大规模细胞培养与细胞工厂

细胞培养常用的培养瓶、 培养皿、6孔板、96孔板
贴附生长型细胞
细胞贴附材料与表面
贴附的固相表面材料：玻璃、塑料（聚苯乙烯）
玻璃：本身具有亲水性，适于细胞贴壁 塑料：没有亲水性，不能使细胞贴壁，所以必须在 塑料表面进行亲水性接枝（等离子处理）
（二）悬浮型：
见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。 胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易 大量繁殖。 概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞 特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团 优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)， 易于收获，可获得稳定状态 缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离
细胞工厂的使用
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实验室应用：替代培养瓶及多层培养瓶
细胞培养的评价
• • • • 贴壁率 细胞生长密度 细胞形态 毒力测定
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细胞工厂
细胞工厂
产品与竞争
市场
应用
内容
• • • • • • 一）动物细胞培养与细胞工厂 二）生物制品 三）疫苗 四）现代生物技术与基因工程 五）单克隆抗体与抗体药物 六）干细胞与体细胞治疗
我们熟知的细胞培养——动物细胞培养
动物细胞培养技术
1）无菌环境：超净台、安全柜 2）生长环境：CO2培养箱 3）营养环境：培养基 4）贴壁环境：培养瓶（皿）等、细胞工厂
• DHS大规模细胞培养系统 单页.pdf
Nunc Cell Factory
Corning CellSTACK Chamber
Choice of traditional surface treatment(TC), new Corning® CellBIND® Surface for enhanced cell attachment, or UltraLow Attachment Surface for reduced cell attachment
Corning CellSTACK Chamber
三种细胞工厂的比较
• 材料：均为PS塑料 • 表面处理：各自的Know-how • 顶层：DHS同Nunc, 便于显微镜观察细胞 生长情况 • 焊接工艺：Nunc采用超声焊接，Corning采 用特殊胶粘接，Corning的更加牢固（不易 开裂），所以DHS采用Corning的粘接工艺 • 只有DHS是可以定制任意层的细胞工厂
细胞工厂
• 用于大规模细胞培养与生产
细胞工厂
关键技术： 贴壁处理：高真空等离子接枝表面处理（ know-how: 接枝材料与接枝技术） 材料性能：生物相容性（无细胞毒性） 多层焊接技术：密封性与牢固性 灭菌技术：Y射线辐照
细胞工厂竞争
• Nunc • Corning • DHS
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
DHS 细胞工厂
悬浮生长型细胞
悬浮培养磁力搅拌器
大规模细胞培养
细胞工厂培养技术在大规模细胞培 养中的应用.doc
转瓶培养的缺点
• 转瓶技术为传统的贴壁细胞培养技术，细胞接种 在旋转的圆筒形培养器-转瓶中，培养过程中转瓶 不断旋转，使细胞交替接触培养液和空气。 • 缺点：劳动强度大，占地空间大，单位体积提供 细胞生长的表面积小，细胞生长密度低，瓶间差 异较难控制等，因而难以产业化或规模化生产。 • 重要的是：转瓶由于不是静止培养，产品质量经 常达不到要求或由于细胞易破碎而存在DNA毒性 潜在危险，据称国家准备淘汰转瓶生产技术。
（一）贴附型：
大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞
贴附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本 存在方式
结果: 基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组 织，有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相表面才能生 存和生长。
培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要贴附 于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴附型细胞 贴附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有贴附于固相表面 才能生存的细胞
动物细胞的形态
• 贴壁细胞：细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，依
靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上 生长、增殖，当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态 ，即成纤维样细胞型或上皮样细胞型 • 悬浮细胞：悬浮状态生长，如淋巴细胞、Namalwa细胞 • 兼性贴壁细胞：中国仓鼠卵巢细胞、小鼠L929细胞