人用狂犬病疫苗质量控制研究 李玉华

人用狂犬病疫苗质量控制研究
李玉华 中国食品药品检定研究院 2015年11月19-20日 广州
National Institutes for Food and Drug Control
主要内容
狂犬病在我国的流行情况及疫苗的作用探讨 狂犬病疫苗的生产情况及特点 狂犬病疫苗质量控制 狂犬病疫苗质量控制方法的研究
并使用规定代次： 来源、历史清楚 不同批的工作种子也不能混用 能满足制品质量可控性要求，保证产品批间一直性的毒种库量
保存温度、时间应符合符合规定
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细胞基质
人用狂犬病疫苗生产用细胞：
原代地鼠肾细胞 Vero细胞： 人二倍体细胞：MRC-5，2BS， KMB
＜ 50ng/剂
欧洲药典
无检测项 无检测项
效期内2.5IU/剂 无
无
WHO规程
无要求 如添加则需检测，按NRA标准 执行 不要求
效期内2.5IU/剂 批签发可做单一稀释度法 不要求
不要求
宿主细胞蛋白残留 PHK：24 µg/剂
Vero：4 µg/剂
Vero细胞DNA
不高于100pg/剂
无要求
无要求
原液中检测 不高于10ng/剂 原液中检测 不高于10ng/剂
我国人用狂犬病疫苗的质量控制——批签发
为了加强狂苗质量管理，2005年8月国家药监局将狂犬病疫苗 作为第一个二类疫苗纳入批签发管理。
批签发前提：药品批文号、GMP证 批签发方式：采用批记录摘要审查和实验室检验相结合
批记录审查+部分检验 （中检院） 批记录审查+全检检验：新申请批签发、工艺发生变更、 质量出现偏差等（中检院） 无菌和异常毒性检查（授权的省药检所） 批批全检（进口疫苗，中检院） 依据：企业注册标准和国家药典
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批签发依据
（冻干）人用狂犬病疫苗（vero细胞）质量标准
检验项目
鉴别试验
外观 水分（冻干） pH值 效价测定 牛血清白蛋白残留量 抗生素残留量 Vero细胞DNA残留量 Vero细胞宿主蛋白质残留量 无菌检查 异常毒性检查
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我国人用狂犬病疫苗流行及疫苗效果
狂犬病是由狂犬病病毒感染引起神经系统损伤性疾病， 一旦发病，几乎100%死亡， 给人们的健康构成了严重威胁。
历史上出现了3次流行发病高峰：1956年(1942例)、1981年(7037例)、2007年(3300例) 1981年达到建国以来最高发病水平,7000余例。 1990年代中期，疫情得到有效控制，1996年仅报告159例。 “疫苗大量使用/疫苗效价提高/政府出台限制养犬条例等” 2007年，再次升高达到3300例/年：之后采取了一系列联防措施、养犬管理、疫苗暨 被动免疫制剂质量监管等。
种毒
成品质量控
冷冻干燥
转瓶、细胞工厂、生物反应器
病毒培养
收获病毒液
保护剂研制
半成品质量控制
澄清过滤
柱层析纯化
超滤浓缩 灭活
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国内人用狂犬病疫苗生产工艺
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狂犬病疫情自2007年达到高峰以后，自2008年持续下降，2012年 全国报告1400例狂犬病例；2014年全国报告924例狂犬病例。
2014年发病数首次降低到924例，比2007年高峰期下降了234%。
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批签发内容
批签发资料审核--审查表
原材料
成品
趋势分析
生产全过程的控制
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毒种
生产用毒种：获得国务院CFDA 批准； 建立毒种三级种子库：原始种子批、主种子批、工作种子批，
地鼠肾细胞宿主蛋白质残留量
应不高于24μg/剂
酶联免疫法
无菌检查 异常毒性检查
应无菌生长
薄膜过滤法
接种小鼠和豚鼠，结果判定时应动物健存，体重增加，无异常 反应
动物法
细菌内毒素
应不高于50EU/剂
凝胶限度法
2015年版中国药典： 液体剂型人用狂犬病疫苗已经不再被收录。 National Institutes for Food and Drug Control
检验方法 酶联免疫法
外观
应为澄明液体，无异物
灯检法
装量
pH值
硫柳汞 效价测定 牛血清白蛋白残留量 抗生素残留量
应不低于标示量
7.2～8.0
应不高于50μg/ml 不低于2.5IU/剂,出厂标准≥4.0IU/剂 应不高于50ng/剂 应不高于50ng/剂
重量法
电位法
滴定法 NIH法 酶联免疫法 酶联免疫法
我国狂犬病疫苗标准与国际标准比较（3）
成品检定
检定项目
pH 硫柳汞 灭活剂 效价 热稳定性
抗生素残留
2010年版中国药典
7.2-8.0 ＜100µg/剂， 冻干剂不允许添加加 甲醛100µg/ml β-丙内酯不检测 出厂标准≥4.0IU/剂 效期内2.5IU/剂 液体：37×14天 冻干：37×28天 效价仍≥2.5IU/剂
病毒收获 无要求 5 液鉴别
无检测项
要求鉴别实验，确认为狂犬 病毒
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我国狂犬病疫苗标准与国际标准比较（2）
编号 检定项目 5 6 原液检定
7
2010年版中国药典
欧洲药典
WHO规程
病毒灭活验证
病毒灭活验证
病毒灭活验证
21
100.6
117
669.2
2012
批
人份
28
48.4
345
798.2
2013
批
人份
228
287.6
115
291.1
2014 批 75 179
人份 138.5 483.6
2015
批
人份
249
521.7
121
282.7
／
／
／
／
／
／
85
212.6 73
231.6
4
3.0
11
8.2
／
／
／
／
／
／
／
／
／
／
／
生产用细胞基质：获得国务院CFDA 批准；
建立细胞三级种子库，原始细胞库、主细胞库、工作细胞库 每级库的代次应符合规定；不能超过研究结果和国际上公认的最高限定
我国人用狂犬病疫苗的质量管理
制度及措施
法规
• 疫苗上市许可 上市前 • 许可证制度
• 批签发制度 上市
• 国家计划性抽验 上市后
《中华人民共和国药品管理法》 《中华人民共和国药品管理法实施条例》 《中华人民共和国药品注册管理办法》 《药品非临床试验质量管理规范》（GLP） 《药品临床试验质量管理规范》（GCP） 《中华人民共和国药典》 《药品生产质量管理规范》（GMP） 《生物制品批签发管理办法》 《疫苗流通和预防接种管理条例》 《药品不良反应报告和监督管理办法》 …………………………….法规、条列等等
蛋白残留量：
无检测项
不高于80µg/剂
抗原含量：
免疫学方法，检测糖蛋
ELISA法检测，按批准 白含量，在允许的限度
的标准执行
内
无检测项
抗原含量： EELISA法检测糖蛋白
原液生产的一 无要求 致性监测体系 8
无要求
要求： 企业内部建立以病毒滴 度和抗原含量为指标的 生产一致性监测体系
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细菌内毒素
质量标准 采用酶联免疫法检查，应证明含有狂犬病病毒抗原
检验方法 酶联免疫法
应为澄明液体，无异物
应不高于3.0% 7.2～8.0 不低于2.5IU/剂,出厂标准≥4.0IU/剂 应不高于50ng/剂 应不高于50ng/剂 应不高于100pg/剂
灯检法
费休氏法 电位法 NIH法 酶联免疫法 酶联免疫法 斑点杂交法
我国狂犬病疫苗标准与国际标准比较（1）
编号 检定项目 2010年版中国药典
欧洲药典
WHO规程
毒种 1
aG株： PHK或Vero细胞 PM株：Vero和二倍体细 例举出的毒种：
CTN株：Vero细胞生产 胞
CTN
PM株：人二倍体细胞，国 Flury株：鸡胚细胞 Vnukovo -32;
外引进
PM
PV株： Vero ，国外引进
1.0ml/瓶 液体
1.0ml/瓶 液体
程序
5针、4针
5针 5针 5针 5针 5针 5针
5针 5针 5针 5针
MRC-5
Nation1a.l0Inmslti/tu瓶te，s for冻Fo干od and Drug Contro5l针
人用狂犬病疫苗的生产工艺及质控点
Vero PHKC MRC-5
CTN、PV、aG、PM株
我国人用狂犬病疫苗的生产现状
企业名称
辽宁成大
广州诺诚 辽宁依生 吉林迈丰 长春长生 宁波荣安 吉林亚泰 大连汉信 兰州所 河南远大
中科生物
成都康华
生产用毒种 PV
aG CTN aG aG aG aG aG aG aG
aG
PM
细胞病毒培养 发酵罐
发酵罐 转瓶 发酵罐 发酵罐 转瓶 转瓶 转瓶 转瓶 转瓶
转瓶
发酵罐
生产基质
Vero细胞
Vero细胞 Vero细胞 Vero细胞 Vero细胞 Vero细胞 PHK细胞 PHK细胞 PHK细胞 PHK细胞
PHK细胞
规格剂型 0.5ml/支，冻干，
0.5ml/支，液体 1.0ml/支，冻干 0.5ml/支，冻干 1.0mL/支， 液体 1.0mL/支， 液体 1.0mL/支， 液体 1.0mL/支， 液体 1.0mL/支， 液体 0.5ml/支，冻干
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2011-2015年批签发情况
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2011年-2015年批签发批次和人份数及其变化
企业
细胞 基质
辽宁成大
剂型
冻干 液体
长春长生
冻干 液体
宁波荣安 Vero 冻干
广州诺诚
液体 冻干
吉林迈丰
液体
河南远大 中科生物
PHKC
大连汉信
液体 液体
液体
兰州所
液体
成都康华 印度诺华
合计
MRC-5
鸡胚 细胞
冻干 冻干
规格
0.5 0.5 0.5 0.5 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
2011
批
人份
Flury
生产用 地鼠肾原代细胞(PHK） Vero细胞
细胞 2
Vero细胞 二倍体细胞
二倍体细胞 鸡胚原代细胞
鸭胚
病毒收获 6.0logLD50 (Vero细胞) 需检测，无标准
3 液的病毒 5.5logLD50（PHK细胞） 滴度
病毒收获 无菌、支原体
无检测项
4 无菌和支 原体检查
全部推荐 要求测定，不规定合格标准 无菌、真菌、支原体
我国1950-2014年报告狂犬病
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狂犬病疫苗质量的提高使狂犬病疫情大幅度下降
系列举措促进了狂犬病疫苗质量的显著提高。 2005年狂犬病疫苗实施批签发，有佐剂疫苗停止签发。 2007年加强监管，多次飞行抽检。 2009年DNA残留纳入批批检。 上市后疫苗的市场监督评价性抽验。 2010年药典增加了抗生素、宿主蛋白指标、放行效价不低于 4.0IU/剂。
／
40
78.8
100
210.7
13
14.4
3
5.9
1
2.1
／
／
／
／
65
116.8 131
286.3 59
119.3 149
301.2 49
107.9
13
10.6
93
75.1
71
85.2
3
4.6
3
2.3
／
／
／
／来自百度文库
／
／
26
33.2
64
52.7
／
／
／
／
／
／
／
／
23
17.2
52
37.6
37
24.2
32
18.7
应不高于4μg/剂
酶联免疫法
应无菌生长
薄膜过滤法
接种小鼠和豚鼠，结果判定时应动物健存，体重增加， 无异常反应
动物法
应不高于50EU/剂
凝胶限度法
National Institutes for Food and Drug Control
批签发依据
人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）质量标准
鉴别试验
检验项目
质量标准 采用酶联免疫法检查，应证明含有狂犬病病毒抗原
15
9.1
／
／
8
31.5
10
27.0
／
／
／
／
／
／
／
／
／
／
／
／
3
6.3
14
21.0
15
17.2
29
31.0
／
／
／
／
／
／
447
1262.4 902
1814.0 615
1074.0 602
1342.8 696
1447.6
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