新鲜马齿苋中总黄酮的提取及其凝胶剂的制备

目的：本文探究了新鲜马齿苋中黄酮的最佳提取纯化工艺，对不同提取纯化方法得到的提取液中黄酮含量进行分析比较，并且将通过最佳提取工艺得到的提取液制成凝胶剂，分析该凝胶剂的安全性。
方法：以黄酮含量为指标，对新鲜马齿苋采取浸渍、榨汁、煎煮这三种方法提取，优选提取方法。以最优提取方法制得的提取液为主药，设计凝胶剂配方，采用研磨法制备凝胶剂。
结果：利用浸渍、榨汁、煎煮这三种不同的方法从新鲜马齿苋中提取总黄酮，含量结果分别为：0.21mg/mL，0.294 mg/mL，0.48 mg/mL。由测定结果可知新鲜马齿苋煎煮液中的总黄酮含量最高。将马齿苋煎煮液制得的浓缩液作为主药，以卡波姆940为基质，甘油，聚山梨酯，氢氧化钠，乙醇，羟苯乙酯作为辅料，加入蒸馏水至1000g制成马齿苋凝胶剂。通过透皮吸收实验表明透皮吸收良好。
结论：煎煮提取的总黄酮含量最高，该方法操作简洁、方便、新颖，有较高的准确度、专属性，并且准确度较好，可以作为研究新鲜马齿苋中总黄酮的最优提取方法；透皮吸收实验表明马齿苋凝胶剂安全性高。
关键词：新鲜马齿苋；黄酮；凝胶剂
近些年来,随着科学技术的蓬勃发展和人民生活水平蒸蒸日上,食品卫生问题备受越来越多的人关注,尤其是微生物导致的食品腐败和化学添加剂带来的毒害。长期食用某些变质食品, 可致癌、致畸、致突变[1]。然而天然防腐剂能有效的控制这类现象的发生,因此,从天然植物中提取抑菌活性物质,并开发为食品防腐剂将极具社会意义和发展前景。经研究表明马齿苋中含有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物能够破坏菌体的细胞膜,使其内容物外漏,这种抑制作用还能保护食品的色泽和风味不发生变化,而且这种作用很稳定,可使食品的保鲜时间延长[2]。因此，研究新鲜马齿苋中黄酮的最优提取方法为抑菌作用的研究奠定了坚实的基础，具有重要的意义[3]。
1.1 马齿苋的概述
1.1.1植物形态和来源
马齿苋宽叶苋叶片大而肥厚，窄叶苋植株矮小；观赏苋花小、鲜艳[3]。广泛分布在我国温带和热带地区，高寒地区几乎没有分布。能适应各种环境，比如： 干旱、洪涝、寒冷、高温、阴暗，也不易受病虫害的影响。当秋季果实成熟盖裂后，种子落地，借助雨水传播[4]。
1.1.2化学成分
马齿苋全草的化学成分复杂多样。含有异黄酮类化合物，主要有料梁木素-7-O-葡萄糖和料梁木素；含有香豆素类，主要有佛手柑内酯、东莨菪亭、异茴香内酯、大叶桉亭等；含有大量不饱和脂肪酸，主要有á-亚麻酸、亚油酸、山嵛酸、棕榈酸、花生酸、硬脂酸、肉豆蔻酸；含有大量无机盐，主要

有钙盐、钾盐。除此马齿苋全草中还含有生物碱类、酚类、萜类、氨基酸等一些活性物质。鲜马齿苋中含有丰富的L-去甲基肾上腺素、多巴胺和少量的多巴等神经递质类成分，还含有一种特殊的甜菜黄素，其具有荧光酶活性。
1.1.3药理作用
马齿苋具有抗菌消炎作用，对志贺菌和大肠埃希菌有较强的抑菌效果，水煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和绿脓杆菌等有明显抑制作用；马齿觅水提液具有抗肿瘤作用，能抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，提高淋巴细胞增值能力；马齿觅中含有大量抗衰老成分如硒元素、维生素及胡萝卜素等，能延缓衰老、延长寿命；调节糖代谢的作用，能促进、调节胰岛细胞分泌、合成胰岛素，降低血糖浓度；马齿觅能清除氧自由基，改善血液流变学作用，抑制动脉粥样硬化，预防血小板聚集、抗血拴形成，从而很好地调节和保护心血管系统；马齿觅能显著提高家兔植物血凝素的增殖能力从而诱导淋巴细胞增殖，从而增强免疫力 [5] 。
1.1.4临床作用和开发利用
临床上常用马齿苋类药物治疗肺结核、皮肤溃疡、急性阑尾炎、结膜下注射局部并发症、新生儿脐炎及虫蛇咬伤、治疗糖尿病、炎症、瘙痒症、肠胃保护、鼻疔等疾病[6]。在开发利用方面,马齿苋主要涉及药品、保健食品、化妆品、护发品日用品及动物饲料等,是极具开发前景的中药材[4]。吴晓等通过对马齿苋酸奶的研究，研制出质地细腻，不出现分层现象，没有气泡产生，不仅具有酸奶特有的风味，还具有新鲜马齿苋散发出的香草味[7]。
1.2 黄酮提取工艺
1.2.1 浸渍提取
陈孜铜等酿制葡萄酒，是采用四种浸渍方法，这四种方法分别为正常浸渍法、高温浸渍法、低温浸渍法、后浸渍法。从葡萄酒中一些内在物质的含量和外观性状来判断最佳提取工艺。比如测定葡萄酒中酒精、总酚、总酸的含量，观察制得的葡萄酒外观颜色及颜色深度。实验结果说明，这四种浸渍方法中后浸渍法是最优酿制工艺[8]。
梁学军结合自身的生产实践经验，以理论知识为依据，得出二氧化碳浸渍法酿造的葡萄酒有着不同的特点这一结论。二氧化碳浸渍法是将没有腐烂的新鲜葡萄放入充满二氧化碳的且与空气隔绝的密封瓶中若干天的一种酿酒工艺，二氧化碳的来源包括外界提供的，裂开的葡萄无氧呼吸产生的，或者是两种途径都有。二氧化碳浸渍法酿造的葡萄酒是通过多种酶的相互催化作用，具效率高产量多的优点。然而二氧化碳浸渍法酿造的葡萄酒也有不足的地方，比如不易选择合适的葡萄种类；对葡萄的生长环境要求严格；不宜长期贮存；采收新鲜葡萄时耗费大量劳动力增加了成

本，实验经验说明在实践中只有充分了解了酿酒技术的优点和缺点，充分利用好优点同时尽可能改善缺点才能在生产过程中以最大程度发掘葡萄的优良品质[9]。
孙敬方等人利用固相浸渍法制作了NiO/CeO2一类的催化剂, 将这种方法和常规湿浸渍法比较, 考察了催化剂和CO氧化反应性能受到制备方法的影响。1.2.2榨汁提取
杨治富等人将红旱菜作为原料，对它的不同部位都采取榨汁的方法来提取红色素。主要步骤是分别取等量洗净的红旱菜的叶、茎、根，捣碎再用榨汁机榨汁[9]。王永根等人取适量且洗净的苹果片，利用研磨过滤器和榨汁机这两种机器榨取苹果汁，研究苹果汁中的果胶酶受到的影响，比较分析实验结果可知通过研磨过滤的方法对果胶酶的影响较小[10]。石杏琴将柑桔全果进行榨汁，分别取等量的榨汁液放入洗净的离心管中。然后对称放入离心机中来离心分离除去榨汁液中的果浆[11]。
1.2.3煎煮提取
安玉秀等人通过正交实验来选取赤芍的最佳提取工艺以及它的提取工艺参数。实验方法：以赤芍中的芍药苷含量为判断标准, 利用正交实验来优化提取工艺。实验证明用十倍量的水提取四次，每次两小时这一条件下的芍药苷提取效率最高，化学性质稳定，所以该方法宜工业生产[12]。
刘险峰取等量银翘散汤剂，比较探索不同的煎煮方法得到的煎煮液对抗炎解热作用的效果，他UI及挑选八名将发热患者随机分为四组，分别为、传统煎煮汤剂组、高压煎煮汤剂组和常压煎煮汤剂组、空白对照组，通过对四组发热患者与正常体温比较，表明服用传统煎煮银翘散汤剂组患者体温从4h逐步下降，4h至7h持续降温，差异明显[13]。
陈金月等人制备驻车方汤剂，通过比较微波煎煮法与传统煎煮法提取效率，结果发现微波煎煮法和传统煎煮法的煎煮效果不相上下, 但传统煎煮法比微波煎煮法消耗的时间和能量更少，他们得出结论：传统煎煮法可以被微波煎煮法替代[14]。
1.2.4其他工艺提取
张特立等人通过超声提取法和回流提取法来提取马齿苋中的总黄酮，分析哪种方法得到的总黄酮含量较高,实验结论:回流提取法较好，可落实 ,能用于马齿苋总黄酮的提取[6]。 翟硕莉利用超临界CO2萃取马齿苋中总黄酮，采用单因素和正交实验方法,从萃取压力、萃取温度、萃取时间、夹带剂用量4个因素上对超临界CO2萃取技术萃取马齿苋中总黄酮进行了研究并探索最佳萃取工艺条件[7]。
1.3黄酮含量测定
1.3.1紫外分光光度法
紫外分光光度法又称紫外可见吸收光谱法，采用紫外可见吸收光谱，对物质进行定性、定量分析，紫外可见光区波长的单位一般用nm表示，光区可分为远

紫外区，近紫外区和可见光区。通过测定分子紫外吸收光谱，可以定性鉴别具有共轭体系化学结构的无机或有机化合物、定量测定单一组分或多组分样品，或与其他分析方法配合解析有机化合物分子结构[15]。
梁璇采用紫外分光光度法测定百合知母汤中的黄酮的含量，得到结果： 黄酮的最大吸收波长为256nm，由线性回归方程可知稳定性良好，重现性良好[16]。
1.3.2高效液相色谱法
高效液相色谱法是色谱法的一个重要分支，包括正相色谱和反相色谱。正相色谱采用的洗脱剂为苯-乙睛或者苯-丙酮液体，常用于分离无羟基、甲基化或乙酞化的黄酮类化合物。反相色谱常用的洗脱剂为甲醇-水-乙酸或磷酸缓冲液或者乙睛-水，常用于各种黄酮类化合物的分离。特点：高压，高效，高灵敏度，分析速度快，用时少，流动选择范围广，该方法应用范围广[17]。
彭金咏等人用半制备型反相高效液相色谱，取若干白花败酱草，将氯仿作为萃取剂，进行分离制备，得到白花败酱草异戊烯基黄酮。王国光等人采用反相高效液相色谱制备广金钱草黄酮对照品[17]。
1.3.3薄层层析法
将一定量的混合试样溶液置于薄层板一端确定位置，在相对密闭的容器中用适当的展开剂展开，通过物理或者物理化学的方法观察组分斑点的移动距离，根据比移值和相对比移值及斑点大小进行定性定量分析的方法称为薄层色谱法。常用的吸附剂有硅胶和氧化铝。它的特点是微量快速，使用云纯物质的鉴定和混合物的分离提纯及含量的测定，根据分离原理不同，薄层层析可以分为吸附薄层层析和分配薄层层析[18]。
邓双等人为了测定了黄芩中有效成分黄芩苷的含量，运用薄层色谱新型内标法；沈宁将基于数字图像原理的薄层扫描色谱技术应用于南五味子中五味子甲素含量测定,证明该分析方法简便快速、经济可靠[18]。
1.4中药凝胶剂
1.4.1中药凝胶剂定义
中药凝胶剂是指药物与适宜的辅料混合，通过研磨发出“噼啪声”，制成凝胶状的半固体的一类药物。中药凝胶剂是以中药提取物为主药，将它与凝胶混合在一起，通过外部给药的方式，经过透皮吸收达到为患者进行治疗的目的。可口腔、阴道、直肠、皮肤等多种途径给药[19]。
1.4.2中药凝胶剂的研究现状
周彤研究了复方紫草凝胶剂的制备，采用正交试验的办法来挑选中药材紫草的最佳提取工艺,利用高效液相色谱法进行含量测定,建立了左旋紫草素的含量测定方法。她的实验中还提及到其他三种药材，这三种药材分别为黄柏、当归、苦参。对他们的指标性成分分别进行含量提取、成分鉴别和含量测定。实验结果表明,四种药材的指标性成分在