样品的采集与处理

即样本平均值能代表总体平均值，否则，分析结果再
“准确”也毫无意义。
总体：分析对ห้องสมุดไป่ตู้的全体
样品：从总体抽出的一小部分样品 采样：从总体中抽出样品的操作过程。
一、样品的采集原则
• 原则：代表性、典型性和适时性。 • 1、代表性：代表总体，各个方向分别采集， • 2、典型性：针对典型样品，有目的。例如：参假 食品的检测。是事件应对中必采的样品。胃内容 物是确定摄入中毒的最好检体，尿是分析非挥发 性毒物的较好检体；血液是最重要的毒物检测样 品， • 3、适时性：有时间概念，例如：发生食品中毒应 及时赴现场采集。
• 全血直接作为样品时，也应加入抗凝剂混匀，防止凝 血。对大多数药物来说，血浆浓度与红细胞中的浓度 呈正比，所以测定全血不能比测定血浆提供更多的信 息。而全血的净化较血浆与血清复杂，尤其是溶血后， 血色素等可能会给HPLC测定带来影响。但是，一些药 物可与红细胞结合，或药物在血浆和红细胞的分布比 率因人而异，在这些情况下，宜采用全血。 • 血样抽取量受到一定的限制。人体药代动力学研究需 要在多个时间点(一般为12~20点)取样，每次由前臂静 脉取血3~5m1。随着高灵敏度测定方法的建立，取样 量可继续降低，从而更易为受试者接受。实验动物取 血量应注意是否超过了动物的生理承受能力。
• 唾液中的粘蛋白决定了唾液的粘度，它是在唾液 分泌后受唾液中的酶催化而生成的。为阻止粘蛋 白的生成，应将唾液在4℃以下保存。如果分析 时没有影响，则可用碱处理唾液，使粘蛋白溶解 而降低粘度。 • 唾液在保存过程中，会放出CO2，而使pH升高， 需要测定唾液pH时，应在取样时测定较好。冷 冻保存的唾液解冻后应将样品混匀后使用，以免 产生误差。 • 只有知道唾液中药物浓度与血清中药物的总浓度 有一定的比值时，唾液中药物浓度的监测才有意 义。
• 萃取体系： • 简单分子，螯合物，离子缔合物，溶剂化 合物 • 萃取条件的选择 • 溶剂：分配比D大，较高选择性，和水的比 重相差较大，无毒或低毒，沸点低 • 溶液酸度：对物质存在形态有较大影响 • 其他试剂：适当螯合剂，配位剂等 • 萃取操作：分液漏斗
• 固相萃取 • 原理：样品中被分离组分和其他组分与萃 取柱中固定相的作用力不同 • SFE • 超临界流体：易溶解其他物质，易进入样 品基体内 • 常用超临界流体：CO2 • 蒸馏：常压，减压，水蒸气 • 挥发：顶空，气体萃取
• 对化学事故（或中毒事件）可供采集的 样品有现场样品（环境、食品、化学品 及其它用品等）及患者的生物材料（血、 尿、胃内容物、组织）。采样时机可以 选在事发现场救助时、医院抢救和治疗 时、甚至在病人恢复时，某些中毒甚至 可在事件发生后数十天仍有可能采集到 有价值的样品。现场遗留的食物、化学 品、盛装的容器是首先应采集的样品
第二章 样品的采集与处理
• 一项分析工作一般包括下列步骤： （1）试 样的采集和制备；（2）定性检验；（3）试 样的分解；（4）干扰的消除；（5）测定； （6）分析结果的计算和评价。
第一节 样品的采集和保存
在定量分析中往往用样本平均值来估计总体平均值。这
就要求进行测定时所使用的分析试样具有高度代表性，
• 4、毛发： • 是许多重金属元素的蓄积库，含量比较 固定 • 可以记录外部环境对肌体的影响。头发 能反映肌体短期内的物质代谢，也能反 映不同阶段的代谢情况。 • 头发易于采集，便于保存。 • 采集的方法：取枕部距头皮2~5cm内的 发段，重量1~2克。 • 5、组织：死尸最好在24~48小时取样。
• 分配系数 KD：溶质在两种互不相溶的溶剂 中分配达到平衡时，该溶质在有机相中的 浓度与其在水相中的浓度之比 • KD 越大，物质越易溶于有机溶剂中 • 分配比 D：分配平衡时，溶质在有机相中 总浓度与其在水相中的总浓度之比 • 萃取百分率 E%：物质被萃取到有机相中的 百分率，也称萃取回收率 • D值大的萃取剂有助于提高萃取效率
• 部分分解法——有机成分 • 酸水解、碱水解、酶水解 • eg：食品中结合态脂肪的测定
• 常用的分离与富集方法 溶剂萃取 固相萃取 固相微萃取 超临界流体萃取 蒸馏与挥发 膜分离
• 溶剂萃取： • 液-液萃取，液-固萃取，液-气萃取 • 原理：物质在互不相溶的两相中分配系数 不同 • 决定因素：物质的疏水性和亲水性
• 3.唾液样的采集 • 由于某些药物在唾液中的浓度与血浆浓度密切相关， 即可利用唾液中的浓度反映血浆中的药物浓度。由于 唾液样品采集时无伤害、无痛苦，取样不受时间、地 点的限制，因而样品容易获得。一般成人每日分泌唾 液1~1.5L。唾液的比重为1.003~1.008，粘度是水的 1.9倍；唾液的pH在6.2~7.6之间变动，分泌量增加时 趋向碱性而接近血液的pH。通常得到的唾液含有粘蛋 白。 • 唾液的采集应尽可能在剌激少的安静状态下进行，采 集前应漱口，除去口腔中的食物残渣，唾液自然分泌 流入收集管中。采集后离心，分取上清液作为药物浓 度测定的样品。 • 也可采用物理方法(嚼石蜡片等)或化学方法(广泛应用 的是柠檬酸或维生素C等，有的将约10mg柠檬酸结晶 放在舌尖上，或者将10%的柠檬酸溶液喷在舌上，弃 去开始时的唾液后再取样)刺激，使在短时间内得到大 量的唾液，但这样可能影响唾液中的药物浓度。
• 膜分离法：透析，超滤，液膜 • 原理：选择性渗透 • 动力：外界能量或化学位差 • 样品衍生化处理 • 原理：通过化学反应将样品中难以检测的 组分定量的转化成另一组易于检测的组分 • 目的：扩大分析方法使用范围 • 提高分析方法的灵敏度
样品处理时要求：
• • • • 1、必须分解完全，不能造成被测组分的损失 2、样品不能被污染。 3、试剂消耗尽可能少 4、样品处理器皿应与样品量相适应
二、样品处理方法
• 样品溶液制备 游离态——溶解法 水溶法：水溶性成分 酸性水溶液浸出法：在酸性水溶液中溶解度增 大且稳定的成分 碱性水溶液浸出法：在碱性水溶液中溶解度增 大且稳定的成分 有机溶剂浸出法：易溶于有机溶剂的成分
• 制备血浆样品时，将采取的血样置含有抗凝剂的试管中， 缓缓转动试管使其充分混合、离心，所得上清液即为血 浆。常用的抗凝剂有肝素，它是体内正常的生理成分， 因而不会改变血样的化学组成或引起药物的变化，一般 不会干扰测定。通常lml血液采用20个单位的肝素即可 抗凝。可将配制好的肝素溶液均匀地涂布在试管壁上， 于60~70℃烘干备用。其它抗凝剂有柠檬酸、草酸盐、 EDTA等，但它们可能引起被测组分发生变化或干扰某 些药物的测定。制备血清样品时，将采取的血样在室温 下至少放置30~60min，待血液凝固后，以 3000~4000r/min离心10min，分取上层澄清的血清。
• 结合态——分解法
• • 全部分解法——无机成分 • • 干灰化法 • （1）高温灰化，450~550℃。 （2）低温灰化，高频等离子体技术。 • 湿消化法 • 硝酸、硫酸、高氯酸、高锰酸钾、过氧化氢 • 硝酸—硫酸消化、 • 硝酸-高氯酸或硝酸-过氧化氢消化 • 硝酸-硫酸-高氯酸消化
• 密封加压消化法 • 密闭罐消化，防止挥发性元素损失 • 微波溶样法
• (二) 水样 • （三）食品 • 随机抽样、系统抽样、指定代表性样品 • （四）生物材料 • 生物介质(biological matrix)包括全血、 血浆、血清、尿、毛发、唾液和各种组 织。其中最常用的生物样品是血液和尿 液。
• 1.血样的采集 • 供测定的血样应能代表整个血药浓度。若能从动脉或 心脏取血最为理想，但只能用于动物，不能用于人。 动物采血可根据不同种类及实验需要，采取适当的方 法。如大、小鼠可由尾动脉、静脉、心脏、眼眶取血 或断头取血等，家兔可由耳缘静脉、颈静脉等多处取 血，犬可由前、后肢静脉等处取血。对于受试者通常 采用静脉取血(成人从肘正中静脉取血，小儿从颈外静 脉取血)。静脉取血一般将注射器针头插入静脉血管抽 取。抽取的血液转移至试管或其它容器时应缓缓压出， 以防血细胞破裂。 • 全血在加肝素或柠檬酸、草酸盐等抗凝剂后，离心分 取血浆，其体积约为全血的一半。血清则是由血液中 纤维蛋白原等影响下，引起血块凝结而析出，离心取 用，而血块凝结时往往易造成药物吸附的损失。
第二节 样品的处理
• 一 、样品处理的目的 • 血浆(plasma)和血清(serum)是体内药物分析经常 采用的样本，其中尤以血浆最为常用。因为药物 在体内达到平衡状态时，血浆中药物浓度一般与 药物在作用部位的浓度密切相关，可以反映药物 在靶器官的状况。 • 进行HPLC分析时，生物样品一般都需要进行纯 化处理。对纯化程度的要求，取决于使用的分析 方法及样品所含杂质情况。仅有少数情况下可取 样品直接进样，对于大多数样品而言，进行预处 理是必要的。
• 2.尿样的采集 • 尿药测定主要用于药物剂量回收、药物代谢及生物利用度研究， 也可用于乙酰化代谢和氧化代谢快、慢型测定等。因为尿药浓度 通常变化较大，所以应测定一定时间内排入尿中药物的总量，这 就要同时测定在规定时间内的尿量(体积)及尿药浓度。 • 尿液的主要成分是水、尿素及盐类。它是一种良好的细菌培养基， 因而需立即冷藏或防腐处理，否则细菌会很快繁殖而引起尿素分 解，产生氨气，这在夏天进行得很快，除产生异常气味外，还有 可能导致样品分解。冷藏条件一般可置4℃冰箱内。若欲在室温 下保存，应在收集尿样后，立即加入防腐剂。常用的防腐剂有甲 苯、氯仿或改变尿液的酸碱性，以抑制细菌的繁殖。加入的防腐 剂是否干扰测定或与被测组分发生化学反应，应由实验验证，以 便选取合适的防腐措施。 • 在所有体液样品中，尿样最容易获得，并且样品量大，取样次数 可以增加，内含药物(母体药物及代谢物)浓度高。健康人的尿液 中不含蛋白质，不需除蛋白，所以常用作药物体内代谢研究。
• • • •
采样时应避免样品污染和被测组分的损失 选择合适的采样器具和采样方法 详细完整记录采样环境 至少采集两份样品，用于分析和保存
二、样品的保存
• 1、密封保存法 • 2、冷藏保存法 • 3、化学保存法
• 存放容器的选择 • 存放容器的清洗 • 存放时间
三、各类样品采集方法简介
• （一）、空气样品：气体样品为均匀样品。 可采用直接法和浓缩法。 • 1、直接采样 • 2、浓缩采样： • （1）、溶液吸收法。（2）、固体吸附剂 阻留法。（3）、滤纸膜阻留法（4）冷阱 收集—低温浓缩 • 采样装置：收集器，流量计，采样动力