肥达氏反应的操作规程

肥达氏反应的操作规程

[实验原理]

本法是以伤寒"O"，"H"；甲、乙、丙副伤寒分别培育，经甲醛处理杀死后，做成菌液供肥达氏应用，用以伤寒的辅助诊断。

[操作方法]

1、取康氏试管，排成5×7形式，5 排分别编成O，H，A，B，C；

2、另取大试管一支，加入病人血清0.25ml，用4.75ml生理盐水作1:20稀释，取2.5ml该稀释血清于每排第一管内分别注入0.5ml；

3、再取2.5ml生理盐水把大试管内血清作2 倍稀释，取2.5ml该稀释血清于每排第二管内分别注入0.5ml，以此类推，每排最后一管加0.5ml生理盐水作阴性对照，各稀释度：1/20，1/40，1/80，1/160，1/320。然后于前六管中逐管加入1:10稀释的各菌液0.5ml，各终稀释度：1/40，1/80，1/160，1/320，1/640。

4、充分振荡混匀，于37℃放置16-20小时判定结果。

[结果判定]

根据凝集反应的强弱和有无，分别以4+，3+，2+，1+，-，记录，以呈现(2+)的血清最高稀释度为终点效价。

4+：液体清澈透明，菌体全部被凝成块，沉于管底。

3+：液体较透明，大部分菌体被凝集而沉于管底。

2+：液体稍透明，管底有少量凝集沉淀物。

1+：液体较混浊，可见极少量凝集物。

-：液体混浊，细菌因重力下降于管底呈边缘光滑圆点（与对照管相似）。

[结果分析]

ⅰ）首先应考虑当地正常人效价（正常效价）。一般以单份血清凝集效价：0效价应达1：80以上、H效价应在1：160以上，PA和PB应达1：40以上方有诊断价值；若病程中第2次血清效价比第1次高4倍以上亦有诊断价值。

ⅱ）由于H凝集素在血内保持时间较久，0凝集素较短暂，所以曾接种过伤寒、副伤寒菌苗者，

0凝集效价在诊断上较重要。

ⅲ）真正的伤寒病人，0凝集素常较H凝集素出现早、但维持时间较短；H凝集素出现较晚、但效价较高且持续时间较长。

ⅳ）回忆反应：过去曾接种过伤寒、副伤寒菌苗或患过伤寒、副伤寒病，近期又发生感染如流感、肝炎、结核病等，可非特异地产生较高的H凝集素和较低的0凝集素，此现象称为回忆反应。

ⅴ）若0效价高而H不高（对正常效价而言），则可能是感染早期或与伤寒杆菌0抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。

ⅵ）确诊为伤寒的患者中，约有10%的患者该试验始终阴性或效价不高，故阴性结果不能排除伤寒的诊断。

ⅶ）采血时间不同，肥达式反应的阳性率也不同。发病第1周约为50%；第2周80%；第4周90%以上。恢复期效价最高，以后逐渐下降，直至转阴。一般以双份血清（急性期和恢复期）对比，效价有明显上升者作为新近感染的指征。

[注意事项]

1、应在光亮处观察管底凝集状态，轻轻摇动判定结果，不能剧烈振荡。

2、菌液稀释后应及时使用。

3、菌液中有摇不散的凝块时，不能使用。

4、应在标签载明的有效期内使用。