【CN110144401A】一种快速检测NTRK基因融合试剂盒及其方法【专利】
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910390114.4
(22)申请日 2019.05.10
(71)申请人 广州安必平医药科技股份有限公司
地址 510663 广东省广州市高新技术产业
开发区南翔三路11号自编7栋
(72)发明人 陈绍宇 何瑰
(74)专利代理机构 广州胜沃园专利代理有限公
司 44416
代理人 张帅
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6886(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
一种快速检测NTRK基因融合试剂盒及其方
法
(57)摘要
本发明涉及NTRK基因融合快速检测方法和
试剂盒,属于分子生物学检测领域。所述的NTRK
基因融合快速检测试剂盒是通过将市场购买对
应探针的BAC克隆使用phi29DNA聚合酶标记制备
得到探针,缓冲液组分通过优化确定,所制备的
试剂盒为可以实现2小时内快速杂交,并可实现
NTRK基因重排的准确判读。本发明所述的检测试
剂盒通过组分优化,检测试剂的商品化能够更好
的辅助现有方法进行肿瘤的准确分层、精准诊
断、治疗,
具有较好的应用前景。权利要求书1页 说明书11页 附图3页CN 110144401 A 2019.08.20
C N 110144401
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110144401 A
1.一种快速检测NTRK基因融合试剂盒,其包括NTRK1基因探针、NTRK2基因探针、NTRK3基因探针和缓冲液。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测NTRK基因融合试剂盒,其特征在于,所述的基因探针制备方法包括购买BAC克隆→标记、测试→确认探针克隆组,具体包括如下步骤:市场购买对应探针的BAC克隆,使用phi29 DNA聚合酶标记,标记后将探针进行定量后包装待用。所述的phi29 DNA聚合酶标记过程包括:以BAC克隆为基础模板,使用phi29 DNA 聚合酶,利用短随机六聚体引物在30℃下扩增,标记时间为12小时。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测NTRK基因融合试剂盒,其特征在于,NTRK1基因探针为断裂探针,其包括GSP NTRK1-G和GSP NTRK1-R,其中GSP NTRK1-G包括CTD-2250P13 chr1:156,729,698-156,838,455,CTD-2193L24 chr1:156,623,234-156,793,355,CTD-2167D21 chr1:156,521,218-156,623,187三个片段;GSPNTRK1-R包括CTD-2260D6 chr1: 156,899,249-157,030,882和CTD-3112E24 chr1:157,028,427-157,158,598两个片段;
NTRK2基因探针为断裂探针,其包括GSP NTRK2-R和GSP NTRK2-G,所述的GSP NTRK2-R 包括CTD-2016D19 chr9:84,588,703-84,695,686,CTD-2509D1 chr9:84,401,922-84,612, 318和CTD-2220B15 chr9:84,264,299-84,394,202三个片段;GSP NTRK2-G包括CTD-2277N18 chr9:84,949,219-85,052,294,CTD-2313B20 chr9:85,052,301-85,167,191和CTD-3171G19 chr9:85,159,856-85,308,599三个片段。
NTRK3基因探针为断裂探针,其包括GSP NTRK3-R和GSP NTRK3-R,所述的GSP NTRK3-R 包括CTD-3108M7 chr15:87,788,057-87,900,751,CTD-2526N1 chr15:87,651,627-87, 863,843,CTD-2600M21 chr15:87,443,620-87,633,446三个片段;GSP NTRK3-G包括CTD-2215J16 chr15:88,135,580-88,287,232,CTD-2349O8 chr15:88,254,463-88,390,482和CTD-2303N16 chr15:88,456,004-88,567,698三个片段。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测NTRK基因融合试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒中缓冲液组分为甲酰胺添加量在15%~50%、硫酸葡聚糖0.2~0.25g/700μL、二甲基亚砜20~30μL。
5.一种将权利要求1-4任一所述的试剂盒用于NTRK基因检测的杂交方法,其特征在于,杂交过程中变性温度为85℃,杂交温度为45℃,杂交时间为2小时。
6.根据权利要求5所述的一种用于NTRK基因检测的杂交方法,其特征在于,所述的基因检测的杂交方法中红色探针用量0.6~0.8μL,绿色探针用量0.8~1.0μL。
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