T7E1酶切法进行基因敲除小鼠的基因型鉴定

T7E1酶切法进行基因敲除小鼠的基因型鉴定：

下面是举例：

T7E1酶切法检测突变体小鼠实验步骤：

1、PCR扩增target site周围序列（一般设计500bp左右， target site 最

好不位于中央，这样将酶切出两条大小不同的带）。

2、将实验组与对照的PCR产物按如下体系进行退火处理（95℃5min，自然

冷却至室温）

3、

理中，37℃反应30min后跑2%的琼脂糖凝胶电泳检测分析突变效果。

根据TALEN形成的突变位置和PCR引物的位置，PCR产物为642bp, 若发生突变后，用T7E1酶切，将产生约为：520bp和120bp的两条突变型的带。

下面三种情况来判断小鼠或细胞为野生型、杂合子、纯合子

1）纯合子小鼠：样品小鼠的PCR产物自我杂交，经T7E1酶切，只有一种带型（与野生型带大差不多）；而样品小鼠的PCR产物与野生型鼠PCR产物杂交，出现两种带型（突变体带+野生型带）。

2）杂合子小鼠：样品小鼠的PCR产物自我杂交，经T7E1酶切，出现两种带型（突变体带+野生型带）；而样品小鼠的PCR产物与野生型鼠PCR产物杂交，也出现两种带型（突变体带+野生型带）。

3）野生型小鼠：样品小鼠的PCR产物自我杂交，经T7E1酶切，只有一条带；而样品小鼠的PCR产物与野生型鼠PCR产物杂交也出现一种带。