纯化大肠杆菌

5.倒平板
待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作
①
②
①在火焰旁右手拿 锥形瓶 ，左手 _______ 拔出棉塞 _______.
③
④
5.倒平板
待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作
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②锥形瓶的瓶口
①
②
迅速通过火焰 ________________ 。
③
④
5.倒平板
待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作
成分 NaNO3 K2HPO4 琼脂 MgSO4· 7H2O
含量 3 g 1 g 15 g 0.5 g
纯化大肠杆菌
1、本实验所用的培养基是牛肉膏蛋白胨固体培养基
2、本实验可分成配制培养基和纯化大肠杆菌两个阶段。
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.计算： 根据配方比例，计算配制100mL培养基的用量 2.称量： 3.溶化：将各成分加水溶解并定容至100mL。 4.灭菌：培养基、培养皿 5.倒平板： 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
思考5：锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？ 消灭瓶口杂菌，防止杂菌感染培养基。 思考6：倒平板的目的是什么？ 防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。 思考7：若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培 养微生物？为什么？ 不能，空气中的杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污 染皿内的培养基。
二、纯化大肠杆菌
③左手将培养皿
①
②
打开一条缝隙 右手 ______________,
将培养基倒入培养皿 ___________________, 立刻盖上皿盖。
③
④
5.倒平板
待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作
④待平板冷却凝固 后，将平板
①
②
倒过来放置 ________________ 。
③
④
5.倒平板
3、下表所示为某微生物培养基的配方，请回答： 成分 含量 FeSO4 0.01 g (CH2O) 30 g H 2O 1 000 ml 青霉素 0.1万单位 固体 培养基。依用 （1）物理性质，该培养基属于________
选择 培养基。 途划分，则属于________ ⑵根据培养基原料，所培养微生物的同化作用的类型 异养型 。（异养型/自养型） 是 ___________
1.平板划线法 用带有微生物的接种环在固体培养基表面通过连续划线 而纯化分离微生物的一种方法。
1.将接种环在酒精 2.在酒精灯火焰旁冷却接 灯火焰上灼烧直至 种环，并打开大肠杆菌的 烧红 菌种试管的棉塞。
二、纯化大肠杆菌
1.平板划线法
3.将菌种试管口通过火焰达 到消灭试管口杂菌的目的
4.将冷却的接种环伸入到 菌液中沾取一环菌液
二、纯化大肠杆菌
1.平板划线法
5.将菌种试管口再次通过火焰 后塞上棉塞
6.将皿盖打开一条缝隙，把接种 环伸入平板内划3～5条平行线， 盖上皿盖，不要划破培养基。
二、纯化大肠杆菌
1.平板划线法
7.灼烧接种环，冷 却后从第一区划线 末端开始向第二区 域内划线。重复上 述过程，完成三、 四、五区域内划线。 注意不要将第五区 的划线与第一区划 线相连。
巩固练习
1、培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气所 采用的灭菌、消毒方法依次是( ) ①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④
C．⑥②③④①
B．①②③④⑤
D．③④②①⑥
巩固练习
2、获得纯净培养物的关键是 ( ) Ａ．将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基 等进行灭菌 Ｂ．接种纯种细菌 Ｃ．适宜环境条件下培养 Ｄ．防止外来杂菌的入侵
琼脂20.0g
牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O 5g 10g 5g
定容至1000ml
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
思考3：在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中， 动作要迅速，原因是什么？ 防止牛肉膏吸收空气中的水分
思考4：溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？
防止琼脂糊底而导致烧杯破裂
8.将平板倒置 放在培养箱中 培养
二、纯化大肠杆菌
思考8：取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 消灭接种环上的微生物。 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 消灭接种环上的残留菌种。 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？ 防止高温杀死菌种 最后灼烧接种环的目的是？ 防止细菌污染环境和操作者 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？ 获得由单个细菌形成的标准菌落