设备
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
100ml，配好后的液体放 250ml 洁净的玻璃瓶中，盖上胶栓，二人复核，贴签，标
明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期，室温备用。
2．1．3．4 2%酒石酸钾钠：用扭力天平准确称取酒石醋酸钾钠 2 克，加注
射用水至 100ml，配好后的液体放入 250ml 洁净的玻璃瓶中，盖上胶栓，二人复核，
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
化学纯 分析纯 分析纯 分析纯
分析纯 分析纯 分析纯 分析纯
分析纯
分析纯
紫外分光光度仪,UV-265 扭力天平，TN100B 冰箱，BOD-170A 1．7 器皿 试管、量筒（250ml、100ml）、玻璃瓶（500ml、250ml）、棕色磨口瓶 （50ml、500ml）、吸管（1ml、5ml、10ml），以上均由本室洗刷组处理干净。 2 方法 2．1 准备工作 2．1．1 工作环境：控制区确认场地清场合格，摘下“清场合格”标志牌,挂上 “使用中”标志牌。 2．1．2 调试仪器设备 2．1．2．1 紫外分光光度仪，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。 2．1．2．2 扭力天平，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。 2．1．2．3 冰箱，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。 2．1．3 试剂配制 2． 1． 3．1 试剂 A：用扭力天平准确称取 20 克 Na2CO3 溶于 500ml 0.2mol/L NaOH 溶液中，另将 1 克 CuSO4·5H2O 溶于 100ml 2%酒石酸钾钠溶液中，临用前 将二种溶液按 50：1 的比例在 250ml 洁清的玻璃瓶中混合均匀，二人复核，贴签， 标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期。放置 30 分钟，即为试剂 A。 2．1．3．2 试剂 B：在 2 升磨口回流蒸馏器中，向烧瓶中加入钨酸钠 （Na2NO4·2H2O）100 克，钼酸钠（NaMO4·2H2O）25 克 ，蒸馏水 700ml，85% 磷酸 50ml，浓盐酸 100ml，充分混匀后接通回流凝管，沸腾后文火回流 10 小时， 冷却后加硫酸锂 150 克，蒸馏水 50ml 及数滴溴水，摇匀，取下回流冷凝管，开口 继续沸腾 15 分钟，以驱走过量的溴，此时溶液为金黄色，冷却后用蒸馏水定容至 1000ml 放棕色瓶中 4℃冰箱保存，回流整个过程应在通风橱中进行，使用时 2 倍稀 释。二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期，4℃冰箱 放置。 2．1．3．3 0.2M NaOH：用扭力天平准确称取 NaOH 0.8 克，加注射用水至
试剂 A（ml）
试剂 B（ml）
12 0.0
1.0
5.0
34 0.2
0.8
5.0
充分混匀，室温（20℃~25℃）放置十分钟
0.5
0.5
迅速混匀，室温放置 30 分钟，以 1、2 管为空白，打开紫外分光光度仪，挂上 “运行”牌，在波长 650nm 处比色测定。
2．2．3 标准曲线的绘制，将测得的两组平均 OD 值和对应蛋白含量值输入紫 外分光光度仪中，建立回归方程，画出回归曲线，即为标准曲线。
硫酸锂 酒石酸钾钠 硫酸铜 氢氧化钠
无水碳酸钠
溴水
百度文库
Na2WO4·2H2O Na2MOO4·2H2O H3PO4 HCl
Li2SO4 C4H4O6KNa·4H2O CuSO4 NaOH
Na2CO3
Br2
1．3 标准品：由中国药品生物制品检定所提供。
1．4 注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005 年版要求。
56 0.4
0.6
5.0
0.5
稀释倍数
78 0.6
0.4
5.0
0.5
9 10 11 12
0.8
0.2
5.0
0.5
结果（平均值） 蛋白含量
1.0
0
5.0
0.5
2．2．5 将所使用的仪器关闭，拔下电源。 2．2．6 场地摘下“使用中”的标志牌，挂上“待处理”标志牌。 3 结果的判定 3．1 判定标准 取二组测试样品的 OD650 平均值，输入回归方程所得的结果乘以稀释倍数，即 为测试样品的实际蛋白质浓度。 3．2 判定结果、填写记录：测定结果经二人复核并填写纪录。 4 清场 4．1 称药后将药品瓶盖盖紧，放回原处。 4．2 将扭力天平复位，砝码放回原砝码盒，将天平清理干净后放回原处，挂 上备用牌。 4．3 用过的玻璃器皿用纯化用水洗干净后返回洗刷组。 4．4 检查是否关闭所有仪器开关，拔下电源。 4．5 将玻璃比色杯用纯化水清洗干净后放回原处。 4．6 将仪器的“使用”牌取下，挂上“备用”牌。 4．7 用拖布擦净地面，用抹布擦净工作台。 4．8 填写清场记录。 4．9 清场后由车间工序负责人或质量监督员检查合格后，摘下“待处理”牌， 挂“清场合格”标志牌。 5 注意事项 在试剂 B 的配制过程中，蒸馏烧瓶必须冷却后再加硫酸锂，否则试剂容易溅 出。
细胞因子蛋白含量（Lowry 法）测定标准操作规程
依据：《中华人民共和国药典》2005 年版第三部。
范围：适用于细胞因子原液的检定。
目的：检测细胞因子原液的蛋白质含量。
原理： lowry 法是在双缩脲反应的基础上发展起来的。是由试剂 A 和试剂 B
二部分组成。试剂 A 是碱性铜试剂；试剂 B 含有磷钨酸和磷钼酸。在碱性条件下，
蛋白质与碱性铜试剂产生双缩脲反应，形成紫红色的蛋白质与铜的复合物，然后此
复合物中的酪氨酸和色氨酸残基还原试剂 B 中的磷钼酸-磷钨酸，产生深兰色，为
钼兰和钨兰的混合物，其呈色强度与蛋白质浓度呈正相关，可用比色法测定蛋白质
浓度。
内容：
1 材料
1．1 样品：经二人核对好批号后测定。
1．2 试剂
钨酸钠 钼酸钠 磷酸 浓盐酸